亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        多指標正交試驗優(yōu)化理沖生髓飲的醇提工藝

        2017-07-03 13:38:14王艷宏趙娟萍尚冬雪趙雪田苗韓鳳娟
        中國中醫(yī)藥信息雜志 2017年7期
        關鍵詞:毛蕊藿苷甲苷

        王艷宏,趙娟萍,尚冬雪,趙雪,田苗,韓鳳娟

        ?

        多指標正交試驗優(yōu)化理沖生髓飲的醇提工藝

        王艷宏1,趙娟萍1,尚冬雪1,趙雪1,田苗2,韓鳳娟2

        1.黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院,黑龍江哈爾濱 150040; 2.黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院,黑龍江哈爾濱 150040

        目的 優(yōu)選理沖生髓飲的最佳醇提工藝。方法 采用L9(34)正交試驗法,以毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、黃芪甲苷的轉移率和干膏得率為指標,通過綜合評分法,考察乙醇濃度、提取時間、提取溫度、溶媒用量對理沖生髓飲醇提工藝的影響。結果 最佳提取工藝為:10倍量60%乙醇浸泡2 h后,加熱回流提取2次,提取時間1.5 h,提取溫度80 ℃。結論 該工藝提取率高,工藝穩(wěn)定、可行,可為理沖生髓飲的進一步研究提供數(shù)據(jù)。

        理沖生髓飲;正交試驗;多指標;醇提工藝

        理沖生髓飲是國家級老中醫(yī)、黑龍江省名中醫(yī)王秀霞教授在理沖丸的基礎上結合多年臨床實踐總結出的有效防治卵巢腫瘤的中藥復方制劑?,F(xiàn)代研究表明其可提高卵巢癌患者的免疫功能[1],對人卵巢癌細胞SKOV3的體外生長有抑制作用,可阻斷Bcl-2癌基因蛋白表達[2-3],對化學致癌因子誘發(fā)的大鼠卵巢腫瘤有抑制和阻斷作用[4],對P53基因蛋白、血管內皮生長因子基因蛋白、Casp-8和CXCL2基因的過度表達有調節(jié)作用[5-7]。理沖生髓飲具有破血消癥、軟堅散結、補氣養(yǎng)血、填精益髓之功。方中所含有效成分種類眾多,包括揮發(fā)油類、皂苷類、黃酮類、多糖類等。其中,毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd和黃芪甲苷等成分具有抗腫瘤、提高免疫功能等活性[8-14]。本研究采用正交試驗法,考察乙醇濃度、提取時間、提取溫度、溶媒用量對上述成分轉移率和干膏得率等多指標的影響,優(yōu)選理沖生髓飲的醇提工藝,以期為理沖生髓飲的進一步深入研究提供數(shù)據(jù)。

        1 儀器與試藥

        SFE220-40-100超臨界萃取裝置(江蘇溫奧機械設備有限公司),AK-400B中藥粉碎機(泰州金誠制藥機械有限公司),DZF-6050真空干燥箱(北京北方利輝試驗儀器設備有限公司),KDM-1000調溫電熱套(江蘇杰瑞爾電器有限公司),TGL-16G高速離心機(北京佳源興業(yè)科技有限公司),F(xiàn)A2104A電子分析天平(上海精天電子儀器有限公司),LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津公司),BenchTop K真空冷凍干燥機(美國VIRTIS公司),WFZUV-4802H紫外分光光度計(上海尤尼柯儀器有限公司),N1100-OSB- 2100旋轉蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)。

        理沖生髓飲方中各藥(人參、黃芪、淫羊藿、莪術等)均由黑龍江中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院提供,經黑龍江中醫(yī)藥大學孫慧峰教授鑒定均符合2015年版《中華人民共和國藥典》各藥項下規(guī)定。對照品人參皂苷Rg1(批號110703-201128)、人參皂苷Rb1(批號110704-201424)、人參皂苷Re(批號110754- 201324)、黃芪甲苷(批號110781-201314)、毛蕊異黃酮葡萄糖苷(批號111920-201304)、淫羊藿苷(批號110737-200415)、寶藿苷Ⅰ(批號111852-201102),中國食品藥品檢定研究院;人參皂苷Rd(批號MUST- 11041212),成都曼斯特生物科技有限公司。乙腈(GR級,美國迪馬科技有限公司),磷酸(GR級,天津賽孚瑞科技有限公司),HPLC所用水為屈臣氏蒸餾水,實驗用水為重蒸餾水,其余試劑均為分析純。

