王陽(yáng)++林鵬程++明升平++許敏++拉瓊

摘要：為比較掌葉大黃、喜馬拉雅大黃、菱葉大黃、頭序大黃4種高山藥用大黃中蒽醌類成分含量的差異，采用紫外分光光度法，以大黃素為對(duì)照品，0.5%醋酸鎂-甲醇溶液為顯色劑，測(cè)定了樣品溶液在510 nm處的吸光度。結(jié)果表明，4種大黃中總蒽醌和結(jié)合蒽醌的含量為喜馬拉雅大黃>掌葉大黃>菱葉大黃>頭序大黃，游離蒽醌的含量為喜馬拉雅大黃>掌葉大黃>頭序大黃>菱葉大黃，與藏藥用大黃的等級(jí)劃分基本一致。

關(guān)鍵詞：掌葉大黃；喜馬拉雅大黃；菱葉大黃；頭序大黃；蒽醌；測(cè)定

中圖分類號(hào)：R914 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）10-1945-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.10.036

Quantitative Determination of Anthraquinones in Four High-mountain

Medicinal Species of Rheum

WANG Yang1，LIN Peng-cheng2，MING Sheng-ping1，XU Min1，LA Qiong1

（1.Institute of Biodiversity & Geobiology， Department of Life Sciences， Tibet University， Lhasa 850000， China；

2.College of Pharmacy， Qinghai Nationalities University， Xining 810000，China）

Abstract： To compare the differences between the content of anthraquinones in Rheum palmatum L.，Rheum webbianum Royle，Rheum rhomboideum A. Los. and Rheum globulosum Gage，adopt ultraviolet spectrophotometry，emodin as the reference substance，0.5% magnesium acetate-methanol solution as the chromogenic agent，determined the absorbance of sample solution at 510 nm. The results show that the content of total anthraquinones and conjugated anthraquinones in the four high-mountain medicinalspecies of Rheum were Rheum webbianum Royle>Rheum palmatum L.>Rheum rhomboideum A. Los.>Rheum globulosum Gage，the content of free anthraquinone in the four high-mountain medicinal species of Rheum wsa Rheum webbianum Royle>Rheum palmatum L.>Rheum globulosum Gage>Rheum rhomboideum A. Los. The classification of the four high-mountain medicinalspeices of Rheum are basically the same with traditional Tibetan medicine classification.

Key words：Rheum palmatum L.； Rheum webbianum Royle； Rheum rhomboideum A. Los.； Rheum globulosum Gage； anthraquinones； determination

大黃為中國(guó)傳統(tǒng)的藥材，在藏藥中也有廣泛的應(yīng)用，具有瀉熱通腸，涼血解毒，行瘀化積，活血的功效[1]。青藏高原為大黃屬（Rheum）的分布中心[2]，有26種大黃屬植物[3]。藏藥用大黃根據(jù)藥性的強(qiáng)烈、溫和、遜次分為上（君姆扎）、中（曲什扎）、下（曲瑪孜）三品[3]。大黃的化學(xué)成分復(fù)雜，主要活性成分為蒽醌類衍生物[4]，其中大黃素等游離蒽醌有明顯的抗菌、抗腫瘤的功效[5]，結(jié)合蒽醌是大黃的主要致瀉成分[6]。為了比較上品、中品和下品大黃有效成分含量間的差異，選取了具有代表性的4種藏藥用大黃：掌葉大黃（Rheum palmatum L.），上品大黃[7]，也為正品大黃[8]，生于海拔1 500～4 400 m山坡或山谷濕地[9]，根及根莖可入藥，具有清熱瀉火等功效[8]；喜馬拉雅大黃（Rheum webbianum Royle），上品大黃[10]，生長(zhǎng)于海拔3 500～4 660 m的山坡地帶[9]，藏語(yǔ)名為君姆扎，主治培根病引起的熱性病[11]；菱葉大黃（Rheum rhomboideum A. Los.），中品大黃[7]，生長(zhǎng)于海拔4 700～5 400 m的山坡草地、草甸、沙礫地生境[9]，藏語(yǔ)名為曲什扎，有治療赤巴病的功效[11]；頭序大黃（Rheum globulosum Gage），下品大黃[12]，生于海拔4 500～5 000 m山坡沙礫地或河灘草地[9]；藏藥名為曲瑪孜，其全草有主治黃水病的功效[13]。

本試驗(yàn)通過(guò)研究其根部中蒽醌類成分的含量，以期從有效成分含量的角度探討藏藥用大黃等級(jí)劃分的合理性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 T6型紫外可見分光光度儀（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），XPE電子分析天平（METTLER TOLEDO公司MS205DU型），回流提取裝置（德國(guó)behr Labor-Technik），PHS-3C型酸度計(jì)（江蘇電分析儀器廠）。

1.1.2 試劑 醋酸鎂、甲醇、乙醇、硫酸、三氯甲烷均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?。大黃素對(duì)照品（批號(hào)MUST-13022716，中國(guó)藥品生物制品研究所）。

1.1.3 測(cè)試樣品 大黃藥材樣品（表1）均由西藏大學(xué)生命科學(xué)系拉瓊教授鑒定。樣品陰干，粉碎至中粉，避光冷藏備用。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱量大黃素對(duì)照品1.61 mg，加0.5%醋酸鎂-甲醇溶液溶解，轉(zhuǎn)移并定容至25 mL容量瓶中，得到含大黃素0.064 4 mg/mL的對(duì)照品溶液，備用。

