戴薇，李世云，劉聰，肖德俊，余路虎

(贛州市人民醫(yī)院檢驗科，江西贛州341000)

巨細(xì)胞病毒IgM抗體自制室內(nèi)質(zhì)控血清的應(yīng)用及評價

戴薇，李世云，劉聰，肖德俊，余路虎

(贛州市人民醫(yī)院檢驗科，江西贛州341000)

目的自制巨細(xì)胞病毒IgM抗體（HCMV-IgM）弱陽性外部對照質(zhì)控血清，評價其臨床應(yīng)用的可行性。方法收集我院HCMV-IgM抗體陽性血清分別與健康人血清混合進(jìn)行倍比稀釋，選擇S/CO在1.5～3之間稀釋度制備室內(nèi)質(zhì)控血清，連續(xù)檢測20批次，采用“即刻法”分析檢測結(jié)果，20批次后結(jié)果繪制Levey-Jennings質(zhì)控圖，監(jiān)測室內(nèi)質(zhì)控動態(tài)。結(jié)果自制HCMV-IgM質(zhì)控血清與北京貝爾有限公司提供的質(zhì)控血清，兩者結(jié)果進(jìn)行對比，CV值比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），自制HCMV-IgM質(zhì)控血清變異系數(shù)（CV）均小于20%，穩(wěn)定性符合國家質(zhì)控物要求。結(jié)論自制HCMV-IgM質(zhì)控血清有很好的穩(wěn)定性和精密度，可作為實驗室檢測HCMV-IgM抗體的室內(nèi)質(zhì)控血清。

巨細(xì)胞病毒IgM抗體；自制室內(nèi)質(zhì)控血清；ELISA法

人巨細(xì)胞病毒（HCMV）又稱巨細(xì)胞包涵體病毒，是人類病毒性疾病的常見病原體之一。妊娠婦女感染HCMV可通過胎盤感染胎兒，引起流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩，胎兒畸形等[1]。器官移植患者、艾滋病患者、淋巴惡性增生患者或癌癥患者，HCMV感染會因為病毒擴散或侵入內(nèi)臟產(chǎn)生嚴(yán)重的癥狀，如脾大、肺炎、溶血性貧血癥、心肌炎和腦炎。HCMV感染對這類患者可能是致命的[2]?，F(xiàn)階段各地市縣級醫(yī)院檢測HCMV-IgM抗體大多都是采用酶聯(lián)免疫吸咐試驗（ELISA）。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制是保證檢驗質(zhì)量的一個重要環(huán)節(jié)[3]。目前，臨檢中心尚無提供商品化的HCMV-IgM室內(nèi)質(zhì)控血清，通過其他途徑獲得不僅十分困難且價格昂貴，本研究通過自制HCMV-IgM弱陽性質(zhì)控血清與北京貝爾HCMV-IgM質(zhì)控血清進(jìn)行比較，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集贛州市人民醫(yī)院住院和門診患者，HCMV-IgM抗體陽性血清，以及篩選部分陰性健康體檢者血清（無脂血、溶血、黃疸、無污染且肝炎標(biāo)志物、HIV、梅毒抗體均陰性），分別將上述血清充分混勻，經(jīng)3000×g離心15min去除蛋白質(zhì)沉淀，56℃加熱30min滅活處理備用。用處理后的健康體檢者血清對HCMV-IgM抗體陽性血清進(jìn)行倍比稀釋，測定吸光度值（OD）并計算S/CO值。根據(jù)ELISA方法學(xué)的要求，質(zhì)控血清S/CO值應(yīng)在1.5～3.0范圍之間[4]，以S/CO值介于1.5～3.0之間對應(yīng)的濃度作為室內(nèi)質(zhì)控血清的最佳稀釋濃度進(jìn)行稀釋配制，高壓滅菌，加入0.1‰硫柳汞防腐[5，6]，按每份200μl用量分裝標(biāo)記至冷凍管內(nèi)，-20℃保存。

1.2 儀器與試劑安圖Anthos 2010酶標(biāo)儀；鄭州基波JB－1全自動快速立式洗板機；四川諾亞NY/ MMJ酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀；HCMV-IgM質(zhì)控血清和ELISA試劑均由北京貝爾生物工程有限公司提供。

