□ 孟 甜 四川旅游學(xué)院

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定胡麻油中α-亞麻酸的含量

□ 孟 甜 四川旅游學(xué)院

目的：建立一種氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測(cè)定胡麻油中α-亞麻酸的含量。方法：樣品經(jīng)甲酯化后用GC-MS法分析，對(duì)比37種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量。色譜柱為DB-5MSUI，60 m×0.25 mm×0.25 μm；進(jìn)樣口溫度230 ℃；程序升溫。結(jié)果：建立的α-亞麻酸在0.2～1.2 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 9，平均回收率為100.03%，RSD為0.14%。結(jié)論：該方法可用于測(cè)定胡麻油中α-亞麻酸的含量。

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法；胡麻油；α-亞麻酸

胡麻油是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值非常高的食用油，含有飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸及多不飽和脂肪酸，其中70%以上為多不飽和脂肪酸，超過現(xiàn)在人們?nèi)粘ｏ嬍持械乃兄参镔Y源，其中α-亞麻酸是人體必需脂肪酸，具有調(diào)節(jié)血脂、降低膽固醇、抑制過敏反應(yīng)、抗炎、抗腫瘤和預(yù)防癌癥等生理作用，含量在50%左右，國(guó)內(nèi)外營(yíng)養(yǎng)專家贊譽(yù)為“陸地上的魚油”[1-3]。

本試驗(yàn)依據(jù)《食品中總脂肪、飽和脂肪（酸）、不飽和脂肪（酸）的測(cè)定水解提取-氣相色譜法》（GB/T 22223-2008），采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，建立測(cè)定α-亞麻酸含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而測(cè)定胡麻油中α-亞麻酸的含量。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液美國(guó)Sigma-Supelco公司；二氯甲烷；正庚烷（為色譜純）美國(guó)Sigma-Aldrich公司；2%氫氧化鈉溶液（稱取2g氫氧化鈉溶于100ml甲醇溶液）；飽和氯化鈉水溶液；15%三氟化硼甲醇溶液（為分析純）成都科龍化工試劑廠；五種胡麻油購(gòu)自網(wǎng)購(gòu)平臺(tái)。

1.2 儀器與設(shè)備

JA2003型電子天平：北京賽多利斯天平有限公司；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋：江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠；890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國(guó)Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 儀器條件

氣相色譜條件：色譜柱：DB-5MSUI，60 m×0.25 mm×0.25 μm；載氣：高純氦氣，純度≥99.999%；載氣流速（恒流模式）：1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度：230 ℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，不分流；升溫程序：80 ℃保持2 min，以5 ℃/min升溫至180 ℃保持40 min，再以3 ℃/min速率升溫至280 ℃保持10 min。

質(zhì)譜儀條件：離子源溫度：230 ℃；離子化方式：EI；電子能量：70 eV；掃描模式：scan掃描模式；掃描范圍：m/z（35～300）amu；接口溫度：280 ℃；溶劑延遲時(shí)間：7.5 min。

1.3.2 樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱取混合均勻的樣品約5 g于250 mL燒瓶中，加入2%氫氧化鈉溶液8 mL，連接回流冷凝器，在80 ℃水浴上回流，直至油滴消失，從回流冷凝器上端加入15%三氟化硼甲醇溶液7 mL，在80 ℃水浴上繼續(xù)回流2 min，用去離子水沖洗回流冷凝器。停止加熱，取下燒瓶，迅速冷卻至室溫，加入45 mL正庚烷，振搖2 min，再加入飽和氯化鈉水溶液，靜置分層，吸取上層正庚烷提取溶液5 mL，轉(zhuǎn)移到30 mL小型具塞試管中，加入5 g無水硫酸鈉，振搖1 min，靜置5 min，吸取上層溶液到進(jìn)樣瓶中待測(cè)定。根據(jù)樣品中待測(cè)物含量進(jìn)行適當(dāng)比例稀釋[4]。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

將37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液從安瓿瓶中轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用二氯甲烷稀釋定容，備用，其中α-亞麻酸甲酯濃度為0.2 mg/mL。

