么俊卿++葉惠芬

[摘要] 目的 探討血站的核酸標(biāo)本冷鏈運(yùn)輸保存的方法和效果。方法 按照《血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）中標(biāo)本運(yùn)輸?shù)囊?，模擬在車輛運(yùn)輸?shù)臈l件下，使用不同的保存方法，測(cè)試運(yùn)輸箱內(nèi)標(biāo)本的保溫時(shí)間（即標(biāo)本運(yùn)輸溫度保持在2～10℃的時(shí)間）。研究共分3組，第1組：標(biāo)本運(yùn)輸箱底部放置一塊4℃冷源板；第2組：標(biāo)本運(yùn)輸箱底部放置一塊冷源板，四周隨機(jī)選取兩面各放一塊冷源板，共三塊冷源板；第3組：標(biāo)本運(yùn)輸箱底部放一塊冷源板，四周各放一塊冷源板，共五塊冷源板。結(jié)果 模擬車內(nèi)開空調(diào)環(huán)境，調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度為23～27℃，濕度為30%～70%，第1、2、3組運(yùn)輸箱保溫時(shí)間分別為：（0.16±0.02）h、（6.16±0.37）h和（13.78±0.71）h，兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2197.474，P<0.05）。結(jié)論 一塊冷源不能滿足核酸標(biāo)本運(yùn)輸?shù)囊螅瑪[放3塊冷源和5塊冷源，可以確保核酸標(biāo)本運(yùn)輸保存的溫度在適宜范圍內(nèi)，為輸血安全提供保障。

[關(guān)鍵詞] 血液中心；核酸標(biāo)本；運(yùn)輸與保存；冰源

[中圖分類號(hào)] R446.11 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）07-128-03

The method and effect analysis of cold chain transportation of

nucleic acid sieve

YAO Junqing YE Huifen

Dongguan Blood Center， Dongguan 523000， China

[Abstract] Objective To investigate the ways and effects of blood sample cold chain transportation preservation in the blood center. Methods According to the requirements of Blood Stations Technology Operation Procedures （2015 edition）， the holding time of the samples in the transport cases （the time of samples transport temperature holding between 2 to 10℃） were tested by different preservation methods， simulated the condition of transportation by vehicles. The samples were divided into three groups. The first group were used one piece of cold source plate at the bottom of the transport cases .The second groups were used three pieces of cold source plate， one piece were placed at the bottom， and the others were placed at two sides selected randomly. The third groups were used five pieces， one placed at the bottom， and the others were placed at each side. Results To simulate the condition in vehicles with air condition to regulate the temperature of a laboratory to 23-27℃， humidity to 30%-70%，the holding time in the first， the second and the third groups were （0.16±0.02）h、（6.16±0.37）h and （13.78±0.71）h， respectively. There was significant difference between the two groups （F=2197.474， P<0.05）. Conclusion One piece of cold source cannot reach the requirement of nucleic acid samples transportation. Three and five pieces can ensure that the temperature of the transportation of nucleic acid samples is within the appropriate range， which can guarantee the safety of blood transfusion.

[Key words] Blood center； Nucleic acid samples； Transportation and preservation； Cold source.

目前我國(guó)血站輸血相關(guān)傳染性疾病的血液篩查普遍采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）方法，該方法的靈敏度和特異性雖然在不斷地改進(jìn)和提高，但由于方法學(xué)本身的局限性，感染者“窗口期”獻(xiàn)血、病毒變異、隱匿性感染及其他因素仍然可能引起輸血后HBV、HCV和HIV等病原微生物感染[1]。核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)（nucleic acid amplification technologies，NAT）可以縮短病毒特異抗原和抗體免疫測(cè)定的“窗口期”[2-3]，是提高血液安全的有效措施[4-7]。但是核酸檢測(cè)與ELISA相比在檢測(cè)過(guò)程的各個(gè)環(huán)節(jié)上均有其特殊之處，這些環(huán)節(jié)若缺乏嚴(yán)格的質(zhì)量控制，會(huì)導(dǎo)致血液核酸檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

根據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）》中標(biāo)本運(yùn)輸?shù)囊?guī)定，核酸標(biāo)本的運(yùn)輸溫度要求為2～10℃[8]，核酸標(biāo)本的保存溫度和時(shí)間會(huì)對(duì)標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生一定的影響[9]。為了保證核酸標(biāo)本的質(zhì)量，滿足核酸檢測(cè)的要求，本研究探討了東莞市中心血站的核酸標(biāo)本運(yùn)輸與保存的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本運(yùn)輸箱

采用深圳市淳德科技有限公司生產(chǎn)的專用標(biāo)本運(yùn)輸箱，型號(hào)：LX-25A，外尺寸：400mm×310mm ×360mm，內(nèi)尺寸：340mm×250mm×300mm。

