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        紅細胞參數(shù)、血紅蛋白電泳及地貧基因分析在地中海貧血中的應(yīng)用分析

        2017-06-28 15:56:17劉公洪
        關(guān)鍵詞:參數(shù)檢驗電泳貧血

        張 丹,劉公洪

        (1.西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院檢驗科,四川 瀘州 646000;2.瀘州市人民醫(yī)院腦外科,四川 瀘州 646000)

        紅細胞參數(shù)、血紅蛋白電泳及地貧基因分析在地中海貧血中的應(yīng)用分析

        張 丹1,劉公洪2

        (1.西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院檢驗科,四川 瀘州 646000;2.瀘州市人民醫(yī)院腦外科,四川 瀘州 646000)

        目的 探究紅細胞(red blood cell,RBC)參數(shù)、血紅蛋白(hemoglobin,Hb)電泳與CD41-42β地貧基因的攜帶情況在產(chǎn)前篩查地中海貧血中的應(yīng)用價值。方法 擇取我院2013年1月~2014年10月收治的地中海貧血患者50例(研究組),另選取正常人群50例(常規(guī)組),分別對兩組人群進行紅細胞參數(shù)實驗、血紅蛋白電泳實驗,分析檢測人群地中海貧血的特異度、靈敏度等指標。結(jié)果 研究組的陽性檢出率明顯高于常規(guī)組(P<0.05);平行檢測的陽性率明顯高于聯(lián)合檢測的陽性率(P<0.05);平行檢驗的靈敏度、準確度、陰性預(yù)報值要高于聯(lián)合檢驗方法;紅細胞參數(shù)檢驗的靈敏度、特異性、準確度、陽性與陰性預(yù)報值均低于HB檢驗結(jié)果;且所有檢測人群中,CD41-42基因型有6例,包括4例為CD41-42雜合子,1例為CD41-42復合α地貧基因。結(jié)論 對地中海貧血行產(chǎn)前篩查時應(yīng)用紅細胞參數(shù)實驗與血紅蛋白電泳實驗的診斷價值較高,兩者聯(lián)合檢測的應(yīng)用效果更佳。

        血紅蛋白電泳;紅細胞參數(shù);地中海貧血;地貧基因

        地中海貧血是一種遺傳疾病,主要發(fā)病地區(qū)為長江以南,嚴重時可出現(xiàn)溶血性貧血,嚴重影響了人們的身體健康。目前,臨床上主要采用一系列的生物學技術(shù)進行疾病診斷,如:聚合酶鏈反應(yīng)[1]等,但是該類檢測方法的操作步驟較為復雜,檢驗條件的要求較高,對一些新增的基因變異情況無法準確預(yù)估,所需檢測費用較高,局限性較大,不適于臨床上普遍采納[2]。為此,本文采用紅細胞參數(shù)實驗與血紅蛋白電泳對地中海貧血患者進行產(chǎn)前篩查,旨在探究其應(yīng)用價值,為臨床檢測提供相關(guān)的參考依據(jù),現(xiàn)將資料分析如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        擇取我院2013年1月~2014年10月收治的地中海貧血患者50例(研究組),該50例病例均經(jīng)臨床診斷后確診為地中海貧血,另選取正常人群50例(常規(guī)組),分別行紅細胞參數(shù)與血紅蛋白電泳試驗。

        1.2 試驗方法

        1.2.1 選用儀器

        包括血紅蛋白電泳儀、微量振蕩器、臺式自動平衡離心機、冰箱(零下20℃)、掃描儀、恒溫箱、超純水處理機。

        1.2.2 紅細胞參數(shù)檢測

        選用一管法對紅細胞參數(shù)進行臨床檢測,選用試劑盒為米基公司所生產(chǎn)的試劑盒。

        (1)A液:將總?cè)萘繛?.5 mL的氯化鈉溶液、磷酸氫二鈉溶液、磷酸二氫鈉溶液兌入至100 mL的蒸餾水溶內(nèi);B液:給予5.0 mL的氯化鈉溶液兌入至蒸餾水溶內(nèi),使得溶液總量為100 mL;C液:給予1.0 mL的皂素兌入至蒸餾水溶內(nèi),使得溶液總量為60 mL。

