聶剛　張茜玲

【摘要】 目的：觀察益生菌對結(jié)直腸腺瘤患者內(nèi)鏡下切除術(shù)后腸道菌群的影響。方法：選取40例結(jié)直腸腺瘤患者，以10例健康體檢者作對照為正常組，采集糞便標(biāo)本，測定腸道菌群，觀察不同組間患者腸道菌群構(gòu)成變化。將40例結(jié)直腸腺瘤患者隨機(jī)分成3組：手術(shù)對照組10例，內(nèi)鏡下切除術(shù)后不予益生菌治療；美常安組患者15例，在結(jié)腸鏡下切除腺瘤后給予美常安（枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊）口服（2粒，3次/d）；培菲康組患者15例，在結(jié)腸鏡下切除腺瘤后給予培菲康（雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊）口服（2粒，2次/d）?？偗煶叹鶠?周，分別采集術(shù)前和術(shù)后的糞便標(biāo)本進(jìn)行檢測，對比兩種益生菌對腸道菌群的影響。結(jié)果：結(jié)直腸腺瘤患者存在腸道菌群紊亂，與正常組相比，結(jié)直腸腺瘤患者糞便中的糞腸球菌、雙歧桿菌及乳桿菌數(shù)量明顯下降，而大腸桿菌數(shù)目明顯上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），擬桿菌數(shù)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與術(shù)前比較，服用兩種益生菌后患者糞便中的雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量均上調(diào)，而大腸桿菌數(shù)量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；糞腸球菌的數(shù)量較術(shù)前有所上升，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；擬桿菌數(shù)量在治療前后比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：結(jié)直腸腺瘤患者存在腸道菌群改變，益生菌制劑可使結(jié)直腸腺瘤患者的有助于恢復(fù)腸道菌群，在結(jié)直腸腺瘤的治療中有重要的臨床意義。

【關(guān)鍵詞】 大腸癌； 結(jié)直腸腺瘤； 腸道菌群； 益生菌

Effect of Probiotic on Intestinal Flora in Patients after Resection of Colorectal Adenomas/NIE Gang，ZHANG Xi-ling.//Medical Innovation of China，2017，14（16）：009-012

【Abstract】 Objective：To observe the effect of probiotic on intestinal flora in patients after resection of colorectal adenomas.Method：Forty patients with colorectal adenomas were selected to test the changes of intestinal flora，the results were compared with 10 cases of healthy physical examination.Patients with colorectal adenomas were divided into three groups，the operational control group with 10 cases of colonoscopy surgery without other special treatments，the observation group of 15 cases were given Medilac-s （two tablets，three times a day） or Bifico （two tablets，twice a day）.After colonoscopy surgery， for a period of treatment 4 weeks，the changes of intestinal flora and the recurrence of colorectal adenomas of all groups were observed.Result：The intestinal flora disturbance was confirmed in patients with colorectal adenomas.Compared with the normal group，the numbers of dung enterococcus， bifidobacterium and lactobacillus were decreased in patients with colorectal adenomas，otherwise，the numbers of escherichia coli were increased，the differences were statistically significant（P<0.05），but there was no difference in Bacteroides（P>0.05）.After using two kinds of probiotics，the numbers of Bifidobacterium and Lactobacillus were increased in patients with colorectal adenomas，otherwise，the numbers of Escherichia Coli were decreased，the differences were statistically significant（P<0.05）.The numbers of dung Enterococcus were insignificant increased（P>0.05）.There was no difference in Bacteroides（P>0.05）.Conclusion：Patients with colorectal adenomas existed intestinal flora changes.Intestinal flora could be recovered by probiotics among patients with colorectal adenomas.It has an important clinical significance in the treatment of colorectal adenomas.

【Key words】 Colorectal cancer； Colorectal adenomas； Intestinal flora； Probiotics

First-authors address：The University Affiliated Hospital，Chongqing Medical University，Chongqing 401331，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.16.003

