郝夢(mèng)哲+夏薇

【摘要】急性白血病患者經(jīng)化療后達(dá)到完全緩解可達(dá)80%，但5年存活率僅30～40%[1]，究其根源是完全緩解后，體內(nèi)仍含少量白血病細(xì)胞。因此，對(duì)于微量殘留白血?。∕RD）的檢測(cè)可更早預(yù)測(cè)急性白血病的復(fù)發(fā)。本文對(duì)MRD檢測(cè)方法以及對(duì)急性白血病的臨床意義進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】微量殘留白血??；檢測(cè)；急性白血病

【中圖分類(lèi)號(hào)】R733.7 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2016.29.0.01

檢測(cè)方法：MRD常用的監(jiān)測(cè)方法分以下幾類(lèi)：細(xì)胞遺傳學(xué)方法、分子生物學(xué)方法和免疫學(xué)方法。但這些方法都有一定局限性不能理想監(jiān)測(cè)MDR。

1 細(xì)胞遺傳學(xué)方法

1.1 染色體核型分析

多數(shù)白血病細(xì)胞伴隨染色體核型的異常，如在AML中出現(xiàn)異常分裂象或數(shù)量結(jié)構(gòu)的改變。用此法檢測(cè)MRD的個(gè)體差異大且敏感性差，近年此法研究少在此不多敘述。

1.2 熒光原位雜交技術(shù)

熒光原位雜交技術(shù)（FISH）是利用熒光標(biāo)記的特異染色體為探針檢測(cè)白血病細(xì)胞中染色體的異常。改善了傳統(tǒng)染色體核型分析的缺點(diǎn)，具有高敏感度且操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，可短時(shí)間分析較多的骨髓、外周血或組織細(xì)胞，檢出難以識(shí)別的基因異常及斷裂點(diǎn)的異常。由于其檢測(cè)的靶分子為基因，可避免由于表面抗原的改變?cè)斐傻募訇幮缘葐?wèn)題。

熒光原位雜交技術(shù)的臨床意義：在中國(guó)APL在AML中占有很大比例，90%以上的APL具有特征性融合基因PML-RARα，F(xiàn)ISH為檢測(cè)APL-MRD最常用的方法。黃正剛等[2]用FISH檢測(cè)了30例已達(dá)完全緩解并經(jīng)三輪鞏固治療后的APL患者，發(fā)現(xiàn)融合基因PML-RARα持續(xù)陽(yáng)性的有3例并最終復(fù)發(fā)。張濟(jì)等[3]用FISH檢測(cè)34例完全緩解的APL患者，9例PML-RARα融合基因陽(yáng)性的患者中3例檢測(cè)結(jié)果為陰性；經(jīng)鞏固維持治療后，4例PML-RARα融合基因陽(yáng)性的患者中2例檢測(cè)結(jié)果為陰性。所以，F(xiàn)ISH檢測(cè)APL-MRD的敏感性有待提高。

2 免疫學(xué)方法

2.1 多參數(shù)流式細(xì)胞儀檢測(cè)（MFC）

因成本較低準(zhǔn)確度敏感度較高，為目前應(yīng)用最廣的方法，它是依據(jù)識(shí)別在白血病細(xì)胞表面聯(lián)合表達(dá)的特異白血病相關(guān)免疫表型（LAIPs）。能快速對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)分析，根據(jù)正常細(xì)胞與白血病細(xì)胞表達(dá)免疫表型的不同，可在104個(gè)細(xì)胞中檢測(cè)出一個(gè)白血病細(xì)胞。但在化療過(guò)程中，免疫表型可發(fā)生改變出現(xiàn)假陰性，要提高檢出率可結(jié)合初診LAIPs再輔以檢測(cè)其他抗體組合，也可同時(shí)檢測(cè)外周血和骨髓來(lái)提高檢出率。但目前并沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)化的抗體組合，且個(gè)體間差異也較大。

