譚羽燦 羅燦華 鄒嵐

P300/CBP在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其臨床意義

譚羽燦 羅燦華 鄒嵐*

目的探討組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶分子p300/CBP在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)142例甲狀腺乳頭狀癌組織及22例正常甲狀腺組織中p300/ CBP蛋白表達(dá)情況，并分析其與臨床相關(guān)因素的關(guān)系。結(jié)果p300/CBP蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達(dá)水平升高，但與患者性別、年齡、病理分期、T分期、N分期、M分期、復(fù)發(fā)均無(wú)關(guān)。Cox多因素分析顯示年齡和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是影響甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后的獨(dú)立因素。結(jié)論本研究顯示p300/CBP蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中存在高表達(dá)，但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)與甲狀腺乳頭狀癌的預(yù)后有關(guān)。

P300/CBP；甲狀腺乳頭狀癌；預(yù)后

甲狀腺癌是頭頸部常見的惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)病率逐年上升。甲狀腺乳頭狀癌是最常見的病理類型，約占甲狀腺癌的80%［1-3］。甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后較好，但容易通過(guò)淋巴管轉(zhuǎn)移，甲狀腺癌多發(fā)生于青壯年，平均發(fā)病年齡約為40歲，男女比約為1∶2.6［4，5］。P300/CBP是轉(zhuǎn)錄因子組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的五大家族之一［6］，p300/CBP調(diào)節(jié)基因的表達(dá)是通過(guò)與核蛋白的相互作用，同時(shí)參與如細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡和DNA損傷修復(fù)等一系列生物活性調(diào)節(jié)［7，8］。已經(jīng)有大量研究表明p300/CBP與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，如肺癌、胃癌、腸癌、宮頸癌、喉癌等［9-13］。但p300/CBP與甲狀腺癌的關(guān)系目前還不明確，本研究旨在探討p300/ CBP在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料

收集1999年1月至2001年12月手術(shù)患者的甲狀腺組織標(biāo)本共164例，其中甲狀腺乳頭狀癌142例，正常甲狀腺組織22例，術(shù)后經(jīng)病理確診，患者年齡8～77歲，中位年齡39歲，男性57例，女性85例，所有病例隨訪至2011年12月。

1.2 檢查方法

免疫組化檢測(cè)p300/CBP蛋白表達(dá)，CBP兔抗人單克隆抗體購(gòu)自Cell Signaling Technology公司，DAB顯色試劑盒、免疫組化試劑盒購(gòu)自SantaCruz公司。陽(yáng)性對(duì)照使用預(yù)實(shí)驗(yàn)中已知陽(yáng)性組織切片；陰性對(duì)照使用PBS代替一抗。

1.3 結(jié)果判定

采用半定量方法隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量及單個(gè)細(xì)胞的染色深淺進(jìn)行判斷：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占比≤10%為0分、11%～25%為1分、26%～50%為2分、＞51%為3分。著色強(qiáng)度：陰性為0分，弱陽(yáng)性為1分，陽(yáng)性為2分，強(qiáng)陽(yáng)性為3分；凡染色強(qiáng)度與背景無(wú)明顯差別者為陰性。最后得分為兩項(xiàng)積分相乘即為該病例的免疫組化評(píng)分。如在同一病例中存在多個(gè)不同評(píng)分的視野，則取最大值和最小值的平均值作為免疫組化評(píng)分。根據(jù)最后得分分為四組：0為陰性（-），1～2分為弱陽(yáng)性（+），3～6分為中度陽(yáng)性（++），＞6分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。其中（-）為陰性表達(dá)，（+）、（++）及（+++）為陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)果均經(jīng)兩次重復(fù)觀察，計(jì)分不一致者經(jīng)再次觀察確認(rèn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。相關(guān)性分析采用χ2檢驗(yàn)或Fisher′s精確檢驗(yàn)；生存分析采用Kaplan?Meier和Log Rank檢驗(yàn)，將有意義的臨床病理因素納入Cox回歸模型進(jìn)行分析。P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 甲狀腺乳頭狀癌中p300/CBP蛋白的表達(dá)

在142例甲狀腺乳頭狀癌組織中，有124例組織不同程度的表達(dá)，主要表達(dá)于細(xì)胞核（圖1 a～d），p300/CBP的陽(yáng)性表達(dá)率為87.3%（124/142）；在22例正常甲狀腺組織中，有5例組織不同程度的表達(dá)，p300/CBP陽(yáng)性表達(dá)率為22.7%（5/22）。p300/CBP在甲狀腺乳頭狀癌與正常甲狀腺組織之間p300/CBP表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。p300/CBP蛋白與甲狀腺乳頭狀癌患者的性別、年齡、病理分期、TNM分期、復(fù)發(fā)均無(wú)關(guān)，P＞0.05（表1）。

