陳軍　王靜　張兆鋒等

[摘要]目的：探討PLGA神經(jīng)導(dǎo)管聯(lián)合ADSCs與自體神經(jīng)組織碎屑修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的修復(fù)效果。方法：32只SD大鼠平均分成4組，無菌條件下切斷右側(cè)的坐骨神經(jīng)，制成10mm長的大鼠坐骨神經(jīng)缺損模型，A組采用PLGA神經(jīng)導(dǎo)管連接缺損神經(jīng)進(jìn)行修復(fù)，B組由內(nèi)置自體神經(jīng)組織碎屑的PLGA神經(jīng)導(dǎo)管連接，C組由內(nèi)置ADSCs與自體神經(jīng)組織碎屑的PLGA神經(jīng)導(dǎo)管連接，D組采用自體神經(jīng)移植方式。12周后通過對再生神經(jīng)橋接體的一般觀察、HE染色、免疫熒光染色、甲苯胺藍(lán)染色來評價(jià)神經(jīng)的再生情況；通過肌電圖、腓腸肌的HE和Masson染色來評價(jià)神經(jīng)對靶器官的再支配情況。結(jié)果：術(shù)后12周，各組的神經(jīng)導(dǎo)管均已降解，切斷神經(jīng)通過神經(jīng)導(dǎo)管向兩端生長。一般觀察、肌電圖、組織學(xué)觀察結(jié)果均提示PLGA神經(jīng)導(dǎo)管聯(lián)合ADSCs與自體神經(jīng)組織碎屑組C組的修復(fù)效果顯著優(yōu)于內(nèi)置神經(jīng)組織碎屑的PLGA神經(jīng)導(dǎo)管組B組和空導(dǎo)管組A組的修復(fù)效果，但仍稍差于自體神經(jīng)移植組D組。結(jié)論：PLGA神經(jīng)導(dǎo)管聯(lián)合ADSCs與自體神經(jīng)組織可以比較有效地修復(fù)周圍神經(jīng)缺損，為周圍神經(jīng)缺損的修復(fù)提供了一種新的方法。

[關(guān)鍵詞]周圍神經(jīng)缺損；神經(jīng)組織碎屑；脂肪干細(xì)胞；聚乳酸羥基乙酸；神經(jīng)導(dǎo)管

[中圖分類號(hào)]R745 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2017）03-0060-06

周圍神經(jīng)缺損是臨床上常見的疾病，外傷、手術(shù)操作、腫瘤切除等均會(huì)導(dǎo)致周圍神經(jīng)缺損的發(fā)生，對于普通的神經(jīng)離斷損傷可以在無張力的條件下用端端吻合的方法修復(fù)。而對于較長節(jié)段神經(jīng)缺損的修復(fù)，目前的金標(biāo)準(zhǔn)是自體神經(jīng)移植，但是自體神經(jīng)移植具有供區(qū)來源有限、二次損傷、供區(qū)的感覺功能障礙、供區(qū)和受區(qū)神經(jīng)結(jié)構(gòu)和粗細(xì)不匹配等缺點(diǎn)。鑒于自體神經(jīng)移植的諸多限制，組織工程神經(jīng)導(dǎo)管應(yīng)運(yùn)而生，人們早期曾使用空腔靜脈導(dǎo)管修復(fù)周圍神經(jīng)缺損，后來有學(xué)者采用在靜脈內(nèi)填充神經(jīng)碎屑來修復(fù)周圍神經(jīng)缺損，均取得了比較好的修復(fù)效果。近年來聚乳酸羥基乙酸（poly-lactic-co-glycolic-acid，PLGA）神經(jīng)導(dǎo)管以其優(yōu)越的性能受到學(xué)者們的重視且已被廣泛應(yīng)用于各研究中，其性能也得到進(jìn)一步完善，如對導(dǎo)管進(jìn)行甲殼素涂層來改善導(dǎo)管的生物學(xué)性能；在導(dǎo)管內(nèi)置入纖維絲改善神經(jīng)導(dǎo)管的內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)等。有研究發(fā)現(xiàn)PLGA材料復(fù)合雪旺細(xì)胞、細(xì)胞生長因子、間充質(zhì)干細(xì)胞或脂肪干細(xì)胞（adipose derived stem ceils，ADSCs）后能促進(jìn)軸突的再生和髓鞘的形成以及神經(jīng)功能的恢復(fù)。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以PLGA神經(jīng)導(dǎo)管為支架材料，將自體來源的神經(jīng)碎屑，復(fù)合ADSCs填充到神經(jīng)導(dǎo)管中，探討此種聯(lián)合自體神經(jīng)組織和ADSCs的具有內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)的神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的效果。

