戴希希文萍

（1江西省撫州市食品藥品檢驗(yàn)所 撫州 344000；2江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046）

HPLC法同時(shí)測(cè)定養(yǎng)胃顆粒中芍藥苷和甘草苷的含量

戴希希1文萍2#

（1江西省撫州市食品藥品檢驗(yàn)所 撫州 344000；2江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046）

目的：建立同時(shí)測(cè)定養(yǎng)胃顆粒中芍藥苷和甘草苷含量的HPLC法。方法：色譜柱為Dikma Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（15∶85），流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量10 μl。結(jié)果：芍藥苷在濃度29.85～298.5 μg/ml呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9；甘草苷在濃度5.28～132 μg/ml呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9；平均回收率分別為100.65%和101.31%。結(jié)論：該方法精密度好，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、靈敏，可用于養(yǎng)胃顆粒中芍藥苷和甘草苷的含量測(cè)定。

養(yǎng)胃顆粒；高效液相色譜法；芍藥苷；甘草苷

養(yǎng)胃顆粒主要含山藥、烏梅、白芍、甘草、炙黃芪等8味中藥，該藥有養(yǎng)胃健脾，理氣和中之功效[1]，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部中。該藥中白芍具有平肝止痛，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)，斂陰止汗等作用，甘草則能益氣、調(diào)和諸藥，白芍與甘草是中醫(yī)臨床上常用的藥對(duì)，現(xiàn)代藥學(xué)研究證明，甘草與白芍有協(xié)同作用，解痙作用合用比兩者單用顯著增強(qiáng)。本次實(shí)驗(yàn)參考“一測(cè)多評(píng)”[2～3]和中國(guó)藥典2015年版中的標(biāo)準(zhǔn)建立了白芍和甘草含量測(cè)定方法，對(duì)養(yǎng)胃顆粒中芍藥苷和甘草苷的含量測(cè)定方法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究[4～5]，建立了同時(shí)測(cè)定芍藥苷和甘草苷的含量測(cè)定方法?，F(xiàn)報(bào)告如下：

1 儀器與試劑

1.1 儀器HP-1100高效液相色譜儀（德國(guó)，包括HP化學(xué)工作站、G1311A四元梯度泵、1322A在線脫氣機(jī)和G1315A二極管陣列檢測(cè)器），CQ-250超聲波清洗器（購(gòu)于上海船舶電子設(shè)備研究所），AG-135電子天平（購(gòu)于梅特勒-托利多公司），SimplicityTM個(gè)人型超純水系統(tǒng)（購(gòu)于Millipore公司）。

1.2 試劑芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-201540，購(gòu)于中國(guó)食品藥品鑒定研究院），甘草苷對(duì)照品（批號(hào)：111610-201507，購(gòu)于中國(guó)食品藥品鑒定研究院）；養(yǎng)胃顆粒（國(guó)藥準(zhǔn)字Z33020174）。

2 方法

2.1 色譜條件色譜柱為迪馬Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（15∶85）；流速1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；柱溫30℃。

2.2 對(duì)照品溶液的制備取芍藥苷對(duì)照品約20 mg、甘草苷對(duì)照品約10 mg，精密稱(chēng)定，分別置于兩個(gè)100 ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10 ml兩種溶液分別置于50 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用孔徑0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.3 樣品溶液的制備取養(yǎng)胃顆粒10袋，研細(xì)，取0.40 g細(xì)粉，精密稱(chēng)定，置25 ml容量瓶中，加甲醇10 ml，超聲處理30 min，放冷至室溫，再加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液用孔徑0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.4 陰性試驗(yàn)按照藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的養(yǎng)胃顆粒處方，取除白芍和甘草外的其余藥材，依藥典中的制備方法制成陰性對(duì)照樣品，并按“2.3”項(xiàng)下方法制備成陰性對(duì)照溶液。吸取芍藥苷對(duì)照品溶液、甘草苷對(duì)照品溶液、樣品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μl注入高效液相色譜儀，結(jié)果顯示，陰性對(duì)照溶液色譜圖中無(wú)芍藥苷峰與甘草苷峰，說(shuō)明在本方法色譜條件下，其余藥材的化學(xué)成分對(duì)本測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1～圖4。

