馬洪星

（河南省鄭州市第二人民醫(yī)院病理科 鄭州 450000）

液基細胞學聯(lián)合細胞塊免疫組化檢測在肺癌組織診斷中的應用研究

馬洪星

（河南省鄭州市第二人民醫(yī)院病理科 鄭州 450000）

目的：探討液基細胞學聯(lián)合細胞塊免疫組化檢測在肺癌組織診斷中的應用價值。方法：選取2015年4月～2016年4月我院收治的肺癌患者86例為研究對象，所有患者均給予液基細胞學、細胞塊免疫組化單一檢測及兩項技術聯(lián)合檢測。比較三種檢測方式的診斷結(jié)果。結(jié)果：液基細胞學聯(lián)合細胞塊免疫組化檢測肺癌組織敏感度、特異度及準確度均明顯高于單用液基細胞學檢測或細胞塊免疫組化檢測，差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。結(jié)論：聯(lián)合運用液基細胞學和細胞塊免疫組化檢測較單一檢測方法對肺癌診斷具有更高的靈敏度和準確性，利于肺癌早期診斷的進行。

肺癌組織；液基細胞學；細胞塊免疫組化

肺癌是常見的肺原發(fā)性腫瘤，在所有惡性腫瘤發(fā)病率中約占12%。盡管現(xiàn)代醫(yī)療技術快速發(fā)展、更新，但肺癌5年生存率仍不容樂觀，且多數(shù)患者初診時，病情已發(fā)展至晚期[1]。故早期診斷對改善肺癌患者預后具有重要意義。液基細胞學檢測（LCT）是近幾年臨床新開展的一項技術，可有效保存清晰圖像，突出結(jié)構(gòu)三維立體感，且具有高質(zhì)量的染色效果。細胞塊技術可探測組織微粒結(jié)構(gòu)，并可用于免疫組化檢測，是細胞學診斷的可靠方法[2]。目前，臨床尚缺乏聯(lián)合上述兩種方式檢測肺癌的相關研究。本研究旨在探討聯(lián)合應用液基細胞學與細胞塊免疫組化檢測在肺癌診斷中的應用價值。現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2015年4月～2016年4月我院收治的肺癌患者86例為研究對象，入選患者均經(jīng)胸部CT及臨床癥狀分析初步診斷為肺癌。其中，男49例，女37例；年齡47～60歲，平均年齡（53.7± 2.5）歲；CT示肺部結(jié)節(jié)影或塊影40例，肺段或肺葉實變8例，肺部斑片狀高密度影38例。

1.2 方法

1.2.1 標本采集依據(jù)胸部CT結(jié)果確定穿刺點，選用21號穿刺針行纖維支氣管針吸活檢技術，抽取足量的細胞，用新柏氏LCT液沖洗干凈，標本送至細胞室檢查。

1.2.2 液基細胞學檢測將標本置入專用檢測杯內(nèi)，根據(jù)10∶1的比例加入二硫蘇糖醇，混合均勻，采用振蕩器將混合液振蕩15 min，取液體置入50 ml離心管內(nèi)，3 000 r/min離心處理5 min，將上清液棄去，添加細胞清洗液再次離心處理5 min，轉(zhuǎn)速同上，取沉淀物放入新柏氏LCT細胞保存瓶內(nèi)，靜置10 min后將其制成液基薄片，加用95%乙醇固定10 min后行巴氏染色。

1.2.3 細胞塊免疫組化檢測將LCT保存瓶內(nèi)余下樣本置于離心管內(nèi)，以3 000 r/min離心5 min，將上清液棄去后加入10%福爾馬林20 ml，固定1 h，再次以相同的速度離心5 min，倒入95%乙醇離心沉淀，靜置0.5 h，將上清液棄去取細胞塊，用100%無水乙醇進行脫水處理，應用二甲苯行透明處理0.5～1 h后應用液體石蠟浸透將細胞塊包埋成蠟塊，連續(xù)切片，厚度為4 mm。切片經(jīng)常規(guī)烤片后，行脫蠟、消化處理，應用0.01 mol/L緩沖液于高溫高壓下抗原修復，在37℃下應用內(nèi)源性過氧化物酶孵育10 min，在4℃條件下一抗孵育過夜，加入細胞角蛋白、上皮膜抗原、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子等抗體進行二抗，保持37℃，分別采用辣根過氧化物酶與鏈霉素過氧化物酶孵育0.5 h，DAB溶液顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。

1.3 判讀標準免疫組化法陽性標準：鏡下觀察著色呈紅棕色或棕色為陽性。根據(jù)病理學檢測結(jié)果，比較單一檢測與聯(lián)合檢測肺癌的敏感度、特異度、準確度。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS18.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

