□ 余蓮芳 鄭晶晶 朱明揚(yáng) 岳陽(yáng)市食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心

湘式擠壓糕點(diǎn)中甜蜜素的氣液相色譜分析方法的比較

□ 余蓮芳 鄭晶晶 朱明揚(yáng) 岳陽(yáng)市食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心

利用GB 5009.97-2016中氣相色譜法（GC法）和高效液相色譜法（HPLC法）對(duì)“湘式擠壓糕點(diǎn)”中的甜蜜素含量進(jìn)行檢測(cè)。GC法和HPLC法在所測(cè)定范圍內(nèi)線性良好，GC法的檢出限和定量限分別為0.008 mg和0.024 mg，HPLC法的檢出限和定量限分別為0.005 mg 和0.015 mg。添加水平在0.50~2.00 g/kg時(shí),回收率分別為93.2%~107.2 %和90.1%~102.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(n=6)為2.8%~6.7%和2.2%~3.4%。兩種分析方法檢測(cè)結(jié)果比對(duì)差異不顯著。結(jié)果表明，兩種方法靈敏度好，回收率高，使用者可以根據(jù)自身情況進(jìn)行選擇。

湘式擠壓糕點(diǎn)；氣相色譜法；高效液相色譜法；甜蜜素

湘式擠壓糕點(diǎn)是指以糧食為主要原料，輔以食用植物油、食用鹽、白砂糖和辣椒干等輔料，經(jīng)擠壓熟化、拌料和包裝等一系列工藝加工而成的休閑熟食[1]。此類產(chǎn)品具有商品名稱奇特、色澤鮮艷、形狀新奇、氣味濃郁和價(jià)格低廉等特點(diǎn)，極受廣大中小學(xué)學(xué)生喜愛(ài)。生產(chǎn)者為了迎合小朋友的口味以及降低成本，用甜蜜素（又名環(huán)己基氨基磺酸鈉）替代食糖[2-3]。有些企業(yè)甜蜜素的含量通常是憑借經(jīng)驗(yàn)和口感添加，甜蜜素檢出率高且容易超標(biāo)。有些企業(yè)盲目按照國(guó)標(biāo)(GB2760)的規(guī)定添加，表面上看并沒(méi)有超標(biāo)，但由于各類添加劑的成分可能不純正，結(jié)果往往會(huì)導(dǎo)致終端產(chǎn)品檢測(cè)時(shí)某一項(xiàng)添加劑超標(biāo)[4-7]。湖南省衛(wèi)生廳專門發(fā)布了關(guān)于湘式擠壓糕點(diǎn)的湖南省食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)DBS43/002-2012，其中規(guī)定甜蜜素的最大使用量以環(huán)己基氨基磺酸計(jì)為1.6 g/kg[8]。目前很多實(shí)驗(yàn)室都不具備利用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測(cè)甜蜜素的條件，因此本文對(duì)GB 5009.97-2016[9]中氣相色譜法與液相色譜法測(cè)定湘式擠壓糕點(diǎn)中甜蜜素進(jìn)行系統(tǒng)比較，評(píng)價(jià)兩種方法的可行性，不僅方便使用者根據(jù)自身情況進(jìn)行選擇，而且有利于同一實(shí)驗(yàn)室對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行儀器比對(duì)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：甜蜜素；乙腈；正庚烷（色譜純）；硫酸；次氯酸鈉(有效氯含量≥6.0 %)；碳酸氫鈉；亞硝酸鈉；氯化鈉；乙酸鋅，亞鐵氰化鉀（分析純）；實(shí)驗(yàn)用水均為超純水；湘式擠壓糕點(diǎn)（抽樣于岳陽(yáng)市幾家食品公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

1.2.1 氣相色譜儀及其條件

安捷倫7890B氣相色譜儀：HP-5毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)；進(jìn)樣口： 230 ℃，進(jìn)樣量1 μL，分流比5∶1；柱箱升溫程序：55 ℃，保持3 min，以10 ℃/min 升溫至90 ℃,保持0.5 min，以20 ℃/min升溫至200 ℃,保持3 min；FID檢測(cè)器，260 ℃。

1.2.2 高效液相色譜儀及其條件

賽默飛U3000超高效液相色譜儀。：反相C18液相色譜柱：150 mm×4.6 mm×2.6 μm。；流動(dòng)相:：乙腈＋水（68＋32）。；流速:：0.8 mL/min。；進(jìn)樣量:：10 μL。；柱溫：30 ℃；。二極管陣列檢測(cè)器，：檢測(cè)波長(zhǎng)314 nm。

1.3 樣品制備

稱取打碎、混勻的樣品3.00 g左右于50 mL比色管中，加入30 mL水，振搖，超聲提取40 min，混勻，加入2.5 mL亞鐵氰化鉀（106 g/L）溶液，混勻，再加入2.5 mL乙酸鋅（220 g/L）溶液，混勻，再補(bǔ)加15 mL水，充分混勻，離心(3000 r/min) 10 min，過(guò)濾，濾液備用。GC法和HPLC法分別準(zhǔn)確移取10.0 mL濾液于25 mL比色管中，其余步驟參照GB 5009.97-2016。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