1材料和方法

1.1材料與設(shè)備：健康成年SD大鼠32只，雌性，體重200～250g（上海斯萊克動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有限公司）；5～7d SD乳鼠若干只，體重（16.0±2.1）g（上海斯萊克動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有限公司）。

DMEM培養(yǎng)基（Hyclone）、復(fù)合膠原酶NB4（Serva，Germany）、胎牛血清（Hyclone，Australia）、磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.2）、0.2 5%trypsin-EDTA（Gibco，Canada）、兔抗單克隆neurofilament-H（Millipore，USA）、兔抗S100單克隆抗體（Dako，Denmark）、驢抗兔IgG抗體（Invitrogen，USA）、Masson染色試劑盒（Leagene）、Calcein-AM（上海麥約爾生物技術(shù)有限公司）、甲苯胺藍(lán)。PLGA導(dǎo)管材料由東華大學(xué)提供。

倒置相差顯微鏡（Olympus，Japan）、恒溫CO₂培養(yǎng)箱（Forma Scientific，USA）離心機(jī)（Thermo，USA）、超凈工作臺(tái)（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司，中國）、正置顯微鏡（Nikon 90i，Japan）、Evos顯微鏡（Life，USA）、熒光顯微鏡（Nikon，Japan）、冰凍切片機(jī)（Shandon Cryotome FSE，Thermo scientific，British）、Key point多道肌電圖儀（Dantec，丹麥）、石蠟切片機(jī)（Shandon Finesse 325，Thermo Shandon Ltd.，British）、解剖顯微鏡（Motic，USA）、顯微外科手術(shù)器械（上海手術(shù)器械廠，中國）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 PLGA神經(jīng)導(dǎo)管的準(zhǔn)備：取PLGA神經(jīng)導(dǎo)管，環(huán)氧乙烷消毒，真空包裝備用。

1.2.2 ADSCs的取材、培養(yǎng)、觀察和鑒定：將5～7d SD乳鼠頸椎脫臼處死，置于75%酒精中浸泡5min后，無菌條件下取其腹股溝皮下脂肪組織，置入培養(yǎng)皿中，向皿中加入含2%FBS的冷PBS洗去血液。將脂肪塊剪碎至約1mm³大小，向培養(yǎng)皿中加入0.2%復(fù)合膠原酶NB4（用DMEM培養(yǎng)基配制），轉(zhuǎn)移至一次性離心管中，放入37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中孵育。每隔5min振蕩1次，消化約1.5h，反復(fù)吹打約5min，使組織充分分散。以1500rpm、37℃、離心5min，棄去上清，加入含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按大約1×10³/cm²密度將細(xì)胞接種到培養(yǎng)皿中，置于37℃、5%COz培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待原代細(xì)胞長滿至培養(yǎng)皿的80%左右，吸去上清液，PBS漂洗后，加37℃、0.25%trypsin-EDTA消化約1min，輕輕拍打培養(yǎng)皿使細(xì)胞從皿底脫離，加入含血清的DMEM培養(yǎng)基終止消化，收集所得細(xì)胞，以1500rpm、37℃、離心5min，培養(yǎng)液重懸，按1：2的比例傳代接種，置于37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，每48h換液一次，待細(xì)胞增殖至覆蓋皿底80%時(shí)，用同樣方法傳代，傳至第三代，行Calcein-AM熒光染色后鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，參照張怡等的實(shí)驗(yàn)方法對脂肪干細(xì)胞行CD29和CD44細(xì)胞流式技術(shù)鑒定，并對脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)備用。

1.2.3神經(jīng)組織雪旺細(xì)胞遷出實(shí)驗(yàn)和鑒定：將5～7d SD乳鼠頸椎脫臼處死，置于75%酒精中浸泡5min后，沿大腿后外側(cè)入路，無菌條件下切開皮膚，分離肌肉，暴露并切取雙側(cè)坐骨神經(jīng)，存放在冰板上的培養(yǎng)皿中，解剖顯微鏡下仔細(xì)去除神經(jīng)外膜，PBS緩沖液反復(fù)沖洗3次。用組織剪將其剪碎至約0.5～1mm³大小置于培養(yǎng)皿中，加入適量含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基剛好浸沒組織塊，置入含5%CO₂的37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，24h后待組織塊基本牢固的貼附在培養(yǎng)皿底部時(shí)追加培養(yǎng)基，每日觀察。每48h換液一次。待組織塊周圍細(xì)胞長滿后，將組織塊轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)，遷移出的雪旺細(xì)胞消化、純化后行S100染色鑒定。