聯(lián)合檢測肺癌組織的診斷結(jié)果明顯優(yōu)于單一檢測方法，差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。見表1～表2。

表1 單一與聯(lián)合檢測效果分析

表2 單一與聯(lián)合檢測效果比較[例（%）]

3 討論

纖維支氣管針吸活檢技術（TBNA）是一種實用性較強的肺癌診斷技術，尤其是評估原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肺癌、縱隔淋巴結(jié)，診斷縱隔腫瘤或肺內(nèi)腫瘤[3]。隨著穿刺活檢針、定位診斷技術及操作方法的不斷改進、完善，TBNA在臨床常規(guī)檢查中逐漸發(fā)揮出重要作用。與傳統(tǒng)縱隔鏡檢查相比，其操作方便、價格低廉、創(chuàng)傷輕，且易重復操作。

目前，肺癌主要的診斷方法為纖維支氣管下實施的病理活檢與細胞檢測，LCT與傳統(tǒng)涂片相比，細胞結(jié)構(gòu)清晰、均勻薄層、背景色低，可清晰檢測到細胞三維結(jié)構(gòu)，既往多應用于婦科標本檢查，但隨著標準化與自動化操作流程的進展，該項技術逐漸在非婦科標本中得到廣泛應用[4]。在肺癌組織診斷中，LCT已逐漸成熟，具有較高的敏感度，但其特異度與準確度仍未達到理想狀態(tài)[5～6]。細胞塊技術通過將細胞凝結(jié)成團塊，固定后采用石蠟包埋，經(jīng)連續(xù)切片后展開免疫組化檢測[7]，細胞微小組織經(jīng)高度濃縮后其組織學模式十分清晰，形態(tài)易于辨別，染色后其核質(zhì)結(jié)構(gòu)清晰度更高，便于準確判斷異型細胞，臨床診斷中具有較高的靈敏度及準確度。研究結(jié)果顯示，細胞塊免疫組化檢測效果明顯優(yōu)于液基細胞學檢測。但由于肺癌細胞在液基涂片與細胞塊組織切片中，形態(tài)結(jié)構(gòu)差異不夠明顯，采用單一檢測方式仍存在不足。傳統(tǒng)的細胞學檢查僅能夠較好的診斷惡性腫瘤，無法有效檢測原發(fā)病灶，而細胞塊免疫組化檢測可連續(xù)反復切片，能夠輔助其他檢查，便于找尋原發(fā)病灶，尤其是在組織標本獲取困難的情況下更具應用價值[8]。本研究結(jié)合兩種檢測方法，通過互補的形式提高診斷效果，為腫瘤分型、來源及早期治療提供合理指導。研究結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測效果明顯優(yōu)于單一檢測法（P＜0.05）。綜上所述，聯(lián)合運用液基細胞學與細胞塊免疫組化檢測有助于提高肺癌組織的早期診斷率，且在組織活檢標本獲取困難的晚期患者中應用價值更為顯著。

[1]朱燕燕,懷建國,蔣艷,等.細胞DNA定量分析結(jié)合液基細胞學檢測在肺癌診斷中的價值[J].臨床與實驗病理學雜志,2016,32(5): 573-575

[2]楊新,王秋實,李艷青,等.細胞蠟塊結(jié)合免疫組化有效提高胸水細胞學陽性檢出率的臨床研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學,2014,22(12): 2894-2897

[3]劉漢忠,王嵐,何惠華,等.液基薄層細胞學檢查在肺癌診斷中的應用研究[J].臨床與病理雜志,2014,34(6):688-692

[4]李亞潔,陳凱,蔡媛,等.液基細胞學檢測結(jié)合經(jīng)支氣管針吸活檢在肺癌分期中的臨床應用[J].國際呼吸雜志,2015,35(8):590-595

[5]田偉,田延龍,殷喜梅,等.支氣管沖洗液細胞塊免疫組化染色在肺癌病理診斷中的價值[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學,2014,22(10):2354-2356

[6]謝剛,原慶會,柯琦,等.免疫組化在老年胸腔積液細胞塊病理診斷中的應用[J].四川醫(yī)學,2015,36(7):935-937

[7]王靜,陳張琴,李瑛,等.纖支鏡下液基細胞學檢查對肺癌患者的診斷效果[J].臨床肺科雜志,2016,21(6):1086-1088

[8]鄒俊勇,黃春鑫,潘登,等.液基薄層細胞學與組織學在超聲支氣管鏡獲取標本診斷中的作用[J].浙江醫(yī)學,2016,38(12):952-955

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10.13638/j.issn.1671-4040.2017.03.071

2017-02-20）