秦玉婷，尼羅帕爾?吐?tīng)栠d，郝建萍

（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液病中心二病區(qū)，新疆 烏魯木齊 830054）

原發(fā)性血小板增多癥的相關(guān)基因在維、哈、漢族患者中的基因表達(dá)及臨床意義

秦玉婷，尼羅帕爾?吐?tīng)栠d，郝建萍*

（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液病中心二病區(qū)，新疆 烏魯木齊 830054）

目的 探討原發(fā)性血小板增多癥（ET）的JAK2、CALR及MPL基因在維吾爾族、哈薩克族、漢族患者中的基因表達(dá)及臨床意義。方法 選取2015年7月～2017年2月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的維族、哈族、漢族的ET患者96例作為ET組，選擇同期健康體檢者20例為健康對(duì)照組，比較不同民族ET患者骨髓或外周血JAK2、CALR及MPL基因表達(dá)的變化。結(jié)果 ET組患者JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)率均高于對(duì)照組，（P＜0.05）；漢族JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性率均高于維族和哈族，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而維、哈族的三項(xiàng)基因陽(yáng)性率比較差異小，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），JAK2同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)均高于CALE及MPL的陽(yáng)性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 JAK2、CALR、MPL基因是ET患者的分子標(biāo)志物，且在漢族血統(tǒng)中陽(yáng)性表達(dá)更加明顯，維、哈族以JAK2基因陽(yáng)性表達(dá)為主，是其主要的分子標(biāo)志物。

ET；JAK2、CALR、MPL基因；臨床意義

ET是以骨髓中巨核細(xì)胞異常增生，外周血小板升高，且功能發(fā)生異常為主要表現(xiàn)的骨髓增殖性腫瘤[1]。維吾爾族、哈薩克族是新疆的主體少數(shù)民族，除了顯著的地域分布差異外，民族分布差異也是其主要的流行病學(xué)特征之一。ET發(fā)生率為1.5/10萬(wàn)，近年來(lái)隨著ET診斷標(biāo)準(zhǔn)中較低的血小板計(jì)數(shù)閾值、檢測(cè)水平的提高以及人們就診意識(shí)的增加，ET發(fā)病率呈升高趨勢(shì)。本研究利用新疆地域和民族的優(yōu)勢(shì)，檢測(cè)維族、哈族、漢族ET患者JAK2、CALR、MPL基因突變，分析維、哈、漢ET患者JAK2、CALR、MPL基因的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年7月～2017年2月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的維族、哈族、漢族的ET患者96例作為ET組，每個(gè)民族各32例患者，其中維族男20例，女12例，平均年齡（63.01±5.57）歲；哈族男21例，女11例，平均年齡（63.17±4.96）歲；漢族男19例，女13例，平均年齡（63.20±4.87）歲。同期采取自愿原則選擇在我院體檢的健康體檢者20例作為健康對(duì)照組，其中男14例，女6例，平均年齡（63.65±5.24）歲，不同民族及分組患者的一般資料比較差異小，（P＞0.05）。

1.2 方法

抽取受試者骨髓或者外周液2 mL，應(yīng)用鹽析法提取白細(xì)胞基因組DNA。合理調(diào)整DNA的終濃度為：100～200 mg/L。PCR擴(kuò)增參考Steensma等方法進(jìn)行引物的設(shè)計(jì)和PCR的檢測(cè)，分別檢測(cè)維族、哈族、漢族ET患者及對(duì)照組健康體檢者的JAK2、CALR、MPL基因突變情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，以（P＜0.05）為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組的JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)情況

ET組患者JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表1。

表1 ET患者JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)情況 [n（%）]

2.2 不同民族JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)情況

漢族JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性率均高于維族和哈族，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而維族和哈族JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），JAK2同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)均高于CALE及MPL的陽(yáng)性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表2。

表2 不同民族ET患者JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)情況比較 [n（%）]

3 討 論

ET是骨髓增殖性腫瘤中的一種，臨床主要表現(xiàn)為出血傾向、血栓塞以及脾臟腫大等癥狀。近幾年來(lái)，ET發(fā)病率持續(xù)走高，除與發(fā)病人數(shù)增加有關(guān)外，還可能與血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀的廣泛應(yīng)用，以及2008年世界衛(wèi)生組織對(duì)ET診斷標(biāo)準(zhǔn)提出的較低血小板計(jì)數(shù)閾值及JAK2基因突變普查等因素有關(guān)，使大量未有顯著臨床表現(xiàn)ET患者能夠早期被發(fā)現(xiàn)及明確診斷[2]。