圖1 芍藥苷對(duì)照品色譜圖

圖2 甘草苷對(duì)照品色譜圖

圖3 陰性對(duì)照色譜圖

圖4 樣品色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察

2.5.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取甘草苷對(duì)照品6.60 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 ml含甘草苷0.264 mg的對(duì)照品溶液。分別精密吸取該對(duì)照品溶液適量，加甲醇稀釋成以下濃度：132 μg/ml、52.8 μg/ml、26.4 μg /ml、13.2 μg/ml、10.56 μg/ml和5.28 μg/ml。分別精密吸取10 μl，注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定對(duì)照品溶液的峰面積，將樣品濃度與峰面積進(jìn)行回歸處理，回歸方程為：Y=15 046.27X-1.295，r=0.9999（n=6），說(shuō)明甘草苷對(duì)照品在5.28～132μg/ml范圍內(nèi)，對(duì)照品溶液的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5.2 精密稱(chēng)取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對(duì)照品14.92 mg，置25 ml量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 ml含芍藥苷0.0597 mg的對(duì)照品溶液。分別精密吸取適量，加50%甲醇稀釋成以下濃度：29.85 μg/ml、59.7 μg/ml、89.55 μg/ml、119.4 μg/ml、179.1 μg/ml和298.5 μg/ml。分別精密吸取10 μl，注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定對(duì)照品溶液的峰面積，將樣品濃度與峰面積進(jìn)行回歸處理，回歸方程為：Y=13.181 8X+0.252，r=0.999 9（n=6），說(shuō)明芍藥苷對(duì)照品在29.85～298.5 μg/ml范圍內(nèi)，對(duì)照品溶液的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)取上述芍藥苷和甘草苷對(duì)照品溶液各1份，精密吸取10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定芍藥苷和甘草苷的峰面積，經(jīng)計(jì)算，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為1.46%和1.83%，符合藥典要求，說(shuō)明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述芍藥苷和甘草苷對(duì)照品溶液各1份，每隔2 h進(jìn)樣1次，進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果12 h內(nèi)樣品溶液中芍藥苷和甘草苷的峰面積值基本一致，RSD分別為1.09%和1.32%，符合藥典要求，說(shuō)明樣品溶液在12 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)取樣品，研細(xì)，取約0.40 g，共6份，精密稱(chēng)定，置25 ml量瓶中，照“2.3”項(xiàng)下的方法制成樣品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果RSD分別為1.98%和2.11%。

2.9 回收率試驗(yàn)取已知芍藥苷、甘草苷含量的供試品約0.20 g，共6份，精密稱(chēng)定，置25 ml量瓶中，分別精密加入甘草苷（0.302 4 mg/ml）和芍藥苷（1.498 mg/ml）對(duì)照品溶液各1 ml，加甲醇至近刻度，超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，按2.1項(xiàng)下方法操作，并計(jì)算回收率。見(jiàn)表1～表2。

表1 芍藥苷回收率測(cè)定結(jié)果

表2 甘草苷回收率測(cè)定結(jié)果

2.10 樣品的含量測(cè)定取5份不同批號(hào)的樣品，按2.3項(xiàng)下方法操作。見(jiàn)表3。

表3 養(yǎng)胃顆粒中芍藥苷、甘草苷含量（mg/g）

3 討論

在本次試驗(yàn)中，我們還考察了不同提取時(shí)間對(duì)樣品提取效果的影響，我們?nèi)悠?份，分別超聲處理15 min、30 min、45 min和60 min，結(jié)果顯示，超聲處理60 min、45 min與30 min無(wú)明顯差異，提取效果均優(yōu)于超聲處理15 min，為節(jié)約時(shí)間，簡(jiǎn)化操作，故選用超聲處理30 min。

也考察了不同提取溶劑對(duì)樣品提取效果的影響，我們分別選擇16%乙腈、70%乙醇和甲醇作為提取溶劑進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示，甲醇提取液中芍藥苷和甘草苷含量較高，故采用甲醇作為提取溶劑。最后，還考察了不同提取溶劑用量對(duì)樣品提取效果的影響，選擇精密加入甲醇25 ml、50 ml和75 ml對(duì)樣品進(jìn)行提取，結(jié)果顯示，提取效果無(wú)明顯差異，為方便操作、節(jié)省溶劑，選用了25 ml進(jìn)行提取。

甘草與白芍是我國(guó)中醫(yī)中的常用的藥對(duì)，現(xiàn)代研究顯示，白芍與甘草的有協(xié)同作用，兩者聯(lián)合用藥解痙作用比各自單用效果顯著增強(qiáng)。中國(guó)藥典2010及2015年版所收載的白芍和甘草藥材的標(biāo)準(zhǔn)中均分別建立了含量測(cè)定方法。本次實(shí)驗(yàn)對(duì)養(yǎng)胃顆粒中的芍藥苷和甘草苷的含量測(cè)定方法進(jìn)行了方法學(xué)研究，建立的含量測(cè)定方法可作為養(yǎng)胃顆粒質(zhì)量控制的依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員編.中國(guó)藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2015.1286

[2]豐加濤,金郁,王金成,等.基于定量指紋圖譜技術(shù)的中藥質(zhì)量控制[J].色譜,2008,26(2):180-185

[3]王智民,高慧敏,付雪濤.“一測(cè)多評(píng)”法中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)模式方法學(xué)研究[J].中國(guó)中藥雜志,2006,31(23):1925-1930

[4]王躍生,饒毅,魏惠珍,等.HPLC-“內(nèi)標(biāo)”多控法測(cè)定四逆散中芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸和新橙皮苷[J].中草藥,2008,39(9): 1316-1319

[5]戴金明,林徐劍,施曉萍.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定養(yǎng)胃顆粒中3種成分的含量[J].浙江中醫(yī)雜志,2016,54(9):696-697

R927.2

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2017.03.101

2017-03-30）

#通訊作者：文萍，E-mail：14834129@qq.com