李文輝++李窕妍++李俊毅

堿性橙是一種偶氮類堿性工業(yè)染料，主要用于紡織品、皮革制品及木制品的染色，已經被認定是一種可以使人致癌的物質，不得用于與人體長期直接接觸的紡織和服裝產品中。一些不法商販為了增加食品的色澤光亮，以次充好， 在鮮海魚、豆制品、腐竹、飲料等食品中使用堿性橙染色， 使消費者的身體健康受到了嚴重威脅。

堿性橙染料的種類主要有堿性橙21、堿性橙2和堿性橙22等3種，本方法采用高效液相色譜法，在GB/T 23496-2009的基礎上，對色譜條件進行試驗改進，建立一套更加快速、準確測定食品中非食用色素堿性橙含量的方法。

試驗部分

試劑與溶液。除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，實驗用水符合GB/T 6682中一級水要求。

液體樣品：飲料；

甲醇，色譜純；

乙腈，色譜純；

20mmol/L乙酸銨溶液：稱取1.54g乙酸銨溶于1000 mL水中；

定容液：取65mL甲醇加入35mL 20 mmol/L乙酸銨溶液中，混勻；

標準品：堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22，純度≥95 %；

1.0mg/mL 堿性橙染料標準儲備溶液：分別稱取100mg（精確至0.1mg）堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22，置于100mL容量瓶中，加無水甲醇溶解并定容至刻度，混勻，該溶液在4 ℃條件下避光保存，有效期為1個月；

0.1mg/mL堿性橙染料標準溶液：準確移取10 mL堿性橙染料標準儲備溶液于100mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混勻。

分別移取堿性橙染料標準溶液5.00mL、10.00mL、20.00mL于100 mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混勻，分別相當于5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL濃度標準溶液。

儀器與設備。高效液相色譜，附有紫外檢測器；天平：感量0.0001g和0.01g；超聲波清洗儀；渦旋振蕩器；電熱板。

試驗方法

將樣品混勻，稱取20g（精確至0.01g）樣品于100mL燒杯中，電熱板上加熱揮發(fā)至近干，用定容液溶解轉移到刻度試管中并定容至25mL，經0.45μm濾膜過濾后待進樣。

高效液相色譜測定

色譜條件。

色譜柱：C18（4.6mm×250mm，5μm）；

流動相：甲醇+20mmol/L乙酸銨；

流速：1.0mL/min；

梯度洗脫程序參見表1；

柱溫：30 ℃；

檢測波長：449nm；

進樣量：20μL。

標準曲線繪制。

用配制的堿性橙染料標準工作液繪制以峰面積為縱坐標、工作溶液濃度為橫坐標的標準工作曲線。

結果計算

試樣中每種堿性橙染料的含量按下式分別計算：

X=

式中：

X——試樣中每種堿性橙染料的含量（mg/kg）；

c——由標準曲線查出的試樣液中每種堿性橙染料的濃度（μg/mL）；

V——樣品最終定容體積（mL）；

m——試樣的質量（g）。

計算結果保留小數(shù)點后一位數(shù)字。

結果與討論

標準譜圖。如圖1。

干擾試驗。在色譜條件下，食品中的添加劑苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、咖啡因在449 nm 處幾乎無吸收， 不會干擾堿性橙的測定。

線性關系及檢出限。按試驗方法對堿性橙2 、堿性橙21 、堿性橙22等3 種堿性橙混合標準溶液系列進行測定，均在5.0～20.0 μg/mL范圍內與峰面積呈線性關系， 線性回歸方程、相關系數(shù)及檢出限（3S/N）見表2。

回收試驗及精密度。按試驗方法對樣品做加標回收試驗， 結果見表3。

作者簡介：

李文輝（1971-），男，廣東梅縣人，工程師，研究方向：食品檢驗。