萬(wàn)小春，鐘展華，嚴(yán)鳳好，曾演強(qiáng)，曾少麗，湛玉武

(惠州市中心血站，廣東惠州516000)

惠州市無(wú)償獻(xiàn)血者血液HBV,HCV,HIV(1+2型)核酸篩查匯集檢測(cè)和單人份檢測(cè)兩種檢測(cè)模式結(jié)果分析

萬(wàn)小春，鐘展華，嚴(yán)鳳好，曾演強(qiáng)，曾少麗，湛玉武

(惠州市中心血站，廣東惠州516000)

目的探索單人份檢測(cè)模式與匯集檢測(cè)模式兩種血液核酸篩查方式對(duì)于血液核酸篩查結(jié)果的影響。方法先采用蘇州華益美生物科技有限公司生產(chǎn)的乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（1+2型）核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光法），對(duì)ELISA篩查合格的標(biāo)本進(jìn)行HBV、HCV、HIV（1+2型）核酸篩查（匯集檢測(cè)模式），再用該試劑盒按照單人份檢測(cè)模式對(duì)匯集檢測(cè)過(guò)的樣本進(jìn)行復(fù)檢。結(jié)果本研究采用單人份檢測(cè)模式共檢測(cè)5385例經(jīng)過(guò)匯集檢測(cè)模式篩查的樣本，篩查出HBV DNA核酸陽(yáng)性標(biāo)本10例(陽(yáng)性率1.86‰)。10例核酸陽(yáng)性標(biāo)本與匯集檢測(cè)模式的結(jié)果一致，本研究的兩種檢測(cè)模式均未檢測(cè)到HCV RNA核酸陽(yáng)性和HIV（1+2型）RNA陽(yáng)性的標(biāo)本。結(jié)論在酶免檢測(cè)的基礎(chǔ)上應(yīng)用核酸檢測(cè)能有效避免HBV、HCV、HIV（1+2型）的漏檢，降低輸血傳播相關(guān)病毒的風(fēng)險(xiǎn)。匯集檢測(cè)和單人份檢測(cè)兩種檢測(cè)模式對(duì)于檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差異。

核酸檢測(cè)；血液安全；單人份檢測(cè)；匯集檢測(cè)

病毒核酸檢測(cè)技術(shù)（NAT）是直接檢測(cè)病原體核酸的一系列技術(shù)的總稱，相比血清學(xué)抗原抗體檢測(cè)方法(EIA)，血液病毒核酸檢測(cè)技術(shù)可以有效縮短抗原抗體免疫檢測(cè)的“窗口期”，從而大大降低經(jīng)輸血傳播病毒的風(fēng)險(xiǎn)[1-3]。盡管NAT從理論上并不能完全消除病毒感染的“窗口期”，但可以有效地預(yù)防經(jīng)輸血傳播病毒性疾病。單人份檢測(cè)模式的標(biāo)本處理相對(duì)直接，耗時(shí)較短，且即使出現(xiàn)檢測(cè)陽(yáng)性的樣本也可以直接出具核酸檢測(cè)結(jié)果而不必經(jīng)過(guò)匯集檢測(cè)的拆分檢測(cè)，能有效縮短血液放行時(shí)間，實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，同時(shí)降低檢測(cè)成本，血液核酸的單人份檢測(cè)模式尤其適用于采樣量相對(duì)較少的血小板樣本的核酸檢測(cè)以及日均采血量較少的血站開展核酸檢測(cè)，因此，在原有核酸篩查試劑的技術(shù)基礎(chǔ)上，以保證核酸檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性為原則，開展了血液核酸單人份檢測(cè)模式的探索，現(xiàn)將初步的研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本2016年惠州市中心血站的無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本5385例，獻(xiàn)血者年齡為18～55周歲，經(jīng)過(guò)HB-sAg、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶篩查合格才允許捐獻(xiàn)。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑NAT匯集檢測(cè)采用蘇州華益美生物科技有限公司產(chǎn)品，NAT單人份檢測(cè)采用蘇州華益美生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.2.2 儀器華益美全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)包括BACME全自動(dòng)核酸提取系統(tǒng)（瑞士Hamilton）、ABI7500熒光PCR儀（美國(guó)ABI）。SLA-DI4800核酸提取儀（臺(tái)灣）、ABI7500熒光PCR儀（美國(guó)ABI）。以上儀器均在校驗(yàn)合格期使用。

1.3 檢測(cè)方法判定規(guī)則

1.3.1 常規(guī)檢測(cè)所有血液標(biāo)本均按照我國(guó)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（GB18467-2011）進(jìn)行常規(guī)的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項(xiàng)目的2次ELISA檢測(cè)和ALT項(xiàng)目的2次速率法檢測(cè)，由不同人員用不同廠家的試劑嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書的要求進(jìn)行檢測(cè)。

任一種試劑檢測(cè)為陽(yáng)性的，重取血樣雙孔復(fù)試，復(fù)試任一孔為陽(yáng)性的判定為不合格，其中2例抗HIV陽(yáng)性標(biāo)本送疾病預(yù)防控制中心確認(rèn)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。所有試驗(yàn)結(jié)果均按試劑盒說(shuō)明書在實(shí)驗(yàn)室管理軟自動(dòng)判讀。

