王曉蓉，楊致蓉，王衛(wèi)平，黃寧寧，范衛(wèi)星，唐偉，盧衛(wèi)紅，蔡軍，易正輝，方貽儒，張晨

·論著·

補(bǔ)體因子H基因Y402H位點多態(tài)性與精神分裂癥及其臨床特征的相關(guān)性分析

王曉蓉，楊致蓉，王衛(wèi)平，黃寧寧，范衛(wèi)星，唐偉，盧衛(wèi)紅，蔡軍，易正輝，方貽儒，張晨

目的：探討補(bǔ)體因子H基因(CFH)Y402H位點多態(tài)性與精神分裂癥及其臨床特征的相關(guān)性。 方法：采用陽性和陰性癥狀量表(PANSS)及重復(fù)性神經(jīng)心理狀態(tài)測驗(RBANS)對254例穩(wěn)定期精神分裂癥患者(病例組)進(jìn)行精神病性癥狀及認(rèn)知功能評估；采用SNaPshot技術(shù)對病例組及339名健康者(正常對照組)Y402H位點進(jìn)行基因分型和比較；分析Y402H位點多態(tài)性與精神分裂癥及其臨床特征的相關(guān)性。 結(jié)果：兩組Y402H位點基因型和等位基因頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。病例組中C等位基因攜帶者PANSS陰性癥狀分、一般病理分及總分均顯著高于非C等位基因攜帶者(F=23.88，F(xiàn)=4.79,F=10.70；P<0.05或P<0.01)；RBANS中的延時記憶分及總分顯著低于非C等位基因攜帶者(F=8.27，F(xiàn)=5.51；P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論：CFH基因Y402H位點多態(tài)性不是精神分裂癥的易感基因，但該位點C等位基因攜帶者與精神分裂癥陰性癥狀和認(rèn)知功能損害有關(guān)。

補(bǔ)體因子H基因； Y402H位點多態(tài)性； 精神分裂癥； 臨床特征

精神分裂癥是一種常見的復(fù)雜多基因遺傳病，以陽性癥狀、陰性癥狀以及認(rèn)知功能障礙為核心臨床特征[1]；病因至今未明，免疫學(xué)研究[2]發(fā)現(xiàn)精神分裂癥患者存在不同程度的細(xì)胞免疫和體液免疫缺陷，由此提出了精神分裂癥自身免疫假說，認(rèn)為精神分裂癥可能是一種免疫性疾病。張國林等[3]對精神分裂癥患者腦脊液免疫功能的研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)體C3含量顯著下降，提示補(bǔ)體系統(tǒng)異常與精神分裂癥之間有聯(lián)系。補(bǔ)體因子H(CFH)是補(bǔ)體系統(tǒng)中重要的調(diào)節(jié)因子，可避免補(bǔ)體系統(tǒng)過度激活所致的免疫病理反應(yīng)。全基因組關(guān)聯(lián)研究[4]顯示中國漢族人群的CFH基因與C3表達(dá)之間具有顯著性關(guān)聯(lián)。Y402H是CFH基因重要的功能性位點，既往研究[5-7]表明該位點與多種神經(jīng)精神疾病，如抑郁癥、阿爾茲海默病、缺血性腦卒中等具有重要關(guān)聯(lián)。本研究探討CFH基因Y402H位點多態(tài)性與精神分裂癥及其臨床特征的關(guān)系。

1 對象和方法

1.1 對象

病例組：為2014年1月至2015年12月在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心、浙江省金華市第二醫(yī)院和溫州市康寧醫(yī)院就診的精神分裂癥患者。入組標(biāo)準(zhǔn)：符合《美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊》第4版(DSM-IV)精神分裂癥診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡18～50歲，性別不限；≥初中文化程度；入組前已處于病情穩(wěn)定狀態(tài)即陽性和陰性癥狀量表(PANSS)評分<60分>6個月。排除標(biāo)準(zhǔn)[8]：6個月內(nèi)使用過改良電休克治療或經(jīng)顱磁刺激治療者、物質(zhì)濫用/依賴者、有嚴(yán)重軀體疾病者。共254例患者入組，其中男118例，女136例；平均年齡(34.0±8.7)歲；平均受教育年限(9.5±1.9)年；平均首發(fā)病年齡(27.7±5.3)歲；平均病程(45.8±16.5)個月。