1.2.4 PLGA神經(jīng)導(dǎo)管的預(yù)處理：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的前一天，取真空包裝的無菌PLGA神經(jīng)導(dǎo)管，用含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清的培養(yǎng)基預(yù)置24h，以增加細(xì)胞黏附性，備用。

1.2.5實(shí)驗(yàn)分組及神經(jīng)導(dǎo)管制備：SD大鼠32只，隨機(jī)分為4組，每組8只。B，c組填充的自體神經(jīng)來源于切除的坐骨神經(jīng)，剪取約1/3神經(jīng)組織剪成碎屑后疏松充填于神經(jīng)導(dǎo)管中；將收集的ADSCs配成1×10⁷/ml的細(xì)胞懸液，注入充填自體神經(jīng)組織碎屑的C組PLGA神經(jīng)導(dǎo)管中。

1.2.6手術(shù)方法：將已分組大鼠行3%異戊巴比妥鈉（0.3ml/100g）腹腔注射麻醉，無菌條件下于右股后外側(cè)行縱切口，自肌間隙進(jìn)入，暴露大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)。自梨狀肌下緣切除7mm坐骨神經(jīng)，兩端回縮后造成lOmm神經(jīng)缺損。A組直接采用PLGA神經(jīng)導(dǎo)管連接缺損神經(jīng)，顯微鏡下將神經(jīng)的兩斷端分別套入導(dǎo)管1mm，以10-0顯微外科縫線4針固定，分層縫合肌肉和皮膚；B組由內(nèi)置自體神經(jīng)組織碎屑的PLGA神經(jīng)導(dǎo)管連接；C組由內(nèi)置ADSCs與自體神經(jīng)組織碎屑的PLGA神經(jīng)導(dǎo)管連接；D組于坐骨神經(jīng)中段切取10mm，旋轉(zhuǎn)180°后行端端縫合。術(shù)后，將動(dòng)物置于復(fù)蘇室中待其蘇醒，常規(guī)用青霉素抗感染治療3d，動(dòng)物房內(nèi)分籠飼養(yǎng)。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1一般情況：術(shù)后觀察記錄大鼠飲食、精神狀態(tài)、足部潰瘍、肢體活動(dòng)、自噬現(xiàn)象、傷口有無感染及愈合情況。

1.3.2觀察缺損修復(fù)部位：術(shù)后12周后，按原手術(shù)入路暴露。觀察神經(jīng)導(dǎo)管的降解情況，吻合口有無神經(jīng)瘤形成，再生神經(jīng)橋接體的形態(tài)，與周圍組織有無粘連，炎性反應(yīng)的程度以及腓腸肌的形態(tài)大小等。

1.3.3肌電圖檢測：于暴露部位，采用肌電圖儀檢測肌肉復(fù)合動(dòng)作電位（CMAPs），以3.5mA、0.05ms、3Hz的電刺激分別于神經(jīng)吻合口的近端進(jìn)行刺激，誘發(fā)動(dòng)作電位，并記錄動(dòng)作電位峰值（peak amplitude），肌肉復(fù)合動(dòng)作電位潛伏期（1atency）肌電圖檢查后，處死大鼠并取材。

取神經(jīng)橋接體和腓腸肌分別制作冰凍切片和石蠟切片行大體觀察、組織化學(xué)染色觀察及圖像分析。

1.3.4再生橋接體的HE、S100、NF和甲苯胺藍(lán)染色：再生的神經(jīng)橋接體取材后，先置于蔗糖質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為10%的4%多聚甲醛溶液中固定2h，然后轉(zhuǎn)移至質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為30%的蔗糖溶液48h，OCT組織包埋劑包埋后制作冰凍切片，切片厚度為8Pm，取橋接體的中段行HE染色、S-100染色、NF染色和甲苯胺藍(lán)染色，顯微鏡下觀察神經(jīng)組織的再生情況。

