摘要：本文根據(jù)國(guó)標(biāo)檢測(cè)呋喃丹的方法，通過(guò)改變流動(dòng)相極性，討論了甲醇與水的流動(dòng)相比例對(duì)呋喃丹出峰時(shí)間的影響。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；呋喃丹；流動(dòng)相；極性；保留時(shí)間

中圖分類號(hào)：R123.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-672X（2017）03-0196-02

DOI：10.16647/j.cnki.cn15-1369/X.2017.03.107

Abstract：This research has discussed the effect of changing the proportion of methanol and ultra-pure water on the retention time of high performance liquid chromatography，according to the detection method of carbofuran in national standard of drinking water.

Key words：high performance liquid chromatography；carbofuran；Mobile Phase；Polarity；Retention time

1 前言

呋喃丹又名克百威，分子式C12H15NO3（2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基-甲基氨基甲酸酯），是廣泛用于糧食作物的氨基甲酸酯類廣譜性殺蟲(chóng)劑和殺線蟲(chóng)劑，呋喃丹在土壤中的殘留期較長(zhǎng)（降解半衰期為1～2個(gè)月）、在土壤中的移動(dòng)性能較大（水溶解度為700mg/L），其殘留通過(guò)雨水、地表徑流等途徑污染了生活用水及其它水體。

《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749-2006）[1]規(guī)定呋喃丹限值為0.007mg/L，《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法》（GB 5750-2006）[2]中介紹了利用高效液相色譜檢測(cè)呋喃丹的方法，本文參照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法并根據(jù)實(shí)際情況將色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化。

2 實(shí)驗(yàn)原理

在進(jìn)行高效液相色譜分析時(shí)，一個(gè)色譜分離的優(yōu)劣，是由色譜柱的柱容量、被分析組分的分離度和完成分析需要的時(shí)間這三個(gè)重要特性來(lái)評(píng)價(jià)的。在柱容量恒定，保證完全分離的條件下，如何縮短分析時(shí)間，就成為優(yōu)化色譜分析的重要指標(biāo)。

2.1 保留時(shí)間的影響因素

影響保留時(shí)間的因素主要有：a. 流動(dòng)相的比例與極性；b. 柱子與柱溫；c. 流速；d. 進(jìn)樣量；e. 輸液系統(tǒng)的壓力。除此之外，pH、離子強(qiáng)度等的微小變化都會(huì)引起保留時(shí)間的改變，具體的影響因素還要在實(shí)際操作中慢慢考察，經(jīng)過(guò)調(diào)整后才可以得到較好的色譜條件。在這些影響因素中，一般采用固定流速，改變流動(dòng)相的比例來(lái)調(diào)整保留時(shí)間。

2.2 流動(dòng)相極性對(duì)分離的影響

極性參數(shù)又可稱作極性指數(shù)，可以用其表示每種溶劑的洗脫強(qiáng)度的大小，又能反映每種溶劑的選擇性，在反相色譜中，溶劑的極性越大，其洗脫強(qiáng)度越小。多元混合溶劑中，可以通過(guò)調(diào)整流動(dòng)相的比例來(lái)改變流動(dòng)相的極性。以甲醇與水為例，甲醇的極性參數(shù)是5.1，水的極性參數(shù)是10.2，通過(guò)甲醇與水的極性參數(shù)和比例，可以計(jì)算混合溶劑的極性，表1為不同比例的甲醇與水混合后的極性。

3 呋喃丹樣品的測(cè)定

3.1 反應(yīng)機(jī)理

樣品經(jīng)過(guò)濾后注入反相HPLC中，其各種組分經(jīng)梯度洗脫色譜方式分離。經(jīng)過(guò)柱分離后，氨基甲酸酯類化合物與氫氧化鈉發(fā)生水解反應(yīng)，生成的甲胺與鄰苯二醛（OPA）和2-巰基乙醇（MERC）反應(yīng)生成一種強(qiáng)熒光的異吲哚產(chǎn)物，可用熒光檢測(cè)器定量。