正常對照組：為同期健康體檢者339名，均無嚴(yán)重軀體疾病史、精神疾病史和精神疾病家族史；其中男164名，女175名；平均年齡(33.6±9.4)歲。

本研究經(jīng)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心倫理委員會審核批準(zhǔn)，所有入組對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取和基因分型 采集入組者靜脈血2 ml，乙二胺四乙酸抗凝備用，采用離心柱型基因組DNA試劑盒(北京天根生物有限公司，DP304型)提取外周血白細(xì)胞全基因組DNA。CFH基因Y402位點分型采用SNaPshot方法檢測。正向引物：TTATGGTCCTTAGGAAAATGTTATTT；反向引物：ATGGCAGGCAACGTCTATAG；延伸引物：TTTGGAAAATGGATATAATCAAAAT；所有引物由上海英駿生物有限公司合成。PCR反應(yīng)條件及測序參照本研究組既往工作[5]。

1.2.2 精神癥狀評定 采血當(dāng)天由培訓(xùn)合格的精神科醫(yī)師對病例組患者進(jìn)行PANSS評定，量表包括陽性癥狀分、陰性癥狀分、一般病理分，3項評分之和為PANSS總分。

1.2.3 認(rèn)知功能評估 采用重復(fù)性神經(jīng)心理狀態(tài)測驗(RBANS)評估認(rèn)知功能，RBANS包含12個分測驗，可概括成5組神經(jīng)心理狀態(tài)：①注意力(由數(shù)字廣度和符號數(shù)字匹配組成)：反映受試的記憶容量和在視覺與口頭上控制短時程記憶庫呈現(xiàn)信息的能力；②言語功能(由圖形命名和語義流暢組成)：是通過圖畫命名或回憶已知的素材反映受試言語應(yīng)答能力；③視覺廣度(由圖形臨摹和線條定位組成)：反映受試感知空間關(guān)系和構(gòu)建一幅圖畫正確空間拷貝能力；④即刻記憶(由詞匯記憶和故事復(fù)述組成)：反映受試在接觸到信息后短時記憶的能力；⑤延遲記憶(由詞匯回憶、詞匯再認(rèn)、故事回憶和圖形回憶組成)：反映受試順行性記憶的能力。

由精神科醫(yī)師參與RBANS量表評定，評定前給予培訓(xùn)，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，量表錄入數(shù)據(jù)庫由專人復(fù)核[9]。

2 結(jié)果

2.1 兩組CFH基因Y402H基因型及等位基因頻率比較

兩組CFH基因Y402H位點基因型的觀察值和期望值Hardy-Weinberg平衡吻合度良好，具有群體代表性。兩組間CFH基因Y402H位點C/C型、C/T型、T/T型及T、C等位基因頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.72,χ2=0.25；P>0.05)。見表1。

表1 兩組CFH基因Y402H位點基因型和等位基因頻率比較(例，%)

2.2 病例組不同基因型患者PANSS和RBANS評分比較

由于Y402H多態(tài)性C/C基因型在中國漢族人群中分布頻率較低，本研究將C/C和C/T基因型合并為一組。同時，為了排除性別、年齡、受教育年限、首發(fā)年齡和病程對認(rèn)知功能的影響，在進(jìn)行Y402H多態(tài)性與PANSS和RBANS關(guān)聯(lián)分析時，將這些因素作為協(xié)變量納入多因素方差分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，C等位基因攜帶者PANSS量表中陰性癥狀分、一般病理分及總分明顯高于非C等位基因攜帶者(P<0.05或P<0.01)；RBANS量表中延時記憶評分及總分明顯低于非C等位基因攜帶者(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 病例組不同基因型患者PANSS和RBANS評分比較

3 討論

早期臨床觀察發(fā)現(xiàn)母體病毒感染后子代發(fā)生精神分裂癥的風(fēng)險也顯著上升；流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)也支持感染與精神分裂癥之間存在一定聯(lián)系[10]。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)發(fā)展，諸多研究[11]顯示精神分裂癥患者中樞及外周一些抗病毒抗體顯著增加，且抗體濃度與陰性癥狀顯著關(guān)聯(lián)。影像學(xué)研究[12]也發(fā)現(xiàn)母孕期或發(fā)育期某些病毒感染(逆轉(zhuǎn)錄酶病毒、單純皰疹病毒)可能導(dǎo)致大腦結(jié)構(gòu)改變和功能損傷。免疫系統(tǒng)對傷害感受器的敏化作用主要通過補(bǔ)體、免疫細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞等得以實現(xiàn)。補(bǔ)體是一組具有酶樣活性的球蛋白，存在于人和動物的血清及組織中，不僅參與非特異性防御反應(yīng)，也在特異性免疫中發(fā)揮重要作用。補(bǔ)體的激活有3種方法：經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑。既往研究[13]發(fā)現(xiàn)補(bǔ)體C3表達(dá)在精神分裂癥患者體液中變化明顯，提示補(bǔ)體異常激活可能參與精神分裂癥病理生理過程。C3參與旁路激活途徑，受到CFH負(fù)性調(diào)控。CFH由20個膜聚體組成，是抑制旁路途徑補(bǔ)體活化及放大的主要因子。在分子水平上，CFH基因位于染色體1q32，該區(qū)域與精神分裂癥存在連鎖[14]。Y402H位點是CFH基因外顯子9核苷酸1277堿基T突變?yōu)閴A基C，使蛋白質(zhì)第402位編碼子酪氨酸突變?yōu)榻M氨酸，從而改變CFH蛋白功能[15]。本研究針對Y402H位點與精神分裂癥之間的關(guān)系展開討論。