1.3.5腓腸肌的HE～Masson染色：將取下的腓腸肌置于4%多聚甲醛液固定24h，酒精梯度脫水，石蠟包埋切片后行HE染色和Masson染色，觀察肌纖維的分布和大小，纖維化的程度；測量并計(jì)算肌纖維的橫截面積和纖維化的比例。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：每組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 ADSCs的形態(tài)觀察及流式細(xì)胞技術(shù)鑒定：培養(yǎng)72h后，相差顯微鏡下觀察，細(xì)胞已完全貼壁，充分伸展呈梭形，多角形，部分區(qū)域形成細(xì)胞團(tuán)簇，周圍偶可見少量圓形且發(fā)亮的脂滴（圖1a、b、c）。經(jīng)CD29和CD44流式細(xì)胞技術(shù)鑒定，所獲取的細(xì)胞為高純度的ADSCs。

2.2雪旺細(xì)胞遷出實(shí)驗(yàn)觀察及S100鑒定：可見從組織塊中遷移出大量的呈梭形，有雙極或三極突起，突起細(xì)長，中部較亮，折光性強(qiáng)，胞體飽滿，胞核明顯、呈卵圓形的細(xì)胞，符合雪旺細(xì)胞的形態(tài)特征（圖1d、e），且經(jīng)S100鑒定呈陽性（圖1f）。隨著時(shí)間推移，組織塊中遷出的雪旺細(xì)胞的數(shù)量逐漸增多，組織塊的體積逐漸減小。

2.3 PLGA神經(jīng)導(dǎo)管大體觀察及橋接神經(jīng)缺損觀察：神經(jīng)導(dǎo)管長10mm，內(nèi)徑1.8mm，管壁厚度200μm，為多孔的結(jié)構(gòu)，孔隙大小50～100μm，具有較好的機(jī)械強(qiáng)度和韌度（圖2a）。神經(jīng)導(dǎo)管置入后，與神經(jīng)缺損的兩斷端接合良好（圖2b）。

2.4大體觀察：術(shù)后大鼠飲食正常，手術(shù)傷口均一期愈合，大鼠術(shù)側(cè)的肢體活動(dòng)障礙，足趾出現(xiàn)蜷曲畸形。術(shù)后兩周各組大鼠患側(cè)出現(xiàn)不同程度的足部腫脹和潰瘍，且A組的潰瘍程度要比B、C、D組大。C、D組大鼠的足部潰瘍在5～6周時(shí)基本愈合，B組在6～7周時(shí)基本愈合，A組在8～9周時(shí)基本愈合，12周時(shí)所有大鼠的足部潰瘍已全部愈合，大鼠全部存活。12周時(shí)按原來的手術(shù)入路暴露修復(fù)部位，可見神經(jīng)導(dǎo)管已降解，再生神經(jīng)橋接體與周圍組織無明顯粘連，表面可見毛細(xì)血管網(wǎng)形成，兩端與坐骨神經(jīng)相連接，吻合口處可見縫線，再生神經(jīng)中間略細(xì)，兩端略膨大但未見明顯神經(jīng)瘤形成（圖2c）。

2.5神經(jīng)電生理結(jié)果：在設(shè)定的刺激參數(shù)下，術(shù)后12周各組均檢測出動(dòng)作電位。各組動(dòng)作電位的峰值大小依次為A組B組>c組>D組，且各組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（圖3b）。

2.6神經(jīng)橋接體的HE、S-100、NF及甲苯胺藍(lán)染色觀察：術(shù)后12周HE染色可見A組的組織分布較為稀疏、紊亂，而B、C、D組的組織分布較為致密、有序且C、D組相較于B組更為致密、有序，偶可見到少量的炎性細(xì)胞浸潤（圖4 HE）。S-100和NF染色提示C、D組的雪旺細(xì)胞的數(shù)量和軸突的數(shù)量最多，B組的次之，A組的最少（圖4 S100、NF）；甲苯胺藍(lán)染色顯示D組的有髓神經(jīng)纖維的數(shù)量最多，形態(tài)最為規(guī)則，C組次之，B組和A組差于C組（圖4 TB）。

2.7腓腸肌的HE和Masson染色：術(shù)后12周染色可見B、C、D三組的肌纖維致密且粗大，肌細(xì)胞形態(tài)比較飽滿，纖維化程度低，而A組的肌纖維相對稀疏，細(xì)胞有所萎縮，可見比較明顯的纖維化（圖5 HE和Masson）。C組肌纖維平均橫截面積稍小于D組（P<0.05），但C、D兩組的肌纖維平均橫截面積均明顯大于A、B兩組（P