2.2 多參數(shù)流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)MRD的臨床應(yīng)用

MRD復(fù)發(fā)的患者檢出LAIPs往往與患者初發(fā)時(shí)LAIPs相同，因此殘留的白血病細(xì)胞會(huì)保持初期白血病細(xì)胞異常抗原的特征，可用MFC針對(duì)性的檢測(cè)MRD患者初期抗原的免疫表型。研究表明，用MFC檢測(cè)與AML密切相關(guān)的細(xì)胞特異性LAIPs信號(hào)，檢出LAIPs陽(yáng)性細(xì)胞的患者有60%在造血干細(xì)胞移植后復(fù)發(fā)。而檢測(cè)LAIPs陰性的患者復(fù)發(fā)率極低。利用MFC對(duì)白血病細(xì)胞LAIPs的分析對(duì)AML患者預(yù)后有提示作用。

3 分子遺傳學(xué)方法

3.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RQ-PCR）

RQ-PCR在普通PCR中加入與PCR產(chǎn)物結(jié)合的熒光探針或染料，可以在每一次循環(huán)中通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化達(dá)到定量檢測(cè)?？沙掷m(xù)性檢測(cè)白血病細(xì)胞的異常融合基因，突變基因等，動(dòng)態(tài)觀察患者體內(nèi)融合基因表達(dá)水平變化，靈敏度可達(dá)106。用此法檢測(cè)MRD比細(xì)胞遺傳學(xué)法早數(shù)月。也可避開(kāi)由于患者免疫表型改變?cè)斐杉訇幮?。但其成本較高，普及難度大。

3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR監(jiān)測(cè)MRD的臨床意義

高海濤等[4]持續(xù)監(jiān)測(cè)20位AML患者治療后的ETO融合基因表達(dá)水平，其中15位患者的表達(dá)水平直至觀測(cè)結(jié)束均<0.001%，13位患者持續(xù)陰性，均未復(fù)發(fā)；其余5位在檢測(cè)期間表達(dá)陽(yáng)性且持續(xù)升高，最終復(fù)發(fā)。但僅35%的AML患者有特異性的異?；颍拗屏怂膽?yīng)用。

4 展 望

MRD因其白血病細(xì)胞總數(shù)下降，用一般形態(tài)學(xué)方法難以檢出，成為AML復(fù)發(fā)的根源。用現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)MRD相關(guān)標(biāo)志物有助于監(jiān)測(cè)AML患者化療后完全緩解或造血干細(xì)胞移植的預(yù)后效果，提高生存率。MFC成本低，但LAIPs易變，檢出率不理想，而PCR與FISH雖不存在免疫表型改變等問(wèn)題，但其敏感性和特異性有待提高，且成本較大難以普及。綜上所述，目前檢測(cè)MRD的方法各有利弊，可個(gè)體化要求監(jiān)測(cè)，多種方法聯(lián)合從而實(shí)現(xiàn)急性白血病患者的預(yù)后效果和復(fù)發(fā)的早期診斷。

參考文獻(xiàn)

[1] Jie Jin，et al.Homoharringtonine-based induction regimens for patients with de-novo acute myeloid leukaemia：a multicentre，open-label，randomised，controlled phase 3 trial.Lancet Oncol，2013，14：599-608.

[2] 黃正剛，等.熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)PML/RARa融合基因在兒童APL微小殘留病中的應(yīng)用[J].實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2015，16（11）：65-68.

[3] 張 濟(jì)，等.應(yīng)用RT-PCR和熒光原位雜交監(jiān)測(cè)急性早幼粒細(xì)胞白血病微小殘留白血病[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2012，16（3）：423-425.

[4] 高海濤，等.微小殘留病監(jiān)測(cè)在急性髓系白血病中的預(yù)后意義[J].醫(yī)藥論壇雜志，2016，（8）：1-3.

本文編輯：王 琦