何 深

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血液腫瘤患者IDH1/IDH2基因突變發(fā)生率及其血液病分布特點(diǎn)研究

何 深

目的 研究血液腫瘤患者IDH1/IDH2基因突變發(fā)生率和其血液病的分布特點(diǎn)。方法 選取300例不同病情的血液患者骨髓的樣品，其中245例是血液腫瘤患者，55例是非血液腫瘤患者，對(duì)比檢查IDH2和IDH1基因是否在血液腫瘤患者中有突變行為。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)共發(fā)現(xiàn)了7個(gè)錯(cuò)義的突變基因，其中2個(gè)為IDH2基因突變，4個(gè)為IDH1基因突變；還有2個(gè)IDH1同義突變。4個(gè)IDH1的突變類型是：199M、R132C、R131D及R132H，前3個(gè)突變患者都出現(xiàn)在3例急性髓系的白血病患者中，最后1例出現(xiàn)在急性淋巴細(xì)胞的白血病患者中。2個(gè)IDH2的錯(cuò)義突變類型是：P167R和R172K，這2例也都出現(xiàn)在急性髓系的白血病患者中。在發(fā)生IDH1錯(cuò)義基因突變的4例患者中，其體內(nèi)白細(xì)胞的計(jì)數(shù)明顯升高，且患者年齡均大于60歲。在發(fā)生IDH2基因突變的2例患者中，其體內(nèi)白細(xì)胞的計(jì)數(shù)明顯降低，且患者的年齡均小于60歲。結(jié)論 96例的急性白血病患者的檢測(cè)中，共發(fā)現(xiàn)了9例突變患者，其IDH的突變率是9.3%，且7例發(fā)生于急性髓系的白血病患者中，說明急性髓系的白血病的發(fā)病和IDH的突變有緊密的聯(lián)系。

血液病分布；IDH2基因；IDH1基因；血液腫瘤

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:888～890)

淋巴瘤癥、多發(fā)性的骨髓瘤癥及不同類型的白血病等都屬于血液的腫瘤。遺傳改變與血液腫瘤有關(guān)的主要是體內(nèi)的基因突變和染色體的易位等。很多專家的調(diào)查顯示，抑癌的基本突變和原發(fā)性癌基因都能夠引起人類的腫瘤。血液的腫瘤內(nèi)不但有和原發(fā)性癌基因相似功能的染色體的易位，還包含很多抑癌基因和原發(fā)性癌基因特別位點(diǎn)的突變[1-5]，這些特殊的突變和血液的腫瘤發(fā)生也有很緊密的聯(lián)系。

當(dāng)前，人們?cè)谘旱哪[瘤內(nèi)發(fā)現(xiàn)了很多的抑癌基因和原發(fā)性癌基因，它們的發(fā)現(xiàn)讓血液腫瘤患者在治療的選擇和預(yù)后的評(píng)估提供了理論基礎(chǔ)，比如FLT3、NRAS、KRAS、NPM1等。DNMT、IDH2、IDH1、TET2等是近些年發(fā)現(xiàn)和血液腫瘤相關(guān)的基本突變的類型，其中IDH基因是和血液疾病聯(lián)系非常密切的一種基因，尤其是急性髓細(xì)胞白血病(acute myelocytic leukemia，AML)，相關(guān)研究還沒有辦法確定IDH的突變基因在AML預(yù)后方面的影響，因此，本文選擇IDH2和IDH1基因作為研究的對(duì)象，檢測(cè)IDH2和IDH1基因在血液腫瘤患者體內(nèi)的突變情況。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2014年10月至2016年10月在我院接受治療的300例不同病情的血液患者骨髓的樣品，其中245例是血液腫瘤患者:急性的髓系白血病72例，急性淋巴細(xì)胞的白血病24例，多發(fā)性的骨髓瘤31例，慢性的髓系白血病34例，骨髓增生引起異常綜合征18例，非霍奇性的金淋巴瘤36例，慢性淋巴細(xì)胞的白血病24例，霍奇性的金淋巴瘤6例；55例是非血液腫瘤患者：缺鐵性的貧血癥10例，特發(fā)性的血小板變少性的紫癜24例，再生阻礙性的貧血9例，體內(nèi)白細(xì)胞的減少癥12例。對(duì)比檢查IDH2和IDH1基因是否在血液腫瘤患者中有突變行為。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 采集樣本 在無菌真空狀態(tài)下收集患者的骨髓2 ml，使用EDTA鈉進(jìn)行抗凝處理，5 ℃環(huán)境下保存。