3討論

周圍神經(jīng)損傷后，斷端遠(yuǎn)側(cè)段神經(jīng)纖維的髓鞘及軸突崩解，并被雪旺細(xì)胞和巨噬細(xì)胞吞噬，發(fā)生瓦勒變性（Wallerian degeneration），近側(cè)端也發(fā)生類似變化。兩端雪旺細(xì)胞均分裂增殖形成BUngner帶，近端的軸突每天以一定的速度生長，在神經(jīng)遠(yuǎn)端趨化因子作用下，在一定距離內(nèi)再生軸突沿著BUngner帶向前延伸并到達(dá)神經(jīng)的遠(yuǎn)端。數(shù)十年來研究者們不斷探索應(yīng)用各種材料的神經(jīng)導(dǎo)管復(fù)合種子細(xì)胞修復(fù)周圍神經(jīng)缺損。本實(shí)驗(yàn)在既往課題組應(yīng)用PLGA神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的研究基礎(chǔ)上進(jìn)行改良，向PLGA導(dǎo)管內(nèi)充填自體神經(jīng)組織碎屑和ADSCs來構(gòu)建細(xì)胞神經(jīng)組織及生物材料形成的人工神經(jīng)橋接周圍神經(jīng)缺損。

在體外神經(jīng)組織雪旺細(xì)胞遷出實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，將離體的神經(jīng)組織剪成約0.5～1mm³大小的碎屑，雪旺細(xì)胞可以逐漸從組織塊中遷移出，且隨著時(shí)間的變化，從組織塊中遷出的雪旺細(xì)胞逐漸增多，在其他學(xué)者的研究中也有類似發(fā)現(xiàn)。雪旺細(xì)胞作為周圍神經(jīng)再生最重要的種子細(xì)胞，不僅參與吞噬變性的軸突和髓鞘的形成，還分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）成分和神經(jīng)營養(yǎng)因子，包括NGF，BDNF，GDNF等，可以引導(dǎo)軸突的定向生長，在軸突再生后包繞神經(jīng)軸突，促進(jìn)再生神經(jīng)的成熟，調(diào)節(jié)神經(jīng)肌肉突觸活動(dòng)。以往研究多采用異體雪旺細(xì)胞在體外培養(yǎng)擴(kuò)增后加入神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)，由于雪旺細(xì)胞培養(yǎng)增殖要求較高，涉及酶消化，純化，鑒定及擴(kuò)增，接種后存在一定的排異反應(yīng)，存活的細(xì)胞數(shù)量和功能都較低。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)直接將自體神經(jīng)組織碎屑剪碎后充填于神經(jīng)導(dǎo)管中，在通透性良好的PLGA導(dǎo)管內(nèi)，神經(jīng)組織碎屑很容易固定在導(dǎo)管內(nèi)壁，類似體外培養(yǎng)皿內(nèi)神經(jīng)組織碎屑培養(yǎng)環(huán)境，因此推測在大鼠體內(nèi)不僅產(chǎn)生的雪旺細(xì)胞數(shù)量有保障，且無異體雪旺細(xì)胞可能出現(xiàn)的排斥反應(yīng)和功能降低。本實(shí)驗(yàn)還充分利用自體神經(jīng)碎屑的基質(zhì)成份作為內(nèi)部支架結(jié)構(gòu)，為細(xì)胞的粘附和軸突的生長提供支持和引導(dǎo)。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)神經(jīng)組織塊在培養(yǎng)過程中隨著雪旺細(xì)胞的遷移體積逐漸變小，表明其可在神經(jīng)再生過程早期于神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)部作為支架材料，防止導(dǎo)管塌陷，后期隨著體積逐漸縮小亦有利于再生神經(jīng)軸突通過。在臨床工作中若切取少量神經(jīng)斷端組織、較不重要區(qū)域的神經(jīng)組織、抑或是切除下的痛性神經(jīng)瘤組織，充分剪碎后將其充填于神經(jīng)導(dǎo)管中，一方面可作為種子細(xì)胞的來源，另一方面作為內(nèi)部支架材料也是可行的。

