董學(xué)易，孫慧誌，趙秀蘭，趙 楠，劉 芳

小鼠脂肪組織石蠟切片制作方法

董學(xué)易1,2，孫慧誌1，趙秀蘭1,2，趙 楠1,2，劉 芳1,2

脂肪組織；石蠟制片；HE染色

常規(guī)病理制片將脂肪組織和其他組織同時用手工或者自動脫水機(jī)進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、包埋，其它組織制成的蠟塊切片完整，而脂肪組織制成的石蠟切片易空洞或缺損，較難切成完整的切片。優(yōu)良的脂肪組織切片在病理臨床診斷和科學(xué)研究中占有重要地位[1-2]，現(xiàn)階段病理技術(shù)人員對脂肪組織切片存在困難[3]。我們在日常工作中對小鼠的脂肪組織進(jìn)行多次實驗，獲得較為滿意的脂肪組織切片，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 昆明系小鼠正常脂肪組織標(biāo)本，10%中性福爾馬林、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯，均購自天津致遠(yuǎn)公司。蘇木精、伊紅染液均購自北京中杉金橋公司。石蠟(熔點60～65 ℃)購自Leica公司。Leica RM2235型輪轉(zhuǎn)切片機(jī)購自德國。

1.2 方法

1.2.1 石蠟包埋脂肪組織 正常昆明系小鼠的脂肪組織標(biāo)本10塊，大小均為1.5 cm×1 cm×0.2 cm，實驗組和對照組各5塊，10塊脂肪組織均用10%中性福爾馬林固定36 h，對照組采用常規(guī)制片程序進(jìn)行處理，實驗組采用特殊處理制片程序進(jìn)行處理。具體程序處理時間詳見表1，浸蠟溫度均為61 ℃。

表1 脂肪組織特殊處理與常規(guī)處理程序表

1.2.2 切片、染色 實驗組與對照組經(jīng)兩種不同方法處理后，用Leica RM2235型輪轉(zhuǎn)切片機(jī)進(jìn)行切片，切片厚4 μm。水浴鍋溫度42 ℃，烤片溫度70 ℃，烤片2 h后行常規(guī)HE染色。

2 結(jié)果

脂肪組織經(jīng)特殊程序處理后，肉眼可見脂肪組織的石蠟塊完整，石蠟切片可見完整的脂肪組織(圖1A、B)。鏡下可見脂肪組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰透明，核質(zhì)著色良好，無擠壓和皺縮現(xiàn)象；細(xì)胞內(nèi)的脂滴被溶解成一大空泡，胞核扁圓形，被脂滴推擠到細(xì)胞一側(cè)，呈橢圓或多角形，有的連同部分胞質(zhì)呈新月形，有的細(xì)胞則聚集呈蜂窩狀(圖1C)。實驗組5例蠟塊中，優(yōu)質(zhì)的HE染色切片達(dá)100%。

①A①B①C②A②B②C

圖1 A.實驗組脂肪組織的石蠟塊，脂肪組織形態(tài)保持完整；B.實驗組水浴鍋中的石蠟切片可見完整的脂肪組織，無皺褶、無缺損；C.實驗組脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，分界清楚，核質(zhì)著色良好，細(xì)胞核被脂滴擠到一邊，呈蜂窩狀 圖2 A.對照組脂肪組織的石蠟塊，脂肪組織形態(tài)保持完整；B.對照組載玻片上的石蠟切片可見明顯的空洞和缺損，脂肪組織不完整；C.對照組脂肪組織結(jié)構(gòu)不完整，有空洞，完整部分的脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)尚清晰，分界清楚

脂肪組織經(jīng)常規(guī)程序處理后，肉眼可見脂肪組織的石蠟塊完整(圖2A)，與實驗組無明顯差異；但石蠟切片不完整，存在許多空洞及破損(圖2B)。鏡下可見脂肪組織形態(tài)不完整，僅部分脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，核質(zhì)著色良好；可見細(xì)胞內(nèi)的脂滴被溶解成一大空泡(圖2C)。對照組5例蠟塊中，無1例有完整的HE染色切片，結(jié)果均不合格。

3 討論

優(yōu)質(zhì)的病理切片是保證臨床準(zhǔn)確診斷和科學(xué)研究的重要基礎(chǔ)。由于脂肪組織特殊的結(jié)構(gòu)，決定其必須延長在乙醇和二甲苯中的脫水、脫脂時間；只有脂肪組織中的水分徹底脫干凈、油脂徹底溶解，才能保證后續(xù)的石蠟充分浸入脂肪組織中。在制片過程中需注意以下幾點：(1)保證充分的乙醇和二甲苯脫水、脫脂時間；(2)充足的浸蠟時間，且溫度不宜太高；(3)撈片水浴鍋溫度不宜太高。本方法可以適用于乳腺組織標(biāo)本、脂肪瘤、皮膚等含脂肪比較高的標(biāo)本，還可用于肥胖基因相關(guān)研究的小鼠標(biāo)本。

本實驗采用特殊程序處理脂肪組織，該方法簡便實用，無需特殊的儀器與試劑，避免以往復(fù)雜的處理過程，如微波熱固定、丙酮脫脂固定等程序[4-6]。本實驗在保證切片質(zhì)量的同時提高了工作效率，滿足臨床診斷和科學(xué)研究的需要，值得在科研和臨床上推廣。

[1] 王志宏，吳智春. 蒼白二陳湯對代謝綜合征模型大鼠脂肪組織NF-κB表達(dá)的影響[J]. 山東中醫(yī)雜志, 2012,31(8):594-596.

[2] 魏艷華，曾 錚. 脂肪組織常規(guī)制片的改進(jìn)[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2015,31(4):467.

[3] 張 健，王 玨，朱禮國，劉 濤. 處理不良的脂肪組織快速改良方法[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2006,22(4):406.

[4] 章栽良，顧天英，顧元忻. 脂肪組織HE制片的探討[J]. 診斷病理學(xué)雜志, 2010,17(6):447.

[5] 高靜娜，王銀萍，鄭 彥. 病理HE制片中易出現(xiàn)問題的解決方略[J]. 吉林醫(yī)學(xué), 2011,32(20):4205-4207.

[6] 陳 冬，俞 千，陳靚燁，梁偉瓊. 提高脂肪組織制片質(zhì)量方法的改進(jìn)[J]. 解剖學(xué)研究, 2016,38(1):78-79.

國家自然科學(xué)基金(81572872)

1天津醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，天津 3000702天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院病理科，天津 300052

董學(xué)易，女，碩士，實驗師。E-mail: dxy7235202@126.com 趙秀蘭，女，主任技師，通訊作者。E-mail: sunbaocun@aliyun.com

時間：2017-5-17 23:54 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170517.2352.030.html

R 36

B

1001-7399(2017)05-0584-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.05.030

接受日期：2017-02-20