        2 方法與結果

        2.1 理沖生髓飲的制備

        取處方量飲片,以超臨界流體萃取法(SCFE)萃取,獲得萃取物;藥渣繼續(xù)以適宜濃度乙醇回流提取,提取液回收乙醇后濃縮至適量;藥渣揮盡溶劑后,繼續(xù)以水回流提取,水提液濃縮后,與上述濃縮液合并,加入萃取物,攪勻,即得。本研究采用正交試驗法優(yōu)化其中的醇提工藝。

        2.2 干膏得率測定

        取1/10正交試驗獲得的提取液,置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干后,置105 ℃烘箱中干燥至恒重,在干燥器中冷卻30 min,精密稱定,計算干膏得率。

        2.3 黃酮類和皂苷類成分檢測

        2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ對照品適量,加甲醇制成每1 mL含0.25 mg毛蕊異黃酮葡萄糖苷、1.00 mg淫羊藿苷、0.50 mg寶藿苷Ⅰ的混合對照品貯備液。精密稱取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd和黃芪甲苷對照品適量,加甲醇制成每1 mL含1.0 mg人參皂苷Rg1、2.0 mg人參皂苷Re、1.0 mg人參皂苷Rb1、1.0 mg人參皂苷Rd和1.0 mg黃芪甲苷的混合對照品貯備液。

        2.3.2 供試品溶液的制備 正交試驗獲得的提取液,減壓回收乙醇后加水分散,然后用乙酸乙酯萃取至無色,合并乙酸乙酯層,減壓回收乙酸乙酯后,加甲醇溶解,過濾,即得。

        2.3.3 陰性對照溶液的制備 分別按處方比例稱取除黃芪、淫羊藿,除黃芪、人參之外的其余藥味,按“2.1”項下方法制備缺黃芪、淫羊藿陰性對照溶液和缺黃芪、人參陰性對照溶液。

        2.3.4 色譜條件 采用Dikma Diamonsil-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動相為0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脫(見表1),柱溫30 ℃,流速1.0 mL/min,進樣量20 μL,檢測波長為270 nm(黃酮類成分)、203 nm(皂苷類成分)。

        表1 流動相梯度洗脫條件(%)

        2.3.5 系統(tǒng)適用性試驗 分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液和空白甲醇,按“2.3.4”項下色譜條件進樣,記錄色譜圖(見圖1、圖2)。各主要色譜峰與其左右峰的分離度均大于1.5,理論塔板數(shù)均大于7000。

        注:S1.空白溶劑;S2.對照品;S3.缺黃芪陰性對照; S4.缺淫羊藿陰性對照;S5.供試品; 1.毛蕊異黃酮葡萄糖苷;2.淫羊藿苷;3.寶藿苷Ⅰ

        注:S1.空白溶劑;S2.對照品;S3.缺人參陰性對照;S4.缺黃芪陰性對照; S5.供試品;1.人參皂苷Rg1;2.人參皂苷Re;3.人參皂苷Rb1; 4.黃芪甲苷;5.人參皂苷Rd

        2.3.6 線性關系考察 按逐級稀釋法,分別精密吸取適量混合對照品溶液于10 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,得混合對照品系列溶液,按“2.3.4”項下色譜條件進行測定,以峰面積()對質量濃度()進行線性回歸,得到各成分的回歸方程。毛蕊異黃酮葡萄糖苷:=5.0E+7-984 485,=0.999 9,在0.25~2.5 μg范圍內線性關系良好;淫羊藿苷:=3.0E+7+45 106,=0.999 8,在1.0~10.0 μg范圍內線性關系良好;寶藿苷Ⅰ:=7.0E+7+69 274,=0.999 8,在0.5~5.0 μg范圍內線性關系良好。人參皂苷Rg1:=1.0E+7-35 999,=0.999 6,在1.0~10.0 μg范圍內的線性關系良好;人參皂苷Re:=1.0E+7+47 082,=0.999 7,在2.0~20.0 μg范圍內線性關系良好;人參皂苷Rb1:=1.0E+7+112 642,=0.999 7,在1.0~10.0 μg范圍內線性關系良好;人參皂苷Rd:=1.0E+7-88 267,=0.999 7,在1.0~10.0 μg范圍內線性關系良好;黃芪甲苷:=1.0E+7-10 578,=0.999 8,在1.0~10.0 μg范圍內線性關系良好。