周圍神經(jīng)損傷后再生過程中，雪旺細(xì)胞合成分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子及其他細(xì)胞粘附分子，并與相鄰軸突形成縫隙連接或緊密連接，是許多小分子物質(zhì)和信息傳遞的直接通道，其數(shù)量和功能是相當(dāng)重要的，但在損傷早期很難達(dá)到所需濃度。然而有研究者將ADSCs移植到周圍神經(jīng)損傷處，發(fā)現(xiàn)其可促進(jìn)周圍神經(jīng)的再生。ADSCs具有多向分化潛能特性，ADSCs多次傳代后，仍具有正常的2倍體核型，且不隨傳代次數(shù)增加而發(fā)生明顯改變。此外，ADSCs來源廣泛、分離培養(yǎng)方法簡單、擴(kuò)增能力強(qiáng)、低水平衰老、低免疫性等特點(diǎn)，使其成為促進(jìn)神經(jīng)再生的重要細(xì)胞來源。Tomita等將人的ADSCs體外誘導(dǎo)形成雪旺細(xì)胞樣細(xì)胞，證實(shí)誘導(dǎo)分化的細(xì)胞可以像人類雪旺細(xì)胞一樣分泌BDNF、NGF，甚至分泌的GDNF比雪旺細(xì)胞還要多，將誘導(dǎo)分化的帶有GFP標(biāo)記的ADSCs注射到脛神經(jīng)嵌壓傷的大鼠體內(nèi)，8周后可看到1/3的細(xì)胞存在于周圍軸突中，產(chǎn)生髓鞘蛋白，并促進(jìn)髓鞘的生成，證明了ADSCs經(jīng)誘導(dǎo)形成的雪旺細(xì)胞樣細(xì)胞可促進(jìn)周圍神經(jīng)再生。Kingham等將誘導(dǎo)分化的ADSCs移植到大鼠坐骨神經(jīng)橫斷損傷處，2周后發(fā)現(xiàn)移植組大鼠的坐骨神經(jīng)再生的軸突長度較對照組長。此外，雪旺細(xì)胞和ADSCs在神經(jīng)修復(fù)的過程中可能存在協(xié)同作用。Sowa等證實(shí)含有ADSCs分泌的細(xì)胞因子的培養(yǎng)基能夠支持雪旺細(xì)胞的存活和增殖。Dai等發(fā)現(xiàn)雪旺細(xì)胞聯(lián)合ADSCs修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的效果要優(yōu)于單純應(yīng)用雪旺細(xì)胞的修復(fù)效果。而對于在神經(jīng)損傷處移植ADSCs的濃度及其分化程度研究者還存在一定的爭論。

本實(shí)驗(yàn)先將自體神經(jīng)碎屑充填于PLGA神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)，然后再將體外環(huán)境下分離和培養(yǎng)的ADSCs植入導(dǎo)管內(nèi)，細(xì)胞濃度為1×10⁷/ml，來修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損，于12周取材后發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)導(dǎo)管聯(lián)合ADSCs和自體神經(jīng)組織碎屑組C組的神經(jīng)再生與A、B組比較，C組的復(fù)合肌肉動(dòng)作電位的峰值高，潛伏期短，再生神經(jīng)的軸突直徑及髓鞘厚度均有優(yōu)勢。C組大鼠腓腸肌的HE和Masson染色結(jié)果也證實(shí)大鼠再生神經(jīng)的質(zhì)量優(yōu)于A、B組。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與Gu等將ADSCs注射移植到硅膠管中修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似，表明聯(lián)合ADSCs和神經(jīng)組織碎屑的神經(jīng)導(dǎo)管能促進(jìn)周圍神經(jīng)再生。

本實(shí)驗(yàn)中所用的PLGA神經(jīng)導(dǎo)管具有良好的生物相容性和可降解性，且為多孔的結(jié)構(gòu)，不僅可以將導(dǎo)管內(nèi)部的結(jié)構(gòu)和神經(jīng)斷端與周圍組織分隔，減少炎性組織的浸潤和減輕周圍組織的壓迫，還可以實(shí)現(xiàn)導(dǎo)管內(nèi)的組織與周圍的環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換和信息交流。

總之，PLGA神經(jīng)導(dǎo)管聯(lián)合ADSCs與自體神經(jīng)組織碎屑可以有效地修復(fù)大鼠坐骨神缺損，修復(fù)效果總體上雖稍差于自體神經(jīng)移植，但我們相信隨著研究的深入，修復(fù)效果會(huì)得到更大程度的改善，甚至達(dá)到與自體神經(jīng)移植修復(fù)相媲美的效果。