本研究結(jié)果顯示Y402H位點與中國漢族精神分裂癥并無顯著性關(guān)聯(lián)。然而進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)該位點與PANSS陰性癥狀分、一般病理分、總分，以及RBANS中延時記憶評分間存在顯著性關(guān)聯(lián)，C等位基因攜帶者PANSS的陰性癥狀分、一般病理分及PANSS總分明顯高于非C等位基因攜帶者；RBANS中的延時記憶評分明顯低于非C等位基因攜帶者，提示CFH基因雖然不是中國漢族精神分裂癥的致病基因，但其Y402H位點變異可能導(dǎo)致基因功能變化影響患者疾病嚴(yán)重程度，特別是陰性癥狀和認(rèn)知功能。精神分裂癥作為一種多基因遺傳病，臨床表型復(fù)雜，存在很多病理生理變化。遺傳學(xué)理論指出如果多個基因與一種疾病相關(guān)，那么其中某個基因就與疾病的一種顯性表型有關(guān)。因此，本研究結(jié)果提示CFH雖然不是精神分裂癥的主要致病基因，但在陰性癥狀和認(rèn)知損害發(fā)生過程中起重要作用。既往已有多項研究[16-18]顯示炎癥反應(yīng)與精神分裂癥陰性癥狀和認(rèn)知功能之間存在重要聯(lián)系。功能磁共振成像研究[19]顯示阿爾茲海默病患者外周血CFH與海馬內(nèi)N-乙酰天冬氨酸/肌醇比例呈顯著性相關(guān)；提示CFH與認(rèn)知損害之間具有重要聯(lián)系。因此CFH在精神分裂癥中的作用機(jī)制可能與異常激活旁路途徑引起炎癥反應(yīng)有關(guān)。

綜上所述，本研究結(jié)果并不支持CFH基因作為精神分裂癥的易感基因，但提示該基因參與了陰性癥狀和認(rèn)知損害過程。然而，本研究采用橫斷面研究設(shè)計，且樣本量較小，特別是Y402H位點基因型在中國漢族人群中分布頻率較低，在本文數(shù)量性狀分析中攜帶C等位基因組患者例數(shù)較少，導(dǎo)致檢驗效能較低。因此，應(yīng)謹(jǐn)慎理解本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在未來需繼續(xù)擴(kuò)大樣本量，開展縱向研究，以驗證本研究結(jié)果，并進(jìn)一步探索CFH基因Y402H位點在精神分裂癥發(fā)生過程中的病理生理機(jī)制。

[1]Zhang C,Lu W,Wang Z,et al.A comprehensive analysis of NDST3 for schizophrenia and bipolar disorder in Han Chinese[J].Transl Psychiatry,2016,6(1)：e701.

[2]Coutinho E,Vincent A.Autoimmunity in neuropsychiatric disorders[J].Handb Clin Neurol,2016,133：269-282.

[3]張國林，王希英.精神分裂癥患者體液免疫功能的變化及意義[J].中國神經(jīng)精神疾病雜志,2003,29(6)：461-462.

[4]Yang X,Sun J,Gao Y,et al.Genome-wide association study for serum complement C3 and C4 levels in healthy Chinese subjects[J].PLoS Genet,2012,8(9)：e1002916.

[5]Zhang C,Zhang DF,Wu ZG,et al.Complement factor H and susceptibility to major depressive disorder in Han Chinese[J].Br J Psychiatry,2016,208(5)：446-452.

[6]Zhang DF,Li J,Wu H,et al.CFH variants affect structural and functional brain changes and genetic risk of Alzheimer's disease[J].Neuropsychopharmacology,2016,41(4)：1034-1045.

[7]Zee RY,Diehl KA,Ridker PM.Complement factor H Y402H gene polymorphism,C-reactive protein,and risk of incident myocardial infarction,ischaemic stroke,and venous thromboembolism：a nested case-control study[J].Atherosclerosis,2006,187(2)：332-335.

[8]Zhang C,Li Z,Shao Y,et al.Association study of tryptophan hydroxylase-2 gene in schizophrenia and its clinical features in Chinese Han population[J].J Mol Neurosci,2011,43(3)：406-411.

[9]Cai J,Zhu Y,Zhang W,et al.Comprehensive family therapy：an effective approach for cognitive rehabilitation in schizophrenia[J].Neuropsychiatr Dis Treat,2015,11：1247-1253.