2.2 P300/CBP蛋白表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌5年、10年生存率關(guān)系

Kaplan?Meier生存分析提示：甲狀腺乳頭狀癌p300/CBP蛋白表達(dá)陽(yáng)性組5年、10年生存率分別為91%，81%，p300/CBP表達(dá)陰性組5年、10年生存率分別為94%，78%，兩者5年、10年生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.722）（圖2）。

圖1 p300/CBP的免疫組化a，b×200；c，d×400

表1 P300/CBP蛋白表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床相關(guān)因素的分析（n）

2.3 甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后的單因素分析及多因素分析

142例甲狀腺乳頭狀癌單因素分析表明：年齡、病理分期、T分期及M分期影響甲狀腺乳頭狀癌患者的預(yù)后，性別、N分期、復(fù)發(fā)、p300/CBP表達(dá)對(duì)預(yù)后沒(méi)有影響（表2）。將單因素分析中有意義的因素，包括年齡、病理分期、T分期及M分期納入Cox回歸模型，分析結(jié)果表明：年齡及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移為影響甲狀腺乳頭狀癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（表3）。

表2 142例甲狀腺乳頭狀癌患者單因素分析結(jié)果

圖2 生存曲線分析

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌是最常見的甲狀腺癌病理類型，一般認(rèn)為甲狀腺乳頭狀癌惡性程度相對(duì)較低，預(yù)后較好，有國(guó)外的研究報(bào)道甲狀腺乳頭狀癌患者10年生存率超過(guò)90%［15］。目前評(píng)估甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后的因素包括：年齡、是否轉(zhuǎn)移、腫瘤范圍，腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、手術(shù)切除完整性，是否侵犯周圍組織等［16-19］。在我們的研究中，甲狀腺乳頭狀癌患者的5年、10年生存率分別為：94%和80%，單因素分析提示患者年齡、病理分期、T分期及是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移影響預(yù)后。年齡≤45歲的患者預(yù)后好于年齡＞45歲者，T分期早期者預(yù)后好于T分期較晚期者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)甲狀腺乳頭狀癌患者預(yù)后無(wú)明顯影響，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者預(yù)后較差。Cox多因素分析顯示：年齡和是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是甲狀腺乳頭狀癌的獨(dú)立預(yù)后因素。以上結(jié)果與國(guó)內(nèi)外報(bào)道相一致［16-19］。美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)將甲狀腺癌患者的年齡分界值定為45歲，45歲以下患者預(yù)后相對(duì)較好；大量研究表明遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移影響預(yù)后，但淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)患者生存率并無(wú)顯著影響［16-19］，這與我們的研究結(jié)果一致。

表3 142例甲狀腺乳頭狀癌患者多因素Cox分析結(jié)果

P300/CBP是組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶五大家族之一，p300/CBP調(diào)節(jié)基因的表達(dá)是通過(guò)與核蛋白的相互作用，同時(shí)參與如細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡和DNA損傷修復(fù)等一系列生物活性調(diào)節(jié)［7］。p300/CBP一般被認(rèn)為是腫瘤抑制蛋白，一些研究發(fā)現(xiàn)p300/CBP抑制劑能預(yù)防惡性腫瘤發(fā)病，但在不同的惡性腫瘤中p300/CBP又起著不同的作用，甚至可以異?；罨瘡亩兂纱龠M(jìn)腫瘤的癌蛋白［6］。國(guó)外研究表明，p300/CBP在胃癌和腸癌組織中存在不同比例的表達(dá)缺失［10］。國(guó)內(nèi)有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)p300/CBP高表達(dá)預(yù)示著食管鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后預(yù)后較差［19］。張先華等人研究顯示，p300/CBP表達(dá)陽(yáng)性率在正常宮頸上皮、原位癌及浸潤(rùn)癌之間存在顯著差異，CBP在宮頸癌組織中的表達(dá)水平要明顯高于正常宮頸組織，且CBP表達(dá)水平與患者年齡、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸癌的病理類型等相關(guān)［11］。Takeuchi等人發(fā)現(xiàn)CBP/p300等相關(guān)因子與膀胱癌對(duì)阿霉素耐藥有關(guān)，證明CBP可以調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性［20］。最近有研究表明，p300/CBP表達(dá)水平與喉癌原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理類型、復(fù)發(fā)及預(yù)后相關(guān)，p300/CBP的高表達(dá)預(yù)示著喉癌患者預(yù)后較差［13］。在肝癌中，研究發(fā)現(xiàn)p300/CBP的高表達(dá)與AFP、腫瘤原發(fā)灶大小、數(shù)量、腫瘤分化以及病理分期均相關(guān)，p300/CBP高表達(dá)患者預(yù)后較差，p300/CBP是影響肝癌預(yù)后的獨(dú)立因素［21］。p300/ CBP在肺癌中過(guò)度表達(dá)也已被證實(shí)［22］，p300/CBP高表達(dá)能增加人類表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermalgrowth factor receptor?2，HER2）的活性，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)以及促進(jìn)合成血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和血管通透性因子［12］。