1.2.2 使用Omega的試劑盒提取患者基因組的DNA

①在16 m的離心管內(nèi)，加入患者已抗凝的1 ml骨髓樣品，然后加入3 ml的ERL，搖均勻后在室溫內(nèi)放6 min。②使用離心機(jī)在轉(zhuǎn)速2000下離心4 min，把樣品的上清去除但不要打散下面的白色沉淀物。在試管內(nèi)加入220 μl的WTL，使離心機(jī)快速震蕩40 s，使細(xì)胞破解。③在試管內(nèi)放入4 ml的蛋白酶，搖均勻，放在60 ℃的溫水內(nèi)35 min。然后放入3 μl的Rnase搖均勻，在室溫內(nèi)放15 min。④在試管內(nèi)放入260 μl的Buffer，搖均勻，在70 ℃下放9 min。⑤在試管內(nèi)放入300 μl的無水乙醇，搖均勻。⑥使用離心機(jī)將上述溶液在13000轉(zhuǎn)下離心2 min，然后倒去過濾液。⑦把溶液裝在新試管內(nèi)，在倒入600 μl的HB，在13000轉(zhuǎn)下離心2分鐘，然后倒去過濾液。⑧在把溶液倒入試管內(nèi)，放入700 μl的DNA Wash B，使用離心機(jī)，在13000轉(zhuǎn)下離心2 min，然后倒去過濾液。⑨把溶液倒入1.6 m離心管內(nèi)，在倒入80 μl 70 ℃的Elution，在室溫下放置6 min，使用離心機(jī)11000轉(zhuǎn)下離心2 min，把DNA洗脫出來。⑩使用紫外分光的光度儀檢測(cè)DNA的濃度280/260，分別裝在不同的試管內(nèi)存放于-20℃下。

1.3 聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增的IDH2和IDH1的第四號(hào)外顯因子

IDH2和IDH1基因聚合酶鏈反應(yīng)所需的實(shí)驗(yàn)條件[6]，見表1。

表1 IDH2和IDH1的引物所需條件

1.4 引物

按照第4號(hào)的外顯因子引物，將反應(yīng)后產(chǎn)物經(jīng)電泳處理，將所得目的條帶樣品送到檢測(cè)處，對(duì)比正常的人體基因序列和測(cè)試的基因序列。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。組內(nèi)數(shù)據(jù)用t檢驗(yàn)，組間對(duì)比應(yīng)用one-way anova分析，若方差不符合比較要求則用組組對(duì)比比較。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P>0.05為差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IDH2和IDH1的突變類型和發(fā)生突變的概率

實(shí)驗(yàn)共發(fā)現(xiàn)了7個(gè)錯(cuò)義的突變基因，其中3個(gè)為IDH2基因突變，4個(gè)為IDH1基因突變；還有2個(gè)IDH1同義突變。4個(gè)IDH1的突變類型是：199M、R132C、R131D及R132H，2個(gè)IDH2的錯(cuò)義突變類型是：P167R和R172K，這2例亦出現(xiàn)在急性髓系的白血病患者中，見表2。

2.2 患者基因發(fā)生突變的臨床表征

在發(fā)生IDH1錯(cuò)義基因突變的4例患者中，其體內(nèi)白細(xì)胞的計(jì)數(shù)明顯升高，且患者年齡均大于60歲。在發(fā)生IDH2基因突變的3例患者中，其體內(nèi)白細(xì)胞的計(jì)數(shù)明顯降低，且患者的年齡均小于64歲。