        2.4 醇提工藝優(yōu)化

        2.4.1 提取次數(shù) 取處方量藥材,考察提取次數(shù)對醇提工藝的影響。結果表明,提取次數(shù)對醇提工藝的影響較大。提取2次與提取1次相比,各成分轉移率及干膏得率均較高,當提取次數(shù)增加至3次時,各成分轉移率無明顯變化,見表2。為減少溶劑的消耗,節(jié)省提取時間,故選擇提取次數(shù)為2次。

        表2 不同提取次數(shù)對干膏得率及各成分轉移率的影響(%)

        2.4.2 正交試驗 以乙醇濃度(A)、提取時間(B)、提取溫度(C)、溶媒用量(D)作為自變量因素,采用L9(34)正交試驗,以多指標綜合加權評分方法確定最佳醇提工藝。設定滿分為100分,干膏得率及毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ轉移率標準化數(shù)據(jù)的權重系數(shù)為10,人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd和黃芪甲苷轉移率標準化數(shù)據(jù)的權重系數(shù)為12。綜合評分=10×干膏得率ib+10×毛蕊異黃酮葡萄糖苷轉移率ib+10×淫羊藿苷轉移率ib+10×寶藿苷Ⅰ轉移率ib+12×人參皂苷Rg1轉移率ib+12×人參皂苷Re轉移率ib+12×人參皂苷Rb1轉移率ib+12×人參皂苷Rd轉移率ib+12×黃芪甲苷轉移率ib。其中i=1,2,3,…,9;指標ib為以各指標的最大值作為參照對該指標各數(shù)據(jù)進行標準化處理后的值,即指標ib=指標i÷指標max。正交試驗因素水平見表3,正交試驗結果見表4、表5,方差分析見表6。

        直觀分析結果表明,4個影響因素的主次順序為D(溶媒用量)>C(提取溫度)>A(乙醇濃度)>B(提取時間),最佳工藝A1B2C3D3。方差分析結果表明,取離均差平方和最小項(B)作為誤差估計,用以檢驗其他因素作用的顯著性。結果表明,4個影響因素的主次順序仍為D(溶媒用量)>C(提取溫度)>A(乙醇濃度)>B(提取時間),其中,因素D有極顯著影響(<0.01),因素C和A有顯著影響(<0.05)。最終確定理沖生髓飲的最佳工藝為A1B2C3D3,即:加入10倍量60%乙醇浸泡2 h,加熱回流提取2次,提取時間1.5 h,提取溫度80 ℃。

        2.4.3 最佳工藝驗證 取處方量藥材,按“2.4.2”項下最佳工藝條件進行驗證性試驗,分別測定理沖生髓飲干膏得率及毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、黃芪甲苷的轉移率,結果見表7。結果表明,該工藝各指標成分提取均較完全,且重復性好、可行性高。

        表3 正交試驗因素水平表

        表4 正交試驗干膏收率和各成分轉移率(%)

        表5 正交試驗設計與結果

        表6 試驗結果的方差分析

        注:0.05(2,2)=19,0.01(2,2)=9

        表7 最佳工藝驗證性試驗(%,n=3)

        3 討論

        理沖生髓飲由人參、黃芪、淫羊藿、莪術等8味中藥組成。2015年版《中華人民共和國藥典》(一部)人參、黃芪、淫羊藿藥材項下分別以人參皂苷Rg1、Re、Rb1及黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、寶藿苷為含量測定指標[15]。現(xiàn)代研究亦表明,上述成分均具有不同程度的抑制腫瘤作用[8-13]。此外,人參皂苷Rd具有顯著的抗癌活性[14]。故本研究采用毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、黃芪甲苷的轉移率和干膏得率為指標,并采用綜合加權評分法,根據(jù)各有效成分對腫瘤抑制作用的貢獻大小,進行綜合評分,使其可以更合理、更客觀、更全面地評價理沖生髓飲的醇提工藝。