1.2 冷源板

采用深圳市淳德科技有限公司生產(chǎn)的冷鏈專用4℃冷源板（又名冰盒），規(guī)格：263mm×183mm×23mm，預(yù)先放置于-30℃低溫冰箱冷凍保存10～24h，保證內(nèi)部完全結(jié)冰，使用前在室溫下解凍1～3min。

1.3 核酸標(biāo)本

采用BD Vacutainer一次性使用真空靜脈血樣采集容器采集標(biāo)本，而本研究采用本站已經(jīng)超過(guò)國(guó)家要求保留時(shí)間，需要銷毀的核酸標(biāo)本，標(biāo)本按照要求，保存在標(biāo)本專用冰箱里，保存溫度在2～8℃。標(biāo)本血容量符合采血管標(biāo)注的采集量，即5mL，無(wú)嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸、凝血、滲漏、稀釋。標(biāo)簽條形碼清晰，無(wú)血漬、無(wú)劃痕，粘貼符合要求，標(biāo)本血漿和紅細(xì)胞被分離膠隔離。

1.4 溫度記錄儀

選擇Elitech RC-5 U盤溫度記錄儀（江蘇精創(chuàng)電氣股份有限公司），溫度檢測(cè)范圍-30℃～+70℃；精度±0.5℃。RC-5 U盤溫度記錄儀在使用之前經(jīng)過(guò)華南國(guó)家計(jì)量測(cè)試中心廣東省計(jì)量科學(xué)研究院計(jì)量校準(zhǔn)。校準(zhǔn)合格后使用。該溫度記錄儀設(shè)定每1min自動(dòng)記錄一次溫度。

1.5 溫度監(jiān)測(cè)方法

第1組：標(biāo)本運(yùn)輸箱底部放置一塊4℃冷源板；第2組：標(biāo)本運(yùn)輸箱底部放置一塊冷源板，四周隨機(jī)選取兩面各放一塊冷源板，共三塊冷源板；第3組：標(biāo)本箱底部放一塊冷源板，四周各放一塊冷源板，共五塊冷源板。

冷源板放進(jìn)標(biāo)本箱后，監(jiān)測(cè)標(biāo)本箱內(nèi)溫度，直到標(biāo)本箱內(nèi)溫度低于10℃，放入核酸標(biāo)本50支，標(biāo)本和冷源之間用隔離網(wǎng)墊隔開，開始監(jiān)測(cè)箱內(nèi)溫度變化。

Elitech RC-5 U盤溫度記錄儀設(shè)定每1min自動(dòng)記錄一次溫度，直到標(biāo)本箱內(nèi)溫度超過(guò)10℃，三組方法各監(jiān)測(cè)10次，讀取記錄標(biāo)本箱溫度在2～10℃的保溫時(shí)間，最后導(dǎo)出數(shù)據(jù)整理結(jié)果。

1.6 環(huán)境要求

模擬運(yùn)輸標(biāo)本的血液運(yùn)輸車環(huán)境，調(diào)節(jié)室內(nèi)溫度和濕度，保持室溫在23～27℃，濕度在30%～70%。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選擇SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)選擇（）表示，三組整體對(duì)比采用方差分析，兩組比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 核酸標(biāo)本檢查

RNA易受外界環(huán)境的影響，標(biāo)本保存過(guò)程中不能發(fā)生溶血等現(xiàn)象，觀察放在三組標(biāo)本運(yùn)輸箱中的核酸標(biāo)本外觀，上清液清亮無(wú)重度溶血，重度脂血，黃疸，稀釋等，符合接收要求。

2.2 三組標(biāo)本運(yùn)輸箱的保溫時(shí)間比較

第1、2、3組標(biāo)本運(yùn)輸箱保溫時(shí)間（即箱內(nèi)溫度在2～10℃范圍內(nèi)的時(shí)間），第3組和第2組明顯長(zhǎng)于第1組，結(jié)果見表1。

3 討論

隨著我國(guó)對(duì)采供血工作的重視，社會(huì)對(duì)輸血安全的關(guān)注程度越來(lái)越高，各種相關(guān)法律、法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)相繼出臺(tái)，這對(duì)血站的管理提出了更高的要求[10]。冷鏈?zhǔn)且惶子糜谘汉蜋z測(cè)標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)南到y(tǒng)，冷鏈管理要為血液質(zhì)量和標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果有效性提供保障，其中核酸標(biāo)本的運(yùn)輸和保存直接影響標(biāo)本質(zhì)量和檢測(cè)結(jié)果，是冷鏈管理的一個(gè)關(guān)鍵控制點(diǎn)。