1.2.2 樣品溶液的制備

1）游離蒽醌供試溶液的制備。分別精密稱量0.5 g樣品（過(guò)40目）粉末，置于500 mL圓底燒瓶中，加適量氯仿加熱回流提取至無(wú)色，冷卻后，將提取液過(guò)濾定容至50 mL容量瓶中。分別精密吸取掌葉大黃提取液、喜馬拉雅大黃提取液、頭序大黃和菱葉大黃提取液1 mL，加熱揮去氯仿，用0.5%醋酸鎂-甲醇溶液溶解并定容至10 mL容量瓶中，搖勻備用。

2）總蒽醌供試溶液的制備。分別精密稱量0.5 g樣品（過(guò)40目）粉末，置于500 mL圓底燒瓶中，加乙醇回流提取2 h，冷卻后，將提取液過(guò)濾定容至100 mL容量瓶中。精密吸取上述溶液10 mL置500 mL圓底燒瓶中，加熱去乙醇，加入20 mL硫酸溶液（2.5 moL/L）加熱回流1.5 h，待冷卻后加氯仿20 mL，加熱回流2 h，冷卻后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用氯仿清洗圓底燒瓶，并入分液漏斗，分離油層和水層，水層繼續(xù)用少量氯仿洗滌4次并入油層，并用少量去離子水洗滌數(shù)次至油層為中性為止，然后置于50 mL容量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取掌葉大黃、喜馬拉雅大黃、頭序大黃和菱葉大黃提取液2 mL，加熱揮去氯仿，用0.5%醋酸鎂-甲醇溶液溶解并定容至10 mL容量瓶中，搖勻備用。

1.2.3 最大吸收波長(zhǎng)選擇 取大黃素對(duì)照品溶液適量，在400～600 nm波長(zhǎng)掃描。結(jié)果顯示，大黃素對(duì)照品溶液在510 nm處有最大吸收，選510 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.2.4 樣品測(cè)定 分別取供試品溶液適量，用紫外可見分光光度計(jì)以0.5%醋酸鎂-甲醇為空白，在510 nm處測(cè)定吸光度。分別計(jì)算各個(gè)樣品中游離蒽醌與總蒽醌的含量，結(jié)合蒽醌含量=總蒽醌含量-游離蒽醌含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及線性關(guān)系考察 精密吸取大黃素對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加0.5%醋酸鎂-甲醇溶液至刻度。以0.5%醋酸鎂-甲醇溶液為空白，分別測(cè)定各溶液在510 nm處的吸光度（A）。以濃度（C）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程：A=0.059 92C+0.000 41（r=0.999 7），線性范圍為3.22～64.40 μg/mL。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

2.1.2 精密度試驗(yàn) 取大黃素對(duì)照品溶液，在510 nm處測(cè)定吸光度，RSD為0.19%（n=6），表明該方法精密度良好。

2.1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取大黃素對(duì)照品溶液，每隔2 h在510 nm處測(cè)定吸光度，共測(cè)5次，RSD為0.16%，表明吸光度在10 h內(nèi)穩(wěn)定，該方法穩(wěn)定性較好。

2.1.4 回收率測(cè)定 精密稱取3份喜馬拉雅大黃，每份0.01 g，分別加入大黃素對(duì)照品0.95、1.19、1.44 mg，供試液并在510 nm處測(cè)定吸光度，平均加樣回收率為97.6%，RSD為0.23%。

2.2 樣品含量測(cè)定

分別取供試品溶液適量，用紫外可見分光光度計(jì)以0.5%醋酸鎂-甲醇為空白，在510 nm處測(cè)定吸光度。分別計(jì)算各個(gè)樣品中游離蒽醌與總蒽醌的含量，測(cè)定結(jié)果見表2。4種大黃中總蒽醌和結(jié)合蒽醌的含量為喜馬拉雅大黃>掌葉大黃>菱葉大黃>頭序大黃，游離蒽醌的含量為喜馬拉雅大黃>掌葉大黃>頭序大黃>菱葉大黃，與藏藥用大黃的等級(jí)劃分基本一致。

3 小結(jié)

4種大黃中總蒽醌和結(jié)合蒽醌的含量測(cè)定結(jié)果與藏藥用大黃的等級(jí)劃分基本一致。其中，喜馬拉雅大黃中總蒽醌和游離蒽醌的含量尤其高，其總蒽醌含量為掌葉大黃的1.80倍，游離蒽醌含量高達(dá)掌葉大黃的2.36倍。喜馬拉雅大黃中蒽醌類成分的含量均優(yōu)于正品掌葉大黃，但由于其生長(zhǎng)于高海拔地區(qū)，采集困難，產(chǎn)量不如掌葉大黃，不能大范圍推廣和應(yīng)用。因此，傳統(tǒng)上可能不被重視，下一步應(yīng)進(jìn)一步重視喜馬拉雅大黃的應(yīng)用研究和開發(fā)價(jià)值。相比之下，掌葉大黃分布范圍廣，產(chǎn)量高、易栽培、有效成分含量高，所以掌葉大黃作為正品大黃沿用至今是有道理的。菱葉大黃和頭緒大黃中蒽醌類成分的含量要明顯低于掌葉大黃，頭序大黃中結(jié)合蒽醌的含量還不足掌葉大黃的1/10，所以其瀉下作用較弱，藥性平溫。

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