準(zhǔn)確吸取2.00 mL甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.00 mg/mL）于50 mL容量瓶中，用超純水定容混勻，即得0.4 mg/mL甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)使用液。分別吸取0.3、0.5、1.0、2.0、5.0 mL和10.0 mL甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)使用液移至到25 mL比色管中，加水定容至10 mL，按GC樣品處理方法進(jìn)行處理。分別吸取0.3、0.4、0.5、1.0、2.0 mL和5.0 mL甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)使用液移至25 mL比色管中，加水定容至10 mL，按HPLC樣品處理方法進(jìn)行處理。以測(cè)得的峰面積（Y）對(duì)甜蜜素含量（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的比較及注意事項(xiàng)

由于湘式擠壓糕點(diǎn)自身性狀特殊，具有多油、有韌性、結(jié)構(gòu)緊實(shí)等特點(diǎn)。用一般固體樣品的前處理方法處理會(huì)不夠理想，需要打碎、混勻再稱樣，延長(zhǎng)超聲時(shí)間或者浸泡過(guò)夜，加沉淀劑除去脂肪和蛋白，最終得到的樣液可以同時(shí)供氣相和液相檢測(cè)用。GC法衍生反應(yīng)的時(shí)間要控制好，樣液與標(biāo)液的渦旋或振搖時(shí)間和力度應(yīng)一致以減少誤差。若產(chǎn)生乳化，可加少許氯化鈉，盡量不要加到水相中，以免產(chǎn)生大量氣泡，輕輕攪拌正庚烷相，再吸取澄清的正庚烷相上層液體。定量時(shí)，衍生物和衍生副產(chǎn)物應(yīng)一同計(jì)入。HPLC法需注意次氯酸鈉有效氯的含量應(yīng)達(dá)到要求，市售產(chǎn)品需及時(shí)標(biāo)定，臨用時(shí)配制，避光保存。用碳酸氫鈉溶液洗滌有機(jī)相時(shí)應(yīng)充分。HPLC法與GC法的前處理相比簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、不需要冰水控溫，而且在12 h內(nèi)衍生產(chǎn)物基本無(wú)變化。HPLC法還可以利用光譜結(jié)合保留時(shí)間定性。

2.2 線性關(guān)系與檢出限的比較

GC法和HPLC法在所測(cè)定范圍內(nèi)線性良好，GC法線性方程為Y1=184.473 059X1+4.556 387 6(r1=0.99982),Y2=185.390 629X2+0.853 846 1(r2=0.99978)，HPLC法線性方程為Y=3.116 4X-0.024 6（r=0.999 94）。以3倍信噪比計(jì)算檢出限（LOD），以10倍信噪比計(jì)算定量限（LOQ），GC法的檢出限和定量限分別為0.008 mg和0.024 mg，HPLC法為0.005 mg和0.015 mg。HPLC法檢出限和定量限略低于GC法，但均達(dá)到常規(guī)檢測(cè)要求。

2.3 準(zhǔn)確度與精密度的比較

先測(cè)定樣品本底值，按樣品中測(cè)得的甜蜜素含量由低到高取3份樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)。每份加標(biāo)進(jìn)行6次平行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。兩種方法測(cè)定的準(zhǔn)確度和精密度良好，均符合實(shí)驗(yàn)要求，但HPLC法測(cè)定結(jié)果的精密度要好于GC法。

2.4 樣品測(cè)定結(jié)果的比較

本實(shí)驗(yàn)對(duì)10種湘式擠壓糕點(diǎn)樣品進(jìn)行檢測(cè)，每份樣品進(jìn)行3次平行測(cè)定，結(jié)果取平均值，樣品1和樣品2檢測(cè)結(jié)果大于1.6 g/kg（以環(huán)己基氨基磺酸計(jì)）的最大允許值。當(dāng)自由度df=9,對(duì)于給定的顯著性水平a=0.05，查t分布表得t0.025（9）=2.262，所以︱t︱

表1 準(zhǔn)確度和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表2 GC法與HPLC法含量測(cè)定結(jié)果分析

3 結(jié)論

本文利用GB 5009.97-2016中第一法氣相色譜法和第二法高效液相色譜法對(duì)湖南省地方特色休閑熟食“湘式擠壓糕點(diǎn)”中的甜蜜素含量進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)兩種方法進(jìn)行了系統(tǒng)的比較與分析，總結(jié)與歸納了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中影響結(jié)果準(zhǔn)確性的注意事項(xiàng)。液相色譜法與氣相色譜法的前處理相比簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、不需要冰水控溫，而且衍生反應(yīng)產(chǎn)物具有較好的穩(wěn)定性。經(jīng)過(guò)比較，兩種方法均顯示出靈敏度高，選擇性好，回收率高等特點(diǎn)，且檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差異，因此均可對(duì)湘式擠壓糕點(diǎn)中甜蜜素準(zhǔn)確定性定量分析。方便使用者根據(jù)自身情況進(jìn)行選擇，而且有利于同一實(shí)驗(yàn)室對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行儀器比對(duì)，以復(fù)查結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[1]湖南省衛(wèi)生廳.DBS43/002-2012湖南省食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 湘式擠壓糕點(diǎn)[S].湖南,2012.

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