大腸癌是歐美國家常見的消化系腫瘤，在我國其發(fā)病率也已升至惡性腫瘤發(fā)生率的第4～6位，其中約3/4患者系由大腸腺瘤發(fā)展而來[1]。國內(nèi)外推薦的結(jié)直腸腺瘤（colorestal adenoma，CRA）的主要治療手段是內(nèi)鏡下息肉切除治療，全美息肉研究機(jī)構(gòu)證實(shí)，結(jié)腸鏡切除腺瘤性息肉可預(yù)防結(jié)直腸癌的發(fā)生[2]，雖然通過內(nèi)鏡早期發(fā)現(xiàn)大腸腺瘤樣息肉而摘除可減少部分大腸癌的發(fā)生，但復(fù)發(fā)率高達(dá)40%～50%[3]。目前國內(nèi)外已有多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)大腸腫瘤患者存在腸道菌群改變[4]，提示腸道菌群紊亂可能參與了腺瘤癌變的進(jìn)展過程。研究表明，補(bǔ)充益生菌可調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)腸道免疫[5-6]、修復(fù)腸上皮屏障功能[7]、抑制腫瘤細(xì)胞增殖等[8]。目前關(guān)于預(yù)防性服用益生菌對結(jié)直腸腺瘤患者腸道菌群的系統(tǒng)性研究暫未見相關(guān)報(bào)道。本課題擬通過觀察大腸腺瘤內(nèi)鏡切除后服用益生菌對腸道菌群的影響，進(jìn)一步證實(shí)腸道菌群在大腸腺瘤患者中的意義，為臨床治療提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年5月-2016年5月收集的正常人群10例，結(jié)直腸腺瘤患者40例，結(jié)直腸腺瘤患者均符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。將上述對象分為四組，正常人群為正常組，隨機(jī)選取10例結(jié)直腸腺瘤患者作為手術(shù)對照組，其余30例隨機(jī)分成組培菲康組和美常安組，每組各15例。三組患者的一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。所選病例患者在采樣前1個(gè)月未使用抗生素、微生態(tài)活菌制劑和聚乙二醇等瀉藥。研究方案通過醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審核，并獲得患者知情同意書。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）家族性腺瘤性息肉病或遺傳性非息肉病結(jié)腸癌患者；（2）有腹瀉、活動(dòng)性消化性潰瘍或胃、腸出血史等消化道疾病史；（3）1周內(nèi)服用過阿司匹林、華法林等抗凝藥物；（4）接受放化療及免疫治療的患者；（5）合并心、腦、血管、肝、腎、肺、胰腺、內(nèi)分泌和造血系統(tǒng)嚴(yán)重原發(fā)性疾病，以及患有其它正在用藥治療，影響試驗(yàn)藥物觀察的患者；（6）準(zhǔn)備妊娠、已妊娠或哺乳期婦女、精神病患者；（7）有吸毒史；（8）年齡在18歲以下，70歲以上；（9）不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定用藥，無法判斷療效，資料不全而影響療效安全性者。

1.3 方法 正常組：無結(jié)直腸腺瘤的正常人群。手術(shù)對照組：結(jié)直腸腺瘤內(nèi)鏡下切除后不另做治療。培菲康組：結(jié)直腸腺瘤內(nèi)鏡下切除后，培菲康（雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊，由上海信誼藥廠有限公司生產(chǎn)）2粒，2次/d，連續(xù)服用4周。美常安組：結(jié)直腸腺瘤內(nèi)鏡下切除后，美常安（含枯草桿菌、腸球菌二連活菌腸溶膠囊，由北京韓美制藥公司生產(chǎn)）2粒，3次/d，連續(xù)服用4周。診療前、治療第4周后收集糞便標(biāo)本，查大便細(xì)菌計(jì)數(shù)。療程中禁用其他對消化系統(tǒng)有影響的藥物，平時(shí)多食新鮮、粗纖維食物，忌食辛辣、炙博、肥膩及腌制品。所有結(jié)直腸腺瘤均采內(nèi)鏡下切除。術(shù)后觀察切口部位是否出現(xiàn)穿孔、出血現(xiàn)象，將結(jié)腸腺瘤進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

1.4 糞便培養(yǎng)及計(jì)數(shù) 正常人群組及結(jié)直腸腺瘤患者在治療前后均留取糞便標(biāo)本。取新鮮糞便0.1 g于EP管中并盡快送檢（時(shí)間<30 min），加入生理鹽水倍比稀釋，震蕩混勻，用接種環(huán)分別接種至不同的培養(yǎng)基上，需氧菌放置于37 ℃有氧條件下培養(yǎng)24～48 h計(jì)數(shù)，厭氧菌采用抽氣換氣法培養(yǎng)72 h后計(jì)數(shù)，使用ALB半自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)（法國生物梅里埃公司）行細(xì)菌鑒定，結(jié)果以每克糞便中菌落形成單位的對數(shù)值（l g CFU/g）表示，代表菌群有：需氧菌2種（大腸桿菌、糞腸球菌），厭氧菌3種（雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌）。

1.5 觀察指標(biāo) 觀察正常組人群和結(jié)腸腺瘤患者糞便菌群構(gòu)成情況，對比服用益生菌前后結(jié)腸腺瘤患者腸道菌群的變化情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，比較采用配對t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)直腸腺瘤患者存在腸道菌群紊亂，與正常組相比，術(shù)前對照組、培菲康組、美常安組患者糞便中的糞腸球菌、雙歧桿菌及乳酸桿菌數(shù)量均明顯下降（P<0.05）。大腸桿菌在術(shù)前對照組、培菲康組、美常安組與正常組對比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。擬桿菌數(shù)量各組間比較均差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。對照組患者糞便中的菌群術(shù)后與術(shù)前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。經(jīng)過兩種益生菌治療后的培菲康組、美常安組患者糞便中的雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量上調(diào)（P<0.05），大腸桿菌數(shù)量下調(diào)（P<0.05），而糞腸球菌數(shù)目有所上調(diào)但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