ET的發(fā)生受多種致病因素影響，然而基因突變是其發(fā)病機(jī)制中的重要環(huán)節(jié)之一，也是ET患者的重要診斷依據(jù)及患者預(yù)后的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。大量的基礎(chǔ)及臨床研究顯示，約有50%以上ET患者存在JAK2 V617F突變，3%～5%存在MPL W515K基因突變，然而大量研究發(fā)現(xiàn)[3,4]，僅JAK2 V617F突變陽(yáng)性及MPL W515K突變陽(yáng)性未能對(duì)所有ET患者的發(fā)病原因進(jìn)行明確解釋，有一半以上的ET患者未發(fā)現(xiàn)以上兩種基因突變。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展以及二代測(cè)序技術(shù)在臨床中的大量應(yīng)用，于2013年國(guó)外研究者在JAK2 V617F及MPLW515K基因陰性的ET患者外周血的CALR基因9號(hào)外顯子區(qū)檢測(cè)到了高頻突變，檢出率高達(dá)60%以上。CALR基因是由8個(gè)內(nèi)含子和9個(gè)外顯子構(gòu)成，定位在人染色體的19p13.2，主要存在于真核細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的鈣離子結(jié)合蛋白，對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)發(fā)揮著重要的作用，同時(shí)CALR基因可以與糖皮質(zhì)激素蛋白受體、雄激素受體等核激素受體相結(jié)合，發(fā)揮調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、協(xié)助蛋白質(zhì)加工折疊、抑制腫瘤血管新生、參與抗原遞呈以及細(xì)胞凋亡等作用。

新疆地區(qū)以維族、哈族為主，許多研究證實(shí)新疆地區(qū)因地域分布的不同以及民族分布的差異使主要的流行病學(xué)特征也與漢族存在較大差異。維族、哈族繼承了突厥血統(tǒng)，而突厥是黃白混血人種，有其特殊的遺傳因素、文化差異和生活習(xí)慣。本研究中，ET組患者JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于對(duì)照組，表明JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)是ET診斷的主要分子標(biāo)準(zhǔn)物，其中以JAK2陽(yáng)性表達(dá)率最高?；颊呶幢憩F(xiàn)為兩種及以上基因表達(dá)陽(yáng)性。同時(shí)維族、哈族及漢族ET患者JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)比較結(jié)果顯示，漢族JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性率均顯著高于維族和哈族，而維族和哈族JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性率比較差異小，表明JAK2、CALR、MPL基因陽(yáng)性表達(dá)在漢族ET患者中突變更顯著，而在維族和哈族突變率相對(duì)較低，且維、哈族JAK2基因陽(yáng)性表達(dá)高于CALR、MPL基因。這可能是因維族和哈族與漢族存在較大的地域及種族差異，而維族和哈族均來(lái)源于突厥血統(tǒng)，二者種族及地域差異不大故三種基因陽(yáng)性表達(dá)率相似。

綜合上述研究，JAK2、CALR、MPL基因是ET患者的分子標(biāo)志物，且在漢族血統(tǒng)中陽(yáng)性表達(dá)更加明顯，而且維、哈族以JAK2基因陽(yáng)性表達(dá)為主，是其主要的分子標(biāo)志物。本研究比較了維族、哈族以及漢族ET患者JAK2、CALR、MPL基因突變情況，彌補(bǔ)了以往研究的不足，對(duì)于維、哈族ET患者的早期診斷及早期治療、減少出血與栓塞的發(fā)生率及致殘率有重要意義。

[1] 康志華.骨髓增殖性腫瘤的分子標(biāo)志研究進(jìn)展[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,34:5-9.

[2] 許 笑.原發(fā)性血小板增多癥及原發(fā)性骨髓纖維化患者M(jìn)PL515突變的篩查[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,35(7):634-635.

[3] 張修文.150例原發(fā)性血小板增多癥患者CALR基因突變檢測(cè)及臨床觀察[J].中華血液學(xué)雜志,2015,36(5):378-381.

[4] 姜乃可.骨髓增生異常綜合征患者IDH、JAK2、FLT3 NPMI和c-KIT基因突變的綜合檢測(cè)與分析[J].中華血液學(xué)雜志,2012,33(7):578-581.

本文編輯：吳玲麗

R55

B

ISSN.2095-8242.2017.018.3438.02

一附院自然青年基金資助（20152RQN21）

郝建萍