3.2 分析條件

3.2.1 儀器與試劑

島津高效液相色譜儀Shimadzu LC-20A 氨基甲酸酯系統(tǒng)；熒光檢測(cè)器；色譜柱Inertsil ODS-SP，5?m，4.6×250mm；衍生劑、流動(dòng)相、上機(jī)樣品采用0.45?m過(guò)濾膜過(guò)濾[3]。

1. 呋喃丹標(biāo)準(zhǔn)品；

甲醇：HPLC級(jí)；

超純水；

氫氧化鈉溶液[c（NaOH）=0.05mol/L]：稱取2.0g氫氧化鈉，溶于1000mL超純水中，用0.45?m過(guò)濾膜過(guò)濾；

2-巰基乙醇乙腈溶液（1+1）：將5mL 2-巰基乙醇和5mL乙腈混合；

四硼酸鈉溶液[c（Na2B4O7）=0.05mol/L]：取19.1g十水四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）和20mL甲醇，溶于1000mL超純水中；

鄰苯二醛溶液（o-phthaldehyde，OPA）：稱取0.100g鄰苯二醛，溶于10mL甲醇中，加入到1000mL四硼酸鈉溶液中，混合，過(guò)濾。然后加入100?L2-巰基乙醇乙腈溶液，混合。

3.2.2 分離條件

流動(dòng)相 A： 色譜純甲醇； 流動(dòng)相 B：超純水； 流速：1.0mL/min；

色譜柱：Inertsil ODS-SP，5?m ，4.6×250mm； 柱溫：40℃ ；熒光檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：Ex：339nm，Em：445nm； 檢測(cè)池溫度：40℃；柱后衍生反應(yīng)條件： CRB-6A 反應(yīng)箱溫度：95℃ 流動(dòng)相C：水解反應(yīng)液C-0.05mol/L NaOH 溶液，流速：0.5mL/min； 流動(dòng)相D：衍生試劑D-OPA溶劑，流速：0.5ml/min。

3.3 數(shù)據(jù)討論

流動(dòng)相比例對(duì)保留時(shí)間的影響：配制呋喃丹濃度為20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣量10?L，其他分析條件恒定，改變流動(dòng)相的比例，得出下圖的分析結(jié)果：

從圖1、圖2、圖3比較看出，隨著流動(dòng)相中水的比例的增加，呋喃丹的出峰時(shí)間不斷推后。

4 結(jié)語(yǔ)

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，考慮出峰時(shí)間和分離度，最佳方案為選取甲醇和水體積比80∶20作為分析條件，分析時(shí)間設(shè)定為6min，實(shí)驗(yàn)中采用的呋喃丹檢測(cè)方法保留時(shí)間4.939min，比《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法》（GB 5750—2006）中介紹的呋喃丹檢測(cè)方法的保留時(shí)間8.265min提前，縮短了分析時(shí)間。在實(shí)際操作中，如果分析樣品時(shí)出現(xiàn)重疊峰，可以適當(dāng)改變流動(dòng)相的比例，以調(diào)節(jié)出峰時(shí)間和分離度，使數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)中采用二元高壓梯度系統(tǒng)，相對(duì)于國(guó)標(biāo)的四元低壓梯度方法流量控制精度高，混合效率好，梯度組成精確，重現(xiàn)性好，適合分析成分組成復(fù)雜的樣品。實(shí)驗(yàn)表明，該方法靈敏度高，選擇性好，保留時(shí)間、峰面積重現(xiàn)性良好，線性相關(guān)系數(shù) R>0.999，滿足水質(zhì)檢測(cè)對(duì)分析方法靈敏、準(zhǔn)確、快速的要求，可更好地服務(wù)于水質(zhì)監(jiān)測(cè)工作，確保供水安全。

參考文獻(xiàn)

[1] GB 5749—2006.生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2] GB/T 5750—2006.生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法[S].

[3] 劉珍.化驗(yàn)員讀本-儀器分析[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007.

收稿日期：2017-05-03

作者簡(jiǎn)介：李秀川（1986-），女，本科，華南師范大學(xué)，水質(zhì)檢驗(yàn)助理工程師。