p300/CBP是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因，p300/CBP能通過(guò)活化AP?1從而調(diào)控cyclin D1基因的表達(dá)；p21WAF/CIP1基因是p53基因的下游基因之一，它可以上調(diào)p300/CBP活性表達(dá)，從而抑制細(xì)胞周期運(yùn)行；DNA的復(fù)制和修復(fù)同樣需要p300/CBP的參與［23］。轉(zhuǎn)錄因子E2F家族過(guò)度表達(dá)與腫瘤關(guān)系密切，E2F可在p300/CBP輔助下乙?；?，在分子水平上CDK介導(dǎo)CBP/p300和E2F?1相互作用，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入不可逆的過(guò)程［24］。p53突變是常見的基因改變，p300/CBP的CH1區(qū)域?qū)53有泛素連接酶活性，p300/CBP通過(guò)癌基因Mdm2依賴或非依賴機(jī)制調(diào)節(jié)p53泛蛋白化作用和降解，有助于控制p53的穩(wěn)定性［25］。在p53信號(hào)通路中，CBP/p300還能通過(guò)乙?；筂dm2失活，引發(fā)細(xì)胞凋亡［26］。而p300/CBP與甲狀腺癌的關(guān)系研究較少。Audrey Cras等人研究發(fā)現(xiàn)貝沙羅汀是通過(guò)p300/CBP來(lái)抑制依賴NF?κB的甲狀腺癌細(xì)胞增殖和侵犯，NF?κB靶基因啟動(dòng)子引起p300輔激活因子釋放以及后續(xù)的組蛋白去乙?；种屏宿D(zhuǎn)錄，證明維甲酸防治甲狀腺癌的機(jī)制也包括NF?κB通路［27］。

在我們的研究中，p300/CBP在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于正常甲狀腺組織，但與甲狀腺乳頭狀癌的腫瘤大小、腫瘤浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)，p300/CBP的表達(dá)水平和甲狀腺乳頭狀癌的預(yù)后亦無(wú)明顯相關(guān)性，也有可能是受限于樣本量和隨訪時(shí)間，p300/ CBP和甲狀腺乳頭狀癌的關(guān)系有待進(jìn)一步明確。CBP在甲狀腺癌中的作用機(jī)制尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，有待于進(jìn)一步研究。

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Expression of p300/CBP in papillary thyroid carcinoma and its clinical significance

TAN Yucan， LUO Canhua，ZOU Lan.Department of Vascular and Thyroid Surgery，The First People′s Hospital of Foshan，F(xiàn)oshan，Guangdong 528000，China.Corresponding author：ZOU Lan，zlyyzl@foxmail.com

Objective To investigate the expression of p300/CBP in papillary thyroid carcinoma and its clinical significance.M ethods Immunohistochemical technique was performed to detect the expressionofp300/CBPin papillary thyroid carcinoma tissuesand normalthyroid tissues，and the relationship between the CBPexpression and clinicopathological factorswasanalyzed.Results The expression levelof p300/CBPwas increased in papillary thyroid carcinoma tissueswhen compared with normal thyroid tissues. However，no association was found between p300/CBP expression and clinicopathological factors or prognosis.Multivariate analysis results showed thatage and distantmetastasiswere independentprognosis factors forpatientswith papillary thyroid carcinoma.Conclusion Up?regulation ofp300/CBPwasdetected inpapillary thyroid carcinoma tissues，butithasnoinfluenceonprognosis.

P300/CBP；papillary thyroid carcinoma；prognosis

R736.1

A

10.3969/j.issn.1009?976X.2017.03.009

2016-03-04）

佛山市醫(yī)學(xué)類科技攻關(guān)項(xiàng)目（2015AB00270）

528000廣東佛山佛山市第一人民醫(yī)院血管甲狀腺外科

*通訊作者：鄒嵐，E?mail:zlyyzl@foxmail.com