由于核酸檢測(cè)對(duì)象的特殊性，即檢測(cè)的靶核酸DNA、RNA不穩(wěn)定、極易降解，在核酸檢測(cè)中，標(biāo)本的采集、運(yùn)輸和保存對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果有決定性的影響[11]，核酸檢測(cè)結(jié)果的可靠性有賴于采集足量的樣本和正確的運(yùn)輸。有研究表明[12]，標(biāo)本在室溫放置一段時(shí)間后，病毒的檢出率較存放于4℃環(huán)境時(shí)，有一定比例的下降，所以一般要求樣本在4℃保存條件下6h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，然而現(xiàn)行常規(guī)采血流程使血站各采血點(diǎn)的標(biāo)本在當(dāng)天晚上才能送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，從采集到檢測(cè)，中間相隔11～12h，其中運(yùn)輸時(shí)間約為2～3h，難以滿足上述要求，在此情況下，為保證標(biāo)本質(zhì)量，運(yùn)輸和保存的冷鏈非常重要。

本研究顯示，第1組標(biāo)本運(yùn)輸箱保溫時(shí)間為（0.16±0.02）h，沒有達(dá)到運(yùn)輸時(shí)間2～3h的要求，所以我們不能采取放置一塊冰源的方法來(lái)運(yùn)輸核酸標(biāo)本；第2、3組標(biāo)本運(yùn)輸箱保溫時(shí)間分別為（6.16±0.37）h和（13.78±0.71）h，兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。研究結(jié)果表明室溫在23～27℃，濕度在30%～70%條件下，放置三塊冷源板和五塊冷源板，可以滿足核酸標(biāo)本運(yùn)輸和保存要求，我們應(yīng)根據(jù)標(biāo)本運(yùn)輸路程長(zhǎng)短選擇合適的冷源板數(shù)量。三塊和五塊冷源板只能起到保溫的作用，不足以給標(biāo)本降溫并維持運(yùn)輸溫度。本血站現(xiàn)行采集標(biāo)本的模式是根據(jù)實(shí)時(shí)熒光PCR法對(duì)標(biāo)本的要求，在采血點(diǎn)設(shè)置冰箱，并且配備離心機(jī)。采集后的核酸標(biāo)本保存在2～6℃冰箱中，并在4h內(nèi)離心后再放入標(biāo)本運(yùn)輸箱內(nèi)，最后由血液標(biāo)本運(yùn)輸車運(yùn)送回實(shí)驗(yàn)室。

核酸標(biāo)本的運(yùn)輸與保存對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的可靠性具有重要的意義，不過(guò)我國(guó)很多血站很少采用全程的溫度監(jiān)控設(shè)備來(lái)自動(dòng)進(jìn)行溫度記錄，溫度監(jiān)控記錄和核酸標(biāo)本交接記錄大多為人工填寫，血站對(duì)于核酸標(biāo)本的運(yùn)輸缺少有效的監(jiān)督和管理機(jī)制，冷鏈上并沒有形成完善、真實(shí)的一體化管理。因此，在核酸標(biāo)本的運(yùn)輸與保存冷鏈管理對(duì)策中，要根據(jù)《血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制指南》和自身的采血流程制定一系列措施。標(biāo)本在采血現(xiàn)場(chǎng)保存在血液專用保存冰箱內(nèi)，溫度控制在2～6℃范圍內(nèi)，采集后的標(biāo)本在4h內(nèi)實(shí)施離心，分離紅細(xì)胞和血漿；參考國(guó)內(nèi)外經(jīng)驗(yàn)，利用移動(dòng)式溫度監(jiān)控設(shè)備進(jìn)行連續(xù)自動(dòng)全程監(jiān)控[13]；同時(shí)盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，合理規(guī)劃路線，做好標(biāo)本交接工作，并記錄時(shí)間和溫度等原始數(shù)據(jù)。

本次模擬測(cè)試使用專用標(biāo)本運(yùn)輸箱和4℃冷源板來(lái)運(yùn)輸和保存標(biāo)本，是因其性能穩(wěn)定、密封性較好，既能保證標(biāo)本運(yùn)輸和保存的溫度要求，又能滿足防水、防破損、防外泄、易于消毒處理等生物安全要求，值得在血站推廣應(yīng)用[14]。當(dāng)然，由于國(guó)家沒有統(tǒng)一要求，全國(guó)各地血站的具體情況不同，大家使用的運(yùn)輸箱和冷源各不相同，也曾有報(bào)道應(yīng)用自行研制的標(biāo)本運(yùn)輸箱能滿足核酸標(biāo)本運(yùn)輸?shù)囊螅胰〉煤芎玫谋匦Ч鸞15]，因此各地血站可以根據(jù)自身的采血模式、當(dāng)?shù)貧夂蚝铜h(huán)境以及標(biāo)本運(yùn)輸和保存的實(shí)際需求制定適合自己的標(biāo)本冷鏈管理。總之，核酸標(biāo)本的保存和運(yùn)輸要求非常嚴(yán)格，正確的標(biāo)本保存對(duì)于檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性意義重大，為此筆者認(rèn)為要對(duì)冷鏈管理進(jìn)行不斷改進(jìn)，確保核酸標(biāo)本的質(zhì)量，從而為臨床用血提供安全保障。

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（收稿日期：2017-01-27）