結(jié)直腸癌已嚴(yán)重危害人類的健康，而結(jié)腸腺瘤是臨床上常見的消化道類疾病，是一種結(jié)腸的良性腫瘤，被公認(rèn)為癌前病變[9]。目前普遍認(rèn)為，大腸腺瘤在大腸癌形成發(fā)展過程中不可避免，積極根除大腸腺瘤可以降低大腸癌的發(fā)生率[10]，但是由于其在結(jié)腸鏡下易發(fā)生穿孔、大出血等現(xiàn)象，結(jié)腸腺瘤復(fù)發(fā)的機(jī)率較大[11]。

人體微生態(tài)系統(tǒng)以腸道微生態(tài)系統(tǒng)最主要、最復(fù)雜，含有微生物400多種，其中雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞鏈球菌占98 %以上，與人體的能量、物質(zhì)代謝關(guān)系密切，參與維持人體健康。

已有多項(xiàng)研究證實(shí)，結(jié)腸癌人群與健康人群腸道微生物存在構(gòu)成差異，表現(xiàn)為明顯的菌群穩(wěn)態(tài)失衡[12-13]。Scanlan等[4]通過對結(jié)直腸癌和腺瘤性息肉病患者腸道菌群構(gòu)成進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌及腺瘤性息肉病患者腸道菌群多樣性和優(yōu)勢菌群降低，提示腸道菌群結(jié)構(gòu)組成的改變可能對結(jié)腸癌的發(fā)生有促進(jìn)作用。目前認(rèn)為腸道菌群是影響CRC發(fā)生的環(huán)境因素之一，與之相關(guān)的主要功能包括調(diào)控腸上皮細(xì)胞增殖、分化，合成必需營養(yǎng)成分和/或生物活性成分，抑制病原體過度繁殖并激活腸道免疫系統(tǒng)等。腸道菌群失調(diào)和結(jié)腸癌之間的關(guān)系近年來已受到國內(nèi)外廣泛關(guān)注，對于腸道菌群失調(diào)參與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展也有了一定的認(rèn)識，腸道菌群的作用已成為CRC發(fā)病機(jī)制研究中新的熱點(diǎn)[14]。目前認(rèn)為，腸道菌群紊亂失調(diào)會(huì)釋放大量的細(xì)菌毒素，誘發(fā)結(jié)腸炎等炎性腸病，腸道屏障功能的損傷會(huì)引起非致病性細(xì)菌的轉(zhuǎn)位，進(jìn)而影響免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致腸道黏膜促炎癥反應(yīng)信號傳導(dǎo)機(jī)制異常，使其向致癌相關(guān)的免疫反應(yīng)轉(zhuǎn)變，進(jìn)而誘導(dǎo)結(jié)腸癌的發(fā)生[15]。同時(shí)，腸道微生物參與營養(yǎng)代謝過程中的某些產(chǎn)物對腸道上皮細(xì)胞具有毒性作用，致使受損腸道黏膜上皮瘤化。目前學(xué)術(shù)界認(rèn)為，腸道內(nèi)微生物所致的局部和全身的慢性炎癥是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的主要機(jī)制[16]。

益生菌作為臨床上最常用的微生態(tài)制劑，已被廣泛應(yīng)用于多種疾病的防治。體外研究亦發(fā)現(xiàn)，益生菌能夠影響結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、凋亡和黏附等惡性生物學(xué)行為[17]。研究表明腸道菌群失調(diào)介導(dǎo)的慢性和低炎癥狀態(tài)容易刺激腫瘤的形成，主要與免疫細(xì)胞及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子有關(guān)[18]。腸道菌群失調(diào)致代謝能力的改變，由于腸道厭氧菌產(chǎn)生一系列的代謝酶作用于不同的底物，產(chǎn)生致癌物質(zhì)而引發(fā)結(jié)直腸癌[19]。培菲康是含有雙歧桿菌、乳酸桿菌、糞腸球菌等活性成分，而美常安是含有高濃縮枯草桿菌、屎腸球菌的新型微生態(tài)制劑，目前已在腹瀉及潰瘍性結(jié)腸炎等疾病的防治中起到重要作用[20]。本文對結(jié)直腸腺瘤患者及正常人群的腸道菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行了簡單的分析，發(fā)現(xiàn)糞腸球菌、雙歧桿菌及乳桿菌數(shù)量明顯下降，而大腸桿菌數(shù)量明顯上調(diào)，提示結(jié)直腸腺瘤患者存在腸道菌群紊亂。服用益生菌制劑后，患者糞便中的乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量上調(diào)，而大腸桿菌數(shù)量降低，考慮為美常安中的枯草桿菌利用生物奪氧作用降低腸道定植部位的氧濃度，造成適合厭氧菌群生長的環(huán)境，促進(jìn)雙歧桿菌等有益菌的生長，從而抑制大腸桿菌等致病菌的生長。而培菲康可以直接提供機(jī)體活性的雙歧桿菌，從而抑制大腸桿菌的生長，益生菌制劑可以糾正結(jié)直腸腺瘤患者腸道菌群紊亂，提示益生菌可以對結(jié)直腸腺瘤患者具有臨床治療作用，為臨床防治結(jié)直腸腺瘤提供新的思路和治療手段。

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（收稿日期：2017-03-16） （本文編輯：周亞杰）