[10]Garcia Bueno B,Caso JR,Madrigal JL,et al.Innate immune receptor Toll-like receptor 4 signalling in neuropsychiatric diseases[J].Neurosci Biobehav Rev,2016,64：134-147.

[11]Bolu A,Oznur T,Tok D,et al.Seropositivity of neurotropic infectious agents in first-episode schizophrenia patients and the relationship with positive and negative symptoms[J].Psychiatr Danub,2016,28(2)：132-138.

[12]Prasad KM,Eack SM,Goradia D,et al.Progressive gray matter loss and changes in cognitive functioning associated with exposure to herpes simplex virus 1 in schizophrenia：a longitudinal study[J].Am J Psychiatry,2011,168(8)：822-830.

[13]Santos Soria L,Moura Gubert C,Cereser KM,et al.Increased serum levels of C3 and C4 in patients with schizophrenia compared to eutymic patients with bipolar disorder and healthy[J].Rev Bras Psiquiatr,2012,34(1)：119-120.

[14]Jang YL,Kim JW,Lee YS,et al.Linkage of schizophrenia with chromosome 1q32 in Korean multiplex families[J].Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet,2007,144B(3)：279-284.

[15]Langford-Smith A,Keenan TD,Clark SJ,et al.The role of complement in age-related macular degeneration：heparan sulphate,a ZIP code for complement factor H? [J].J Innate Immun,2014,6(4)：407-416.

[16]Xiu MH,Yang GG,Tan YL,et al.Decreased interleukin-10 serum levels in first-episode drug-naive schizophrenia：relationship to psychopathology[J].Schizophr Res,2014,156(1)：9-14.

[17]Hope S,Ueland T,Steen NE,et al.Interleukin 1 receptor antagonist and soluble tumor necrosis factor receptor 1 are associated with general severity and psychotic symptoms in schizophrenia and bipolar disorder[J].Schizophr Res,2013,145(1-3)：36-42.

[18]Fan X,Liu EY,Freudenreich O,et al.Higher white blood cell counts are associated with an increased risk for metabolic syndrome and more severe psychopathology in non-diabetic patients with schizophrenia[J].Schizophr Res,2010,118(1-3)：211-217.

[19]Thambisetty M,Hye A,Foy C,et al.Proteome-based identification of plasma proteins associated with hippocampal metabolism in early Alzheimer's disease[J].J Neurol,2008,255(11)：1712-1720.

Analysis of complement factor H Y402H gene polymorphism with schizophrenia and its clinical characteristics

WANGXiao-rong,YANGZhi-rong,WANGWei-ping,HUANGNing-ning,FANWei-xing,TANGWei,LUWei-hong,CAIJun,YIZheng-hui,FANGYi-ru,ZHANGChen.

JinhuaSecondHospital,Jinhua321016,China

Objective： To analyze the relationship between CFH gene Y402H polymorphism and schizophrenia as well as its clinical characteristics. Method：We recruited 254 schizophrenia patients with stable period and 339 healthy controls.PANSS was used to evaluate the psychotic symptoms and RBASS was used to evaluate cognitive function in patients with schizophrenia.SNaPshot technique was carried out to genotype Y402H polymorphism. Results：There were no significant differences in genotypic or allelic frequencies of the Y402H polymorphism between the case and control groups (P>0.05).In the PANSS evaluation,patients with C allele had higher scores in negative symptoms,general psychopathology and total score than those without C allele (F=23.88，F(xiàn)=4.79，F(xiàn)=10.70;P<0.05 orP<0.01).In the RBANS evaluation,patients with C allele had lower score in delayed memory than those without C allele (F=8.27,F=5.51;P<0.05 orP<0.01). Conclusion：This study does not provide evidence for CFH gene Y402H polymorphism conferring susceptibility to schizophrenia,however,suggested that this gene may contribute to the development of negative symptoms and cognitive impairment.

complement factor H gene； Y402H polymorphism； schizophrenia； clinical characteristics

國家自然科學(xué)基金(81471358)；金華市科學(xué)技術(shù)局項目(2015-3-063)；上海市科學(xué)技術(shù)委員會西醫(yī)引導(dǎo)類項目(14411969000)；上海市教育委員會高峰高原計劃-臨床專職研究隊伍(20152530)；上海市衛(wèi)生與計劃生育委員會科研項目(201540029)

321016 浙江省金華第二醫(yī)院(王曉蓉，楊致蓉，王衛(wèi)平，黃寧寧，范衛(wèi)星)； 溫州康寧醫(yī)院(唐偉)；上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心(盧衛(wèi)紅，蔡軍，易正輝，方貽儒，張晨)

張晨，E-Mail:zhangchen645@gmail.com

R749.3

A

1005-3220(2017)03-0145-04

2016-08-25

2016-12-16)