張 丹，劉公洪

（1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 瀘州 646000；2.瀘州市人民醫(yī)院腦外科，四川 瀘州 646000）

紅細(xì)胞參數(shù)、血紅蛋白電泳及地貧基因分析在地中海貧血中的應(yīng)用分析

張 丹1，劉公洪2

（1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 瀘州 646000；2.瀘州市人民醫(yī)院腦外科，四川 瀘州 646000）

目的 探究紅細(xì)胞（red blood cell，RBC）參數(shù)、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）電泳與CD41-42β地貧基因的攜帶情況在產(chǎn)前篩查地中海貧血中的應(yīng)用價(jià)值。方法 擇取我院2013年1月～2014年10月收治的地中海貧血患者50例（研究組），另選取正常人群50例（常規(guī)組），分別對(duì)兩組人群進(jìn)行紅細(xì)胞參數(shù)實(shí)驗(yàn)、血紅蛋白電泳實(shí)驗(yàn)，分析檢測(cè)人群地中海貧血的特異度、靈敏度等指標(biāo)。結(jié)果 研究組的陽(yáng)性檢出率明顯高于常規(guī)組（P＜0.05）；平行檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率（P＜0.05）；平行檢驗(yàn)的靈敏度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)報(bào)值要高于聯(lián)合檢驗(yàn)方法；紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性與陰性預(yù)報(bào)值均低于HB檢驗(yàn)結(jié)果；且所有檢測(cè)人群中，CD41-42基因型有6例，包括4例為CD41-42雜合子，1例為CD41-42復(fù)合α地貧基因。結(jié)論 對(duì)地中海貧血行產(chǎn)前篩查時(shí)應(yīng)用紅細(xì)胞參數(shù)實(shí)驗(yàn)與血紅蛋白電泳實(shí)驗(yàn)的診斷價(jià)值較高，兩者聯(lián)合檢測(cè)的應(yīng)用效果更佳。

血紅蛋白電泳；紅細(xì)胞參數(shù)；地中海貧血；地貧基因

地中海貧血是一種遺傳疾病，主要發(fā)病地區(qū)為長(zhǎng)江以南，嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)溶血性貧血，嚴(yán)重影響了人們的身體健康。目前，臨床上主要采用一系列的生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行疾病診斷，如：聚合酶鏈反應(yīng)[1]等，但是該類(lèi)檢測(cè)方法的操作步驟較為復(fù)雜，檢驗(yàn)條件的要求較高，對(duì)一些新增的基因變異情況無(wú)法準(zhǔn)確預(yù)估，所需檢測(cè)費(fèi)用較高，局限性較大，不適于臨床上普遍采納[2]。為此，本文采用紅細(xì)胞參數(shù)實(shí)驗(yàn)與血紅蛋白電泳對(duì)地中海貧血患者進(jìn)行產(chǎn)前篩查，旨在探究其應(yīng)用價(jià)值，為臨床檢測(cè)提供相關(guān)的參考依據(jù)，現(xiàn)將資料分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇取我院2013年1月～2014年10月收治的地中海貧血患者50例（研究組），該50例病例均經(jīng)臨床診斷后確診為地中海貧血，另選取正常人群50例（常規(guī)組），分別行紅細(xì)胞參數(shù)與血紅蛋白電泳試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 選用儀器

包括血紅蛋白電泳儀、微量振蕩器、臺(tái)式自動(dòng)平衡離心機(jī)、冰箱（零下20℃）、掃描儀、恒溫箱、超純水處理機(jī)。

1.2.2 紅細(xì)胞參數(shù)檢測(cè)

選用一管法對(duì)紅細(xì)胞參數(shù)進(jìn)行臨床檢測(cè)，選用試劑盒為米基公司所生產(chǎn)的試劑盒。

（1）A液：將總?cè)萘繛?.5 mL的氯化鈉溶液、磷酸氫二鈉溶液、磷酸二氫鈉溶液兌入至100 mL的蒸餾水溶內(nèi)；B液：給予5.0 mL的氯化鈉溶液兌入至蒸餾水溶內(nèi)，使得溶液總量為100 mL；C液：給予1.0 mL的皂素兌入至蒸餾水溶內(nèi)，使得溶液總量為60 mL。