1.3 檢測方法嚴(yán)格按照SOP文件及試劑說明書操作，試驗前從冰箱取出試劑及質(zhì)控血清，放置恢復(fù)室溫，將自制室內(nèi)質(zhì)控血清與北京貝爾質(zhì)控血清連同患者標(biāo)本一同試驗，剩余質(zhì)控血清放置2～8℃冰箱冷藏，使用一周。

1.3.1 “即刻法”質(zhì)控分析[7]連續(xù)測定HCMV-IgM自制質(zhì)控血清及北京貝爾質(zhì)控血清3次，計算出檢測結(jié)果的平均值(x)和標(biāo)準(zhǔn)差（s），并按照公式計算SI上限和SI下限。

將SI上限和SI下限與對應(yīng)SI值進(jìn)行比較，若SI上限和SI下限均≤n2s值，表明結(jié)果在控；若SI上限或SI下限在n2s和n3s之間，表明結(jié)果處于“告警”狀態(tài)；若SI上限或SI下限≥n3s值，表明結(jié)果失控。如測定結(jié)果在告警和失控狀態(tài)都應(yīng)棄去。

1.3.2Levey-Jennings質(zhì)控圖的繪制[8]計算HCMV-IgM自制質(zhì)控血清20個批次檢測結(jié)果的均值(x)和標(biāo)準(zhǔn)差（s），輸入東軟LIS作質(zhì)控圖，依據(jù)Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法以±2s為警戒限，±3s為失控限。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法利用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多均數(shù)比較采用方差分析，若有差異，利用Dunnett-t檢驗再進(jìn)行兩者間比較，定檢驗水準(zhǔn)ɑ=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 連續(xù)檢測20批次的自制HCMV-IgM弱陽性質(zhì)控血清S/CO均值(x)為2.1，CV值為13.61%；北京貝爾HCMV-IgM質(zhì)控血清S/CO均值(x)為2.95，CV值為14.6%；兩者CV值比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。見表1。

表1 兩種質(zhì)控血清即刻法結(jié)果比較

2.2 自制質(zhì)控血清穩(wěn)定性和精密度“即刻法”20批次結(jié)果（S/CO值）計算出的x、s輸入東軟LIS Levey-Jennings質(zhì)控圖中，當(dāng)月結(jié)束后匯集前面所有在控結(jié)果，計算累積x、s作為下個月的x、s，以次類推，我室連續(xù)8個月測定的自制HCMV-IgM弱陽性質(zhì)控血清結(jié)果（S/CO值）CV值均＜20%，符合室內(nèi)質(zhì)控要求，每月與第1個月的檢測結(jié)果比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。見表2。

3 討論

臨床實驗室質(zhì)量管理的第一要素是選擇和執(zhí)行適當(dāng)?shù)氖覂?nèi)質(zhì)量控制（IQC）程序，依據(jù)測定項目的質(zhì)量要求和方法特點選擇統(tǒng)計學(xué)標(biāo)準(zhǔn)、控制規(guī)則和質(zhì)控的數(shù)目，并嚴(yán)格執(zhí)行IQC程序以提高IQC的質(zhì)量[9]。實驗室室內(nèi)質(zhì)控的目的是為了提高該室的精密度水平，進(jìn)而提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性[10]。室內(nèi)質(zhì)控品是臨床檢驗實驗室質(zhì)量控制體系不可缺少的一部分，是臨床檢測質(zhì)量保證的根源。