        (2)操作步驟:給予1 mL的A液于37℃的水浴內(nèi),先持續(xù)預(yù)熱2 min,后將10μl的抗凝全血兌入,同樣置于上述溫度的水浴內(nèi)預(yù)熱5 min;給予1 mL的B液兌入上述溶劑中,離心5 min,速率為3000 r/min;后將上述溶液置于比色杯內(nèi),讀取光密度D1;給予0.5 mL的C液。待到全部溶血后將比色杯內(nèi)的溶液兌入至試管內(nèi),搖勻后再將溶液倒入比色杯內(nèi),以530 nm為參照值進行波長比色,讀取D2光密度值,其中溶血率為D1/(D2×1.25)×100%[3]。

        1.2.3 血紅蛋白電泳檢驗

        將檸檬酸鈉、酸-枸椽酸鹽-葡萄糖溶液[4]與乙二胺四乙酸抗凝血標本進行離心,將紅細胞100 μl兌入至生理鹽水(5 mL)中,混勻,離心5 min后將上清液吸凈;取水和四氯化碳,分別為350 μl和300 μl,保持每分鐘300 0r的速率持續(xù)離心5 min,得到血紅蛋白液;將17 μl的標本置于標本盤內(nèi);取點樣刀鋒于自動加樣器內(nèi),加入界面液;置入電泳片,并將多余液體擦凈,將電泳片的保護膜揭去;將電泳片的緩沖液吸去;開始進行電泳操作,結(jié)束后將蓋子打開,鏟掉鹽橋,移去碳棒;將取出的電泳片置于染色架槽中進行染色、脫色、烘干等操作,結(jié)束后將電泳片取出并掃描。

        1.2.4 地貧基因分析

        取3 mL靜脈血,并給予全血DNA提取試劑對DNA組進行提取,擴增PCR,并選用PCR-膜反向點雜交技術(shù)對檢測人群中的基因組DNA中β珠蛋白基因突變的常見位點與少見位點進行檢測,之后再給予跨斷裂位點PCR檢測方法對較為普遍的3種缺失型α地貧基因進行檢測。

        1.3 觀察指標

        判斷紅細胞參數(shù)試驗與血紅蛋白電泳試驗后的靈敏度與特異度。

        1.4 統(tǒng)計學分析

        采用SPSS 17.0的統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理。

        2 結(jié) 果

        2.1 分析兩組試驗的檢測結(jié)果

        研究組的陽性檢出率明顯高于常規(guī)組,比較差異顯著(P<0.05),且血紅蛋白電泳的陽性檢出率較高于紅細胞參數(shù)實驗的陽性檢出率。見表1。

        表1 紅細胞參數(shù)與血紅蛋白電泳實驗結(jié)果分析(%)

        2.2 比較紅細胞參數(shù)檢驗與HB電泳檢驗的靈敏度、特異度、準確度等

        紅細胞參數(shù)檢驗的靈敏度、特異性、準確度、陽性與陰性預(yù)報值均低于HB檢驗結(jié)果。見表2。

        表2 分析兩組試驗的檢驗結(jié)果(%)

        2.3 聯(lián)合檢驗的結(jié)果分析

        平行檢驗的靈敏度、準確度、陰性預(yù)報值要高于聯(lián)合檢驗方法。見表3。

        表3 平行檢驗與聯(lián)合檢驗的結(jié)果分析(%)

        2.4 兩種檢驗方法聯(lián)合檢測結(jié)果分析

        研究組:平行檢測的陽性率明顯高于聯(lián)合檢測的陽性率(P<0.05)。見表4。

        表4 兩種檢測方式的檢測結(jié)果分析(%)

        2.5 地貧基因分布情況分析

        50例檢測人群中,CD41-42基因型有6例,包括4例為CD41-42雜合子,1例為CD41-42復合α地貧基因,1例為CD41-42復合β地貧基因,且兒童與成人之間上述地貧基因的攜帶率無明顯差異(P>0.05)。

        2.6 血細胞分析

        比較不同地貧基因型組合的紅細胞參數(shù)特點。見表5。

        表5 CD41-42不同地貧基因型組合的紅細胞參數(shù)特點分析(±s)