（2）操作步驟：給予1 mL的A液于37℃的水浴內(nèi)，先持續(xù)預(yù)熱2 min，后將10μl的抗凝全血兌入，同樣置于上述溫度的水浴內(nèi)預(yù)熱5 min；給予1 mL的B液兌入上述溶劑中，離心5 min，速率為3000 r/min；后將上述溶液置于比色杯內(nèi)，讀取光密度D1；給予0.5 mL的C液。待到全部溶血后將比色杯內(nèi)的溶液兌入至試管內(nèi)，搖勻后再將溶液倒入比色杯內(nèi)，以530 nm為參照值進(jìn)行波長(zhǎng)比色，讀取D2光密度值，其中溶血率為D1/（D2×1.25）×100%[3]。

1.2.3 血紅蛋白電泳檢驗(yàn)

將檸檬酸鈉、酸-枸椽酸鹽-葡萄糖溶液[4]與乙二胺四乙酸抗凝血標(biāo)本進(jìn)行離心，將紅細(xì)胞100 μl兌入至生理鹽水（5 mL）中，混勻，離心5 min后將上清液吸凈；取水和四氯化碳，分別為350 μl和300 μl，保持每分鐘300 0r的速率持續(xù)離心5 min，得到血紅蛋白液；將17 μl的標(biāo)本置于標(biāo)本盤(pán)內(nèi)；取點(diǎn)樣刀鋒于自動(dòng)加樣器內(nèi)，加入界面液；置入電泳片，并將多余液體擦凈，將電泳片的保護(hù)膜揭去；將電泳片的緩沖液吸去；開(kāi)始進(jìn)行電泳操作，結(jié)束后將蓋子打開(kāi)，鏟掉鹽橋，移去碳棒；將取出的電泳片置于染色架槽中進(jìn)行染色、脫色、烘干等操作，結(jié)束后將電泳片取出并掃描。

1.2.4 地貧基因分析

取3 mL靜脈血，并給予全血DNA提取試劑對(duì)DNA組進(jìn)行提取，擴(kuò)增PCR，并選用PCR-膜反向點(diǎn)雜交技術(shù)對(duì)檢測(cè)人群中的基因組DNA中β珠蛋白基因突變的常見(jiàn)位點(diǎn)與少見(jiàn)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，之后再給予跨斷裂位點(diǎn)PCR檢測(cè)方法對(duì)較為普遍的3種缺失型α地貧基因進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

判斷紅細(xì)胞參數(shù)試驗(yàn)與血紅蛋白電泳試驗(yàn)后的靈敏度與特異度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0的統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié) 果

2.1 分析兩組試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果

研究組的陽(yáng)性檢出率明顯高于常規(guī)組，比較差異顯著（P＜0.05），且血紅蛋白電泳的陽(yáng)性檢出率較高于紅細(xì)胞參數(shù)實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性檢出率。見(jiàn)表1。

表1 紅細(xì)胞參數(shù)與血紅蛋白電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析（%）

2.2 比較紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)與HB電泳檢驗(yàn)的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度等

紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性與陰性預(yù)報(bào)值均低于HB檢驗(yàn)結(jié)果。見(jiàn)表2。

表2 分析兩組試驗(yàn)的檢驗(yàn)結(jié)果（%）

2.3 聯(lián)合檢驗(yàn)的結(jié)果分析

平行檢驗(yàn)的靈敏度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)報(bào)值要高于聯(lián)合檢驗(yàn)方法。見(jiàn)表3。

表3 平行檢驗(yàn)與聯(lián)合檢驗(yàn)的結(jié)果分析（%）

2.4 兩種檢驗(yàn)方法聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果分析

研究組：平行檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 兩種檢測(cè)方式的檢測(cè)結(jié)果分析（%）

2.5 地貧基因分布情況分析

50例檢測(cè)人群中，CD41-42基因型有6例，包括4例為CD41-42雜合子，1例為CD41-42復(fù)合α地貧基因，1例為CD41-42復(fù)合β地貧基因，且兒童與成人之間上述地貧基因的攜帶率無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

