□ 史萍萍 張書芬 張愛芝 寧波市食品檢驗(yàn)檢測研究院

液質(zhì)聯(lián)用儀測定原料乳及液態(tài)乳中舒巴坦方法驗(yàn)證

□ 史萍萍 張書芬 張愛芝 寧波市食品檢驗(yàn)檢測研究院

本文依據(jù) GB/T27404-2008 《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》對新檢測方法的驗(yàn)證要求，對液質(zhì)聯(lián)用儀測定原料乳及液態(tài)乳中舒巴坦的方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明，樣品中舒巴坦的檢測回收率在61.7%～80.0%，方法的測定低限達(dá)到0.3 μg/kg，標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度及特異性等驗(yàn)證指標(biāo)均能達(dá)到GB/T27404-2008的要求。

液質(zhì)聯(lián)用儀；舒巴坦；原料乳

隨著抗生素在乳畜飼養(yǎng)業(yè)中的廣泛使用，牛奶中的抗生素藥物殘留問題受到普遍關(guān)注[1-2]，《無公害食品生鮮牛乳》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，在生鮮乳中不得檢出抗生素。為了分解生鮮乳中殘留的抗生素，不法分子向牛奶中添加β內(nèi)酰胺酶，使青霉素等抗生素降解，致使微生物法、酶聯(lián)免疫法等常規(guī)檢測方法失效，從而無法正確判斷是否為“無抗奶”[3]。

舒巴坦為β內(nèi)酰胺酶抑制劑，對β內(nèi)酰胺酶有抑制作用，它能不可逆地與β內(nèi)酰胺酶結(jié)合，使溶液中的游離酶減少甚至為零。但舒巴坦可能會(huì)引起人體過敏反應(yīng)并殘留在體內(nèi)，對人體造成一定的危害[4-5]。

對于原料乳及液態(tài)乳中舒巴坦的檢測，目前尚無有效的國家標(biāo)準(zhǔn)。2014年，國家食品藥品監(jiān)督管理總局在國抽細(xì)則中指定使用食藥監(jiān)食監(jiān)三便函[2014]73號文件中《原料乳及液態(tài)乳中舒巴坦的測定》方法進(jìn)行檢測。本次實(shí)驗(yàn)以GB/T27404-2008為依據(jù)，對該方法進(jìn)行驗(yàn)證，以考察檢測方法的適用性和準(zhǔn)確性。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；乙酸；乙酸溶液：0.2%。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：舒巴坦；Oasis HLB 固相萃取小柱，200 mg/6 mL，或相當(dāng)者。

1.2 儀器與設(shè)備

UPLC-Quttro Premier XE液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀為實(shí)驗(yàn)室所用儀器，其他包括電子天平（感量為0.1 mg）、旋渦混合器、離心機(jī)和氮吹儀。

1.3 舒巴坦標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

舒巴坦標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取舒巴坦標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg（精確至0.0 001 g），用水溶解并定容至100 mL，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為 0.1 mg/mL，貯存于4 ℃冰箱中。

舒巴坦標(biāo)準(zhǔn)工作液：吸取舒巴坦標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00 mL于100 mL的容量瓶中，用水定容至刻度，配的濃度為1.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，貯存于4 ℃冰箱中。

1.4 試樣制備

稱取液體乳5 g（精確至0.01 g），加入15 mL 0.2%乙酸水溶液，渦旋30 s，超聲提取20 min，用0.2%乙酸水溶液（4.4）定容至25 mL，渦旋混勻后，8 000 rpm離心10 min，取上清液用HLB固相萃取小柱凈化定容成2.00 mL后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測定。

表1 液體乳中舒巴坦方法的添加回收率表

2 方法驗(yàn)證

2.1 校準(zhǔn)曲線

使用舒巴坦標(biāo)準(zhǔn)工作液將標(biāo)準(zhǔn)曲線配制成濃度為1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 ng/mL和10.00 ng/mL的五個(gè)點(diǎn)，用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測定自動(dòng)積分后，生成校準(zhǔn)曲線。校準(zhǔn)曲線方程為：64.756 4 X+5.296 5，相關(guān)系數(shù)R2=995 557。

按照標(biāo)準(zhǔn)GB/T 27404-2008附錄F中F.2對校準(zhǔn)曲線的要求，對于驗(yàn)證方法，相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。所以，本部分校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)能夠滿足要求。

2.2 回收率和精密度

目前，我國對原料乳及液態(tài)乳中舒巴坦無具體限量規(guī)定，驗(yàn)證時(shí)等同于食品中的禁用物質(zhì)，按照GB/T27404-2008附錄F中F.1和F3的要求將舒巴坦成陰性的液體乳樣品在方法測定低限、兩倍方法測定低限和十倍方法測定低限三個(gè)水平進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)（方法給出測定低限為0.3 μg/kg），每個(gè)水平平行做六次試驗(yàn)，用于方法精密度的考察，結(jié)果見表1。

標(biāo)準(zhǔn)GB/T 27404-2008附錄F中F.1對回收率的要求，回收率組分含量<0.1 mg/kg，回收率范圍在60%～120%。F.3對精密度要求，被測組分含量在1～10 μg/kg時(shí)，CV（%）<30%。所以，試驗(yàn)方法在回收率和精密度方面均能滿足GB/T 27404-2008要求。

2.3 測定低限

食藥監(jiān)食監(jiān)三便函[2014]73號文件中《原料乳及液態(tài)乳中舒巴坦的測定》給出的最低檢出限為0.3 μg/kg，在該點(diǎn)以陰性液體乳加標(biāo)，其信噪比為26.59>3，說明實(shí)際方法檢出限能達(dá)到0.3 μg/kg。所以，本部分能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.4 特異性

液質(zhì)聯(lián)用方法檢測，需滿足保留時(shí)間和豐度比兩個(gè)條件方能判定該物質(zhì)為目標(biāo)化合物：樣品保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量色譜峰相對保留時(shí)間在2.5%以內(nèi)；樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的特征離子豐度比最大允許誤差符合相關(guān)要求。根據(jù)檢測方法要求，測定舒巴坦選取231.7＞139.7、231.7 ＞63.7兩個(gè)離子，具體測試結(jié)果表明保留時(shí)間及特征離子豐度比的誤差均符合要求。

3 結(jié)語

本文依據(jù)GB/T27404-2008對《原料乳及液態(tài)乳中舒巴坦的測定》進(jìn)行驗(yàn)證， 結(jié)果表明：該方法在標(biāo)準(zhǔn)曲線、回收率、測定低限、精密度和特異性等方面都滿足測定方法要求，為原料乳及液態(tài)乳中舒巴坦含量的檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性提供了保證。

[1]孫雷,張?bào)P,汪霞,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對動(dòng)物源性食品中13種β-內(nèi)酰胺類藥物殘留的檢測[J].分析測試學(xué)報(bào),2009(5):576-580.

[2]佘永新,劉佳佳,王靜,等.超高壓液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法對牛奶中24種磺胺類藥物殘留的檢測[J].分析測試學(xué)報(bào),2008(12):1313-1317.

[3]薛霞,王駿,劉桂亮,等.親水作用色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜測定液態(tài)奶中舒巴坦[J].分析測試學(xué)報(bào),2012(6):700-704.

[4]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB/T27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.

[5]張鑫瀟,謝巖黎,王金水,等.牛乳中β-內(nèi)酰胺酶的檢測方法研究進(jìn)展[J].中國乳品工業(yè),2011(2):45-47.