表2 自制質(zhì)控血清穩(wěn)定性和精密度觀察

現(xiàn)各醫(yī)院ELISA是免疫學(xué)檢測抗體中普遍應(yīng)用的試驗，除了乙肝、梅毒、艾滋、丙肝，臨檢中心提供了室內(nèi)質(zhì)控品外，其它由于價格昂貴，獲得途徑難等原因，不能滿足臨床實驗室的檢測需求。ELISA由于其操作簡便、成本低、適合大批量檢查等優(yōu)點，在整個操作過程中會受到許多因素的影響，如標(biāo)本的處理，加樣、孵育的溫度和時間，洗板，洗液的配制濃度，顯色時間以及計算臨界值等，都會導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)較大偏差，為了保證檢測質(zhì)量，試驗操作時除了試劑盒里配制的陰、陽性內(nèi)部對照外，還應(yīng)同時設(shè)立外部弱陽性對照，以監(jiān)測試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性。ELISA試劑盒內(nèi)陽性對照多是合成的半成品或片段，一般不是從陽性標(biāo)本中獲得[11]，不能用來制備質(zhì)控品。質(zhì)控樣本的基質(zhì)須與待測標(biāo)本一致，因此制備弱陽性質(zhì)控血清時，我室是收集陽性病人血清，用健康人血清作為基質(zhì)，稀釋陽性標(biāo)本血清，排除基質(zhì)效應(yīng)。為保證蛋白質(zhì)處于天然的濃度和狀態(tài)，最好不用生理鹽水或其他緩沖液稀釋。在分析全程的諸環(huán)節(jié)中，室內(nèi)質(zhì)控是比較重要的環(huán)節(jié)，對提高檢測質(zhì)量起了一定的作用，因此建立室內(nèi)質(zhì)控非常重要[12]。

本研究采用“即刻法”質(zhì)控方法對自制室內(nèi)質(zhì)控血清進(jìn)行檢測。該方法通過Grubbs異常值取舍法，先以首批3個檢測結(jié)果確定SI上限值和下限值，之后可對每批次結(jié)果是否異常進(jìn)行判斷并取舍，達(dá)到20次檢測結(jié)果后，再按照常規(guī)Levey-Jennings質(zhì)控圖和Westgard多規(guī)則法確定質(zhì)控界限和范圍進(jìn)行常規(guī)室內(nèi)質(zhì)量控制[13]。變異系數(shù)（CV）是反應(yīng)各次OD值相對于均值的離散程度的一個指標(biāo)，可以用于衡量被檢標(biāo)本檢測的重復(fù)性或精密度，進(jìn)一步監(jiān)控操作的一致性及試劑盒的批內(nèi)差異和批間差異[14]。結(jié)果表明，各批次SI上限和SI下限均在控，CV值符合質(zhì)控物要求，控制在20%以內(nèi)[15-17]，說明質(zhì)控效果和穩(wěn)定性好。

由此可見，自制HCMV-IgM質(zhì)控血清有很好的穩(wěn)定性、精密度，方便臨床進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制和質(zhì)量評價，且成本低廉，制備簡單，方便易行。可作為實驗室檢測HCMV-IgM抗體的室內(nèi)質(zhì)控血清。

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The application and evaluation of the self-made anti-HCMV quality control serums

DAI Wei，LI Shiyu，LIU Cong，XIAO Dejun，YU Luhu.
Department of Clinical Laboratory；Ganzhou People's Hospital，Ganzhou Jiangxi 341000，China.

Objective To investigate the clinical feasibility of the anti-HCMV weakly positive serum as correlated external quality control(QC).Methods The anti-HCMV positive serums from the HCMV-infected patients in our hospital were collected and mixed with serums from healthy controls.Then the mixtures were serially diluted and detected for their S/CO value.Under the dilution ratio，corresponding to the S/CO value between 1.5 and 3.0，the diluted serum was selected as the standard for extracting the internal QC serums.The prepared QC serums were used to detect 20 batches of samples and the results were analyzed by using the instant method.Finally，the Levey-Jennings quality control chart was drawn to monitor the dynamic of the internal quality control.Results The CV(coefficient of variation)values of the self-made anti-HCMV QC serums were compared with the QC serums supplied by Beijing Bell Company.There was no significant difference between them(P＞0.05).All the CV values of the self-made anti-HCMV QC serums were less than 20%and the stability was in accordance with the request of national quality content.Conclusion The self-made anti-HCMV QC serums have good stability and high degree of precision.It may be used as the internal QC serums for the laboratory examination HCMV-IgM antibody.

∶CMV-IgM antibody；Self-made quality control serum；ELISA

R446.62，R373.9

A

1674-1129(2017)03-0344-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.015

江西省贛州市科技計劃項目（GZ2015ZSF105）

戴薇，女，1982年生，學(xué)士，主管技師，醫(yī)學(xué)檢驗，研究方向免疫學(xué)，郵箱：13576692530@163.com