        表5 CD41-42不同地貧基因型組合的紅細胞參數(shù)特點分析(±s)

        注:與CD41-42雜合子組比較,*P<0.05;與CD41-42復合α地貧組比較,#P<0.05

        指標CD41-42雜合子CD41-42復合α地貧CD41-42復合β地貧RBC(×109/L)5.51±1.535.24±1.333.02±1.52*#Hb(g/L)110.81±30.16116.89±32.4671.43±32.16*#Hct(%)0.36±0.110.36±0.110.23±0.10*#MCV(fL)63.42±10.46#69.97±20.01*74.62±13.58* MCH(pg)20.06±2.62#22.51±7.22*23.76±5.42*

        3 討 論

        地貧指的是由于遺傳基因的某項缺陷導致人體內(nèi)的血紅蛋白合成缺乏或不足,并逐步演變?yōu)樨氀?。目前,臨床上主要采用紅細胞參數(shù)實驗與血紅蛋白電泳實驗進行疾病篩查,且應(yīng)用價值重大。

        本次研究表明,對地中海貧血患者進行紅細胞參數(shù)檢驗的靈敏度、特異度均低于血紅蛋白電泳試驗,這與趙穎[5]的研究結(jié)果一致。

        對地中海貧血患者進行紅細胞參數(shù)檢驗時,所用到的儀器設(shè)備較簡單,無需進行繁雜的實驗操作,但是對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響的相關(guān)因素較多,例如:操作人員對實驗是否熟練等。相比紅細胞參數(shù)檢驗而言,行血紅蛋白電泳檢驗時所需的器械設(shè)備較復雜,操作步驟較多,實驗時間較長,但是可以較為準確的對血紅蛋白含量進行分類,與紅細胞參數(shù)檢驗相比,該項檢驗方式的應(yīng)用價值更高,但是試驗結(jié)果也會受到實驗操作人員的影響。

        本次研究結(jié)果顯示,研究組的陽性檢出率明顯高于常規(guī)組(P<0.05);平行檢測的陽性率明顯高于聯(lián)合檢測的陽性率(P<0.05);平行檢驗的靈敏度、準確度、陰性預(yù)報值要高于聯(lián)合檢驗方法;紅細胞參數(shù)檢驗的靈敏度、特異性、準確度、陽性與陰性預(yù)報值均低于HB檢驗結(jié)果;且所有檢測人群中,CD41-42基因型有6例,包括4例為CD41-42雜合子,1例為CD41-42復合α地貧基因。

        紅細胞參數(shù)檢驗與血紅蛋白電泳檢驗各有優(yōu)缺點,若將其聯(lián)合用于地中海貧血患者的篩查將明顯提高靈敏度與特異性,從而有效減少實驗操作中的誤區(qū),以免出現(xiàn)誤檢、漏檢現(xiàn)象,對于基層醫(yī)院的應(yīng)用價值較高。

        [1] 張立軍,劉艾芹,鐘利若,等.孕16~28周胎兒臍血β-地中海貧血基因及其血紅蛋白電泳、紅細胞參數(shù)變異分析[J].中國當代醫(yī)藥,2011,18(16):86-88.

        [2] 姚莉琴,浦 劍,鄒團標,等.紅細胞參數(shù)在兒童地中海貧血篩查中的價值探討[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2010,07(15):1572-1574.

        [3] 董孝平,魏炳華,向 明,等.血細胞分析對妊娠合并地中海貧血篩查的價值[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2011,10(8):617-618.

        [4] 龐丹鳳,羅元標,楊 希,等.Sebia毛細管電泳儀系統(tǒng)結(jié)合MCV、MCH對506例產(chǎn)前孕婦地中海貧血的檢測分析[J].中外健康文摘,2012,09(8):115-116.

        [5] 趙 穎,商 璇,熊 符,等.異常血紅蛋白(Hb J-Bangkok)合并β-地中海貧血的臨床表型分析[J].中華醫(yī)學遺傳學雜志,2013,30(2):148-151.

        本文編輯:吳玲麗

        R714.5

        B

        ISSN.2095-8242.2017.018.3493.02

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