1.3.2 核酸匯集檢測(cè)對(duì)常規(guī)檢測(cè)合格的標(biāo)本進(jìn)行核酸（NAT）檢測(cè)，首先由全自動(dòng)核酸提取儀自動(dòng)混樣，最多每8份標(biāo)本（150μl/份）混合成1份（1.2ml）匯集池（pool）標(biāo)本，由全自動(dòng)核酸提取儀和熒光核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀采用核酸定性篩查試劑進(jìn)行HBV、HCV、HIV（1+2型）核酸檢測(cè)。每批檢測(cè)均設(shè)置1個(gè)陰性質(zhì)控和1個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控，1個(gè)外部陽(yáng)性質(zhì)控，每個(gè)匯集池均含DNA內(nèi)對(duì)照（DNA IC）和RNA內(nèi)對(duì)照（RNA IC）。

匯集檢測(cè)為核酸陰性，匯集池中的標(biāo)本合格；匯集檢測(cè)為核酸陽(yáng)性，對(duì)該匯集池子中的標(biāo)本進(jìn)行拆分檢測(cè)，拆分檢測(cè)無(wú)核酸反應(yīng)性判定為NAT檢測(cè)陰性，拆分檢測(cè)為核酸陽(yáng)性判定為NAT檢測(cè)陽(yáng)性。所有試驗(yàn)結(jié)果均按試劑盒說(shuō)明書的要求用華益美實(shí)驗(yàn)室管理件自動(dòng)判讀。

1.3.3 核酸單人份檢測(cè)每份標(biāo)本分別取樣400μl，按照操作說(shuō)明書進(jìn)行標(biāo)本的處理、核酸擴(kuò)增、分析，得出標(biāo)本陰陽(yáng)性結(jié)論。每批檢測(cè)均設(shè)置1個(gè)陰性質(zhì)控和1個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控，每個(gè)樣本和質(zhì)控品均含DNA內(nèi)對(duì)照（DNA IC）和RNA內(nèi)對(duì)照（RNA IC）。該檢測(cè)結(jié)果與匯集檢測(cè)與拆分檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照考核試劑說(shuō)明書要求操作，共對(duì)5385例臨床用血標(biāo)本進(jìn)行了核酸檢測(cè)。5385例EIA合格標(biāo)本中，混合檢測(cè)模式篩查出HBV DNA核酸陽(yáng)性標(biāo)本10例，在5385例標(biāo)本中未檢測(cè)到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽(yáng)性標(biāo)本；5385例EIA合格標(biāo)本中，單人份檢測(cè)模式篩查出HBV DNA核酸陽(yáng)性標(biāo)本10例，在5385例標(biāo)本中未檢測(cè)到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽(yáng)性標(biāo)本。

考核試劑檢測(cè)單人份模式檢測(cè)EIA合格的臨床用血標(biāo)本5385例。經(jīng)考核試劑檢測(cè)，其中10個(gè)樣本檢測(cè)為HBV DNA陽(yáng)性，未檢測(cè)到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽(yáng)性的樣本。匯集模式檢測(cè)EIA合格的臨床用血標(biāo)本5385例。匯集池?cái)?shù)量為698個(gè)，其中檢出陽(yáng)性14個(gè)，拆分率2.0%，其中8個(gè)匯集池拆分檢測(cè)出10例HBV DNA陽(yáng)性樣本，拆分收益率57.14%；匯集模式未檢測(cè)到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽(yáng)性樣本。

單人份模式結(jié)果和混合模式結(jié)果比對(duì)見表1～3。

3 討論

我們采用單人份三聯(lián)HBV DNA、HCV RNA和HIV（1+2型）RNA核酸鑒別檢測(cè)試劑檢測(cè)血液標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示惠州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群中核酸初次反應(yīng)率較低(1.86‰)，這與汪德海等報(bào)道的結(jié)果基本一致，提示惠州地區(qū)的獻(xiàn)血人群處于低感染狀態(tài)，這有利于保障血液安全[4]。

表1 單人份模式與混合模式HBV檢測(cè)結(jié)果

表2 單人份模式與混合模式HCV檢測(cè)結(jié)果

表3 單人份模式與混合模式HIV（1+2）檢測(cè)結(jié)果

在本考核的5385例EIA合格標(biāo)本中，混合檢測(cè)模式篩查出HBV DNA核酸陽(yáng)性標(biāo)本10例，在5385例標(biāo)本中未檢測(cè)到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽(yáng)性標(biāo)本；5385例EIA合格標(biāo)本中，單人份檢測(cè)模式篩查出HBV DNA核酸陽(yáng)性標(biāo)本10例，在5385例標(biāo)本中未檢測(cè)到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽(yáng)性標(biāo)本，這可能與本次樣本量較少有關(guān)，同時(shí)也顯示HBV輸血傳播的殘余風(fēng)險(xiǎn)高于HIV-1或HCV，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中NAT收益標(biāo)本全部為HBV DNA反應(yīng)性，這與已有的報(bào)道是相似的[5-10]，也證實(shí)HBV輸血傳播的殘余風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較高，這可能與我國(guó)HBV高感染率有關(guān)。

綜上所述，在酶免檢測(cè)的基礎(chǔ)上進(jìn)行核酸檢測(cè)可以大大降低輸血的殘余風(fēng)險(xiǎn)，特別是HBV輸血傳播的殘余風(fēng)險(xiǎn)；而核酸檢測(cè)的兩種模式匯集檢測(cè)和單人份檢測(cè)兩種檢測(cè)模式的結(jié)果一致，說(shuō)明檢測(cè)模式對(duì)于檢測(cè)結(jié)果幾乎沒有影響。

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R193.3，R512.6，R512.91，R446.62

A

1674-1129(2017)03-0447-03

2016-12-19；

2017-04-04)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.054