1.3.4 測(cè)定方法

分別準(zhǔn)確吸取1 μL 37種混合脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)樣品溶液注入GC-MS，外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品及樣品圖譜

按上述儀器條件及方法檢測(cè)后，得到37種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品離子流色譜圖見圖1a，其中α-亞麻酸甲酯在24.46 min處出峰。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 線性關(guān)系

精密吸取37種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液1、2、3、4、5 μL和6 μL進(jìn)樣，進(jìn)行BPC掃描，測(cè)定峰面積，見圖1b。其中α-亞麻酸甲酯與濃度的線性方程為y=3 949 418x+41 531.4，r=0.999 9，說明在0.2～1.2 μg范圍內(nèi)α-亞麻酸甲酯峰面積與濃度線性關(guān)系良好。

2.2.2 精密度

精密吸取同一標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次1 μL，測(cè)定α-亞麻酸甲酯峰面積，峰面積RSD為0.62%，結(jié)果表明精密度良好。

2.2.3 穩(wěn)定性

取一份樣品按樣品預(yù)處理方法進(jìn)行處理，并于常溫下密封儲(chǔ)存。按以上色譜條件連續(xù)測(cè)定7 d，計(jì)算得峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.86%，說明樣品預(yù)處理后在7 d內(nèi)能夠穩(wěn)定。

2.2.4 重復(fù)性

取同一樣品5份并按樣品預(yù)處理方法進(jìn)行處理，再按以上色譜條件測(cè)定，并計(jì)算5份樣品峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.48%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.5 加樣回收率

精密量取已知含量的樣品溶液6份,分別精密加入不同含量的標(biāo)準(zhǔn)品，按以上色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表1。α-亞麻酸的平均回收率為100.03%，RSD為0.14%，說明該方法加樣回收率較好，測(cè)定方法可靠。

2.3 樣品測(cè)定

五種胡麻油中的α-亞麻酸測(cè)定結(jié)果見表2。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品及樣品圖譜

3 結(jié)論

本文建立了氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定胡麻油中的α-亞麻酸含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，能夠用于胡麻油中α-亞麻酸含量的測(cè)定。同時(shí)該方法也可以做為胡麻油質(zhì)量控制的方法或是其他類型食用油中α-亞麻酸含量的測(cè)定方法。該方法對(duì)食用油的生產(chǎn)過程質(zhì)量控制也具有一定的積極意義[5]。

五種胡麻油中α-亞麻酸含量有較大差異，可能是其加工原料胡麻籽的產(chǎn)地、品種、收獲時(shí)期及年份對(duì)結(jié)果影響較明顯[6]，且分離提取制成成品胡麻油的方法對(duì)其也有一定影響，另外在儲(chǔ)藏過程中有效成分的含量也會(huì)發(fā)生變化。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 α-亞麻酸含量測(cè)定結(jié)果

[1]趙毅.亞麻籽的功能性成分及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用[J].山西食品工業(yè),2005,6:31-33.

[2]李麗萍,韓濤.富含α-亞麻酸植物資源的開發(fā)與利用[J].食品科學(xué),2007,28(11): 614-618.

[3]孟甜.胡麻油營(yíng)養(yǎng)分析及應(yīng)用研究進(jìn)展[J].糧食與油脂,2015,28(5):5-8.

[4]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).食品中總脂肪、飽和脂肪(酸)、不飽和脂肪(酸)的測(cè)定水解提取-氣相色譜法GB/T 22223-2008[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.

[5]韓榮,田蘭,吳迪,等.氣相色譜法測(cè)定食用調(diào)和油中α-亞麻酸及亞油酸的含量[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,37(7):862-865.

[6]喬海明,米君,曲志華,等.影響油用亞麻α-亞麻酸含量主要因素初步分析[J].中國(guó)麻業(yè)科學(xué),2014,36(4):191-193.

四川省教育廳科研項(xiàng)目（編號(hào)：14ZB0302）。糧油工程與食品安全高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室課題（編號(hào)：szjj2015-002）。

孟甜（1985-），女，河南確山人,碩士，講師。研究方向：食品科學(xué)。