2.6 血細(xì)胞分析

比較不同地貧基因型組合的紅細(xì)胞參數(shù)特點(diǎn)。見(jiàn)表5。

表5 CD41-42不同地貧基因型組合的紅細(xì)胞參數(shù)特點(diǎn)分析（±s）

表5 CD41-42不同地貧基因型組合的紅細(xì)胞參數(shù)特點(diǎn)分析（±s）

注：與CD41-42雜合子組比較，*P＜0.05；與CD41-42復(fù)合α地貧組比較，#P＜0.05

指標(biāo)CD41-42雜合子CD41-42復(fù)合α地貧CD41-42復(fù)合β地貧RBC（×109/L）5.51±1.535.24±1.333.02±1.52*#Hb（g/L）110.81±30.16116.89±32.4671.43±32.16*#Hct（%）0.36±0.110.36±0.110.23±0.10*#MCV（fL）63.42±10.46#69.97±20.01*74.62±13.58* MCH（pg）20.06±2.62#22.51±7.22*23.76±5.42*

3 討 論

地貧指的是由于遺傳基因的某項(xiàng)缺陷導(dǎo)致人體內(nèi)的血紅蛋白合成缺乏或不足，并逐步演變?yōu)樨氀?。目前，臨床上主要采用紅細(xì)胞參數(shù)實(shí)驗(yàn)與血紅蛋白電泳實(shí)驗(yàn)進(jìn)行疾病篩查，且應(yīng)用價(jià)值重大。

本次研究表明，對(duì)地中海貧血患者進(jìn)行紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)的靈敏度、特異度均低于血紅蛋白電泳試驗(yàn)，這與趙穎[5]的研究結(jié)果一致。

對(duì)地中海貧血患者進(jìn)行紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)時(shí)，所用到的儀器設(shè)備較簡(jiǎn)單，無(wú)需進(jìn)行繁雜的實(shí)驗(yàn)操作，但是對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的相關(guān)因素較多，例如：操作人員對(duì)實(shí)驗(yàn)是否熟練等。相比紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)而言，行血紅蛋白電泳檢驗(yàn)時(shí)所需的器械設(shè)備較復(fù)雜，操作步驟較多，實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)，但是可以較為準(zhǔn)確的對(duì)血紅蛋白含量進(jìn)行分類(lèi)，與紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)相比，該項(xiàng)檢驗(yàn)方式的應(yīng)用價(jià)值更高，但是試驗(yàn)結(jié)果也會(huì)受到實(shí)驗(yàn)操作人員的影響。

本次研究結(jié)果顯示，研究組的陽(yáng)性檢出率明顯高于常規(guī)組（P＜0.05）；平行檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率（P＜0.05）；平行檢驗(yàn)的靈敏度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)報(bào)值要高于聯(lián)合檢驗(yàn)方法；紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性與陰性預(yù)報(bào)值均低于HB檢驗(yàn)結(jié)果；且所有檢測(cè)人群中，CD41-42基因型有6例，包括4例為CD41-42雜合子，1例為CD41-42復(fù)合α地貧基因。

紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)與血紅蛋白電泳檢驗(yàn)各有優(yōu)缺點(diǎn)，若將其聯(lián)合用于地中海貧血患者的篩查將明顯提高靈敏度與特異性，從而有效減少實(shí)驗(yàn)操作中的誤區(qū)，以免出現(xiàn)誤檢、漏檢現(xiàn)象，對(duì)于基層醫(yī)院的應(yīng)用價(jià)值較高。

[1] 張立軍,劉艾芹,鐘利若,等.孕16～28周胎兒臍血β-地中海貧血基因及其血紅蛋白電泳、紅細(xì)胞參數(shù)變異分析[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥,2011,18(16):86-88.

[2] 姚莉琴,浦 劍,鄒團(tuán)標(biāo),等.紅細(xì)胞參數(shù)在兒童地中海貧血篩查中的價(jià)值探討[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,07(15):1572-1574.

[3] 董孝平,魏炳華,向 明,等.血細(xì)胞分析對(duì)妊娠合并地中海貧血篩查的價(jià)值[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,10(8):617-618.

[4] 龐丹鳳,羅元標(biāo),楊 希,等.Sebia毛細(xì)管電泳儀系統(tǒng)結(jié)合MCV、MCH對(duì)506例產(chǎn)前孕婦地中海貧血的檢測(cè)分析[J].中外健康文摘,2012,09(8):115-116.

[5] 趙 穎,商 璇,熊 符,等.異常血紅蛋白(Hb J-Bangkok)合并β-地中海貧血的臨床表型分析[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,2013,30(2):148-151.

本文編輯：吳玲麗

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ISSN.2095-8242.2017.018.3493.02