        本試驗參考2015年版《中華人民共和國藥典》(一部)人參、黃芪、淫羊藿藥材項下含量測定方法[15]和文獻中報道的HPLC分析方法[16-17],通過預試驗考察了不同供試品制備方法、不同流動相組成、不同檢測波長等對理沖生髓飲醇提液分析效果的影響,最后確定供試品用乙酸乙酯處理,流動相為0.1%磷酸水溶液-乙腈,檢測波長為270 nm(黃酮類成分)、203 nm(皂苷類成分)。該方法不僅能同時測定毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ這3種黃酮類成分,還能同時測定人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd及黃芪甲苷這5種皂苷類成分,并采用同一PDA檢測器實現(xiàn)了3種黃酮類和5種皂苷類成分的同時測定,從而為進一步建立理沖生髓飲質量標準奠定了良好的基礎。

        單因素試驗表明,在相同的提取工藝條件下,提取次數(shù)為2次以上,黃酮類和皂苷類成分含量變化不明顯,故選擇提取次數(shù)2次。以乙醇濃度、乙醇用量、提取溫度、提取時間4個因素為自變量,采用L9(34)正交試驗,以綜合加權評分法為評價基礎,最終確定醇提最佳工藝,即:將SCFE萃取后的藥渣加60%乙醇浸泡2 h,80 ℃加熱回流提取1.5 h,提取2次,合并提取液減壓濃縮至適量。該工藝具有提取率高、穩(wěn)定性好的特點。

        [1] 韓鳳娟,隋麗華,馬榮,等.理沖生髓飲對卵巢上皮性癌患者免疫狀態(tài)影響的臨床研究[J].中醫(yī)藥信息,2003,20(2):37-38.

        [2] 龔麗紅,韓鳳娟,王秀霞,等.理沖生髓飲對卵巢癌細胞株SKOV3基因表達的影響[J].山東中醫(yī)藥大學學報,2007,31(4):334-337.

        [3] 韓鳳娟,王艷紅,隋麗華,等.理沖生髓飲藥物血清對卵巢癌細胞集落形成和Bcl-2蛋白表達的影響[J].中國中醫(yī)藥科技,2005,12(6):345- 346.

        [4] 韓鳳娟,王艷紅,王秀霞,等.復方理沖生髓飲對二甲基苯蒽誘發(fā)的大鼠卵巢腫瘤組織形態(tài)學的影響[J].中醫(yī)藥學報,2006,34(6):31-33.

        [5] 韓鳳娟,徐峰,王艷紅,等.理沖生髓飲對大鼠卵巢腫瘤組織P53和PCNA表達影響的研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2007,14(6):402-403.

        [6] 懷其娟,韓鳳娟,王秀霞,等.中藥復方理沖生髓飲對Casp-8和CXCL2基因在人卵巢癌細胞株SKOV3中表達的影響[J].中國婦幼保健,2010, 25(12):1689-1692.

        [7] 邱麗楠,韓鳳娟,吳效科,等.理沖生髓飲對Fischer344大鼠卵巢腫瘤組織的抑瘤作用及對VEGF表達的影響[J].世界中西醫(yī)結合雜志,2010, 5(11):939-941.

        [8] 張有為,竇德強,陳英杰,等.人參皂苷對人體骨肉瘤細胞U2OS增殖的影響[J].中草藥,2001,32(3):232-235.

        [9] 葛迎春,劉平,韓信昌.人參皂Rb1,Rg1,Re和Rh1對Hela細胞的影響[J].中藥藥理與臨床,1997,13(6):18-20.

        [10] 張冬青,汪德清,于勇.黃芪總黃酮和毛蕊異黃酮對K562細胞的抑制作用及其機制研究[J].中國中藥雜志,2011,36(24):3502-3505.

        [11] 劉明華,任美萍,陳健平,等.黃芪皂苷抗腫瘤活性研究[J].中藥藥理與臨床,2009,25(2):68-70.

        [12] 李翠玲,張玲,顧洪濤,等.淫羊藿苷體內抑瘤作用及其機制[J].中國腫瘤生物治療雜志,2007,14(2):137-142.

        [13] 王婷,張金超,陳瑤,等.6種淫羊藿黃酮抗氧化和抗腫瘤活性的比較[J].中國中藥雜志,2007,32(8):715-718.

        [14] YANG Z G, SUN H X, YE Y P. Ginsenoside Rd from Panax notoginseng is cytotoxic towards HeLa cancer cells and induces apoptosis[J]. Chem Biodivers,2006,3(2):187-197.