3 討論

血液腫瘤的發(fā)病是一個(gè)多步驟而且較復(fù)雜的過程，它包含細(xì)胞活動(dòng)的周期、抑癌基因的失活、癌癥基因的活動(dòng)化、DNA自我修復(fù)的異常及凋亡路徑的不正常等[7-9]。近年來，隨著人體全基因測(cè)序在血液腫瘤中的使用，人們發(fā)現(xiàn)體內(nèi)基因突變的概率已經(jīng)大幅提升。

表2 血液疾病中 IDH2和IDH1突變的分布情況分析

本文對(duì)300例不同類型血液疾病患者的IDH的基因突變進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。我們共發(fā)現(xiàn)了7個(gè)錯(cuò)義的突變基因，其中3個(gè)為IDH2基因突變，4個(gè)為IDH1基因突變；還有2個(gè)IDH1同義突變。4個(gè)IDH1的突變類型是：199M、R132C、R131D及R132H，前3個(gè)突變患者都出現(xiàn)在了3例急性髓系的白血病患者中，最后1例出現(xiàn)在了急性淋巴的細(xì)胞白血病患者中。2個(gè)IDH2的錯(cuò)義突變類型是：P167R和R172K，這2例也都出現(xiàn)在了急性髓系的白血病患者中。在發(fā)生IDH1錯(cuò)義基因突變的4例患者中，其體內(nèi)白細(xì)胞的計(jì)數(shù)明顯升高，且患者年齡均大于60歲。在發(fā)生IDH2基因突變的2例患者中，其體內(nèi)白細(xì)胞的計(jì)數(shù)明顯降低，且患者的年齡均小于60歲。

綜上所述，在對(duì)96例的急性白血病患者的檢測(cè)中，共發(fā)現(xiàn)了8例突變患者，其IDH的突變率是8.3%，且6例發(fā)生于急性髓系的白血病患者中，說明急性髓系的白血病的發(fā)病和IDH的突變有緊密的聯(lián)系。

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(編輯：甘 艷)

Study on the Incidence of IDH1/IDH2 Gene Mutations and the Distribution of Blood Diseases in Patients with Hematological Malignancies

HEShen.

KaifengCentralHospital，Kaifeng，475000

Objective To study the incidence of IDH1/IDH2 gene mutations and the distribution of blood diseases in hematological malignancies.Methods A total of 300 patients with hematologic malignancies were selected.245 patients were hematologic malignancies and 55 non-hematologic malignancies.The IDH2 and IDH1 genes were compared between the 2 groups whether there was mutational behavior in patients with hematologic malignancies.Results 7 missense mutations were identified，of which 3 were IDH2，4 were IDH1，and 2 were IDH1. 4 mutation types of IDH1 were 199M，R132C，R131D and R132H.The first 3 mutations were found in 3 patients with acute myeloid leukemia and the last one in patients with acute lymphoblastic leukemia.The 2 missense mutations of IDH2 were P167R and R172K，both of which were also found in patients with acute myeloid leukemia.In 4 patients with IDH1 missense mutations，the number of leukocytes in the patients was significantly higher and the patients were older than 60 years.In 2 patients with IDH2 gene mutation，the count of leukocytes in the gas was significantly reduced and the patients were younger than 60 years.Conclusion In 96 patients with acute leukemia，9 cases of mutant patients are found，the mutation rate of IDH is 9.3%，and occurred in patients with acute myeloid leukemia，the incidence of acute myeloid leukemia and IDH mutations are closely linked.

Hematologic disease；IDH2 gene；IDH1 gene；Hematological neoplasms

475000 河南省開封市中心醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.06.005

R733

A

1001-5930(2017)06-0888-03

2016-10-24

2017-04-20)