        [15] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:8,302,327.

        [16] 范輝,顧泉琳,貝偉劍.HPLC法測定烏參醒腦滴丸中人參皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd[J].中成藥,2012,34(7):1280-1283.

        [17] 宋成英,封加福.HPLC同時測定黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷和黃芪甲苷[J].中國實驗方劑學雜志,2013,19(11):115-117.

        Optimization of Ethanol Extraction Technology ofDecoction by Multi-index Orthogonal Test

        WANG Yan-hong1, ZHAO Juan-ping1, SHANG Dong-xue1, ZHAO Xue1, TIAN Miao2, HAN Feng-juan2

        Objective To optimize the ethanol extraction technology ofDecoction. Methods An L9(34) orthogonal test was used in the study. The extraction rates of calycosin glycoside, icariin, baohuoside Ⅰ, ginsenoside Rg1, ginsenoside Re, ginsenoside Rb1, astragaloside, and ginsenoside Rd were set as indexes. The influence of ethanol concentration, extraction time, extraction temperature, and amount of ethanol on the yield ofDecoction were detected by comprehensive scoring method. Results The optimal ethanol extraction technology forDecoction was soaking for 2 h with ten times of 60% ethanol and then reflux extracting for two times; extraction time was 1.5 h each time at 80 ℃. Conclusion The optimal extraction technology is efficient, stable and feasible, which can provides data for the further study ofDecoction.

        Decoction; orthogonal test; multi-index; ethanol extraction technology

        10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.018

        R283.5

        A

        1005-5304(2017)07-0076-05

        國家自然科學基金(81273788、81473717)

        韓鳳娟,E-mail:hanfengjuan2004@163.com

        (2016-09-08)

        (2016-09-21;編輯:陳靜)

        猜你喜歡
        毛蕊藿苷甲苷
        淫羊藿中朝藿苷A、B和C的酶轉化及其稀有箭藿苷的制備
        毛蕊異黃酮對宮頸癌HeLa細胞增殖及凋亡的影響
        運用血清藥理學初步探討毛蕊異黃酮苷的血管新生作用
        新型雙相酶水解體系制備寶藿苷I
        中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:26:00
        曲美他嗪聯(lián)合黃芪甲苷對心力衰竭犬心肌細胞Ca2+水平的影響
        中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:12:05
        補肺活血膠囊中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、毛蕊異黃酮的測定方法
        雙藿苷A分子印跡聚合物的制備及應用
        中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:49
        黃芪甲苷對特發(fā)性肺纖維化模型大鼠肺組織CD34表達的影響
        HPLC-ELSD法測定牛黃降壓丸中黃芪甲苷的含量
        HPLC測定芪衛(wèi)顆粒中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量
        欧美xxxxx精品| 国产一区二区波多野结衣| 国产又滑又嫩又白| 亚洲AV激情一区二区二三区| 风韵丰满妇啪啪区老老熟女杏吧| 亚洲男人免费视频网站| 伊人精品久久久久中文字幕| 天美传媒精品1区2区3区| 久久夜色精品国产亚洲噜噜| 91中文在线九色视频| 久久成人国产精品一区二区| 久久露脸国产精品| 成黄色片视频日本秘书丝袜| 国产三级精品三级在线| 韩国av一区二区三区不卡| 亚洲综合精品伊人久久| 国产91对白在线观看| 久久精品国产亚洲av夜夜| 8x国产精品视频| 亚洲熟女综合一区二区三区| 亚洲av影院一区二区三区四区| 免费女女同黄毛片av网站| 国产婷婷色一区二区三区| 蜜臀aⅴ国产精品久久久国产老师 国产精品久久婷婷六月丁香 | 国产高清在线观看av片| 久久精品人人做人人爽电影蜜月 | 在线观看国产成人av片| 精品视频在线观看一区二区三区| 高潮精品熟妇一区二区三区| 久久久久久久综合综合狠狠 | 国产精品三级av及在线观看 | 激情五月天色婷婷久久| 国产精品a免费一区久久电影| chinese国产乱在线观看| 亚洲综合精品在线观看中文字幕| 国产av精品一区二区三区久久| 国产顶级熟妇高潮xxxxx| 亚洲欧美日韩精品中文乱码| 亚洲国产av高清一区二区三区| 国产亚洲一区二区在线观看 | 久9热免费精品视频在线观看|