魏娜，于莉，尹茂山，徐建江

藥學(xué)

復(fù)方桑菊口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

魏娜，于莉，尹茂山，徐建江＊

目的建立復(fù)方桑菊口服液的質(zhì)量控制方法并考察其穩(wěn)定性，為臨床用藥提供理論指導(dǎo)。方法用高效液相色譜法測定綠原酸和連翹苷的含量，色譜柱為YMC－Pack ODS－AQL（250 mm×4.6 mm，5 μm）流動相為乙腈－水25∶75，柱溫為25℃，檢測波長為220 nm流速為1.0 ml/min采用留樣觀察法進(jìn)行初步穩(wěn)定性試驗。結(jié)果通過探索性試驗建立該藥的色譜測量方法。綠原酸、連翹苷分別在0.011～0.22，0.02～0.4 μg線性關(guān)系良好，平均回收率分別為99.7%和99.5%，RSD為1.6%，2.1%，n=6，比較該制劑放置6個月3批樣品與新樣品間的各項指標(biāo)均無明顯變化。結(jié)論所用測定方法簡單，準(zhǔn)確度高，藥物的質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可作為該復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考。

高效液相色譜；綠原酸；連翹苷；質(zhì)量控制；復(fù)方桑菊口服液

復(fù)方桑菊口服液處方是由桑葉、野菊花、連翹、甘草、桔梗、蘆根、苦杏仁、薄荷葉等組成。具有清熱解毒、辛涼解表、利咽消腫等作用，主要是用于病毒感染或者病毒混合感染的呼吸道感冒［1］。

筆者參照中國藥典2015年版中藥復(fù)方口服制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用薄層層析鑒定復(fù)方桑菊口服液，并用高效液相色譜法（HPLC）測定該復(fù)方制劑中連翹苷含量，為完善復(fù)方桑菊口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 材料與儀器

1.1 藥材及試藥復(fù)方桑菊口服液，桑葉、野菊花、連翹、苦杏仁、桔梗、甘草、蘆根和薄荷對照藥材，綠原酸、連翹苷、甘草酸對照品（購自上海麥克林生化試劑），乙腈為色譜純，水為純凈水，其余試劑為分析純。

1.2 主要儀器Agilent 1260型高效液相色譜儀（配有低壓四元泵、柱溫箱、自動進(jìn)樣器、DAD檢測器、ChemStations色譜工作站）；UVProbe-2450紫外可見分光光度儀（日本島津公司）；BP211D電子天平（德國賽多利斯公司）；PHSJ-4A酸度計（上海雷磁儀器廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定方法學(xué)建立

2.1.1 色譜條件色譜柱YMC-Pack ODS-AQL1（250 mm×4.6 mm，5 μm）流動相：乙腈-水（25∶75），流速：1.0 ml/min，柱溫：25℃，檢測波長：230 nm，進(jìn)樣量：20 μl。

2.1.2 對照品溶液的配制取連翹苷對照品約14.00mg，綠原酸對照品7.50mg，甲醇溶解，置100 ml棕色容量瓶中定容，得到含0.11 mg/ml的綠原酸和0.20 mg/ml連翹苷混合對照品儲備液。精密量取5.00ml溶液置100ml量瓶中，加甲醇定容，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾即得5.5 g/ml綠原酸和10 g/ml連翹苷的混合對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備取復(fù)方桑菊清熱口服液0.3 ml，過10%甲醇溶液活化的Sep-Peck18小柱，用2 ml 30%甲醇以1滴/s的速度推出淋洗液定容于5 ml量瓶中，搖勻經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過即得。

2.1.4 空白對照液的制備將處方中的桑葉、野菊花和連翹除去，根據(jù)制劑工藝的制備方法制備復(fù)方桑菊口服液陰性樣品溶液。準(zhǔn)確吸取溶液0.5 ml，然后按供試品制備方法制備空白對照液。

2.1.5 方法可行性考察準(zhǔn)確取對照品液和供試品液各20μl，進(jìn)樣，結(jié)果表明綠原酸、連翹苷理論塔板數(shù)>4000，對稱因子為0.98，信噪比>3.0。

2.1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確吸取混合對照品溶液2、4、6、8、10、20、40 μl，進(jìn)樣，結(jié)果表明綠原酸進(jìn)樣量在0.011-0.22 μg、連翹苷在0.02～0.4 μg具有良好的線性關(guān)系。綠原酸回歸方程為Y=6.211X103+98.70（相關(guān)系數(shù)0.9999，線性范圍0.011～0.22μg）；連翹苷回歸方程為Y=4.357X103+12.30（相關(guān)系數(shù)0.9999，線性范圍0.02～0.4μg）。

2.1.7 綠原酸與連翹苷加樣回收率測定精密吸取已知含量的復(fù)方桑菊清熱口服液樣品6 ml［3-7］，含0.059 mg/ml綠原酸和0.106 mg/ml連翹苷6份分別加入混合對照品儲備液4 ml，混合均勻再取0.3 ml，經(jīng)Sep-PackC18小柱處理，定容到5 ml按含量測定條件測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.1.8 精密度實驗分別吸對照品溶液20 μl，注入色譜儀，1日以內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣6回，測3日，記下色譜圖。結(jié)果表明綠原酸和連翹苷的日內(nèi)RSD分別是0.67%和0.45%（n=6），日間RSD分別是0.95%和0.68%（n=3），說明本方法精密度較高。

2.1.9 穩(wěn)定性試驗精密吸取供試品溶液20 μl，然后在室溫下于0、2、4、6、8、12、24 h分別注入高效液相色譜儀，測定并記錄峰面積。結(jié)果顯示，綠原酸和連翹苷的RSD分別是0.56%和0.19%（n=6），說明供試品穩(wěn)定性良好。

2.1.10 重復(fù)性試驗樣品制作3份供試品溶液，準(zhǔn)確吸取供試品溶液15 μl注入液相色譜儀，記錄峰面積。采用峰面積外標(biāo)法來算連翹苷和綠原酸含量，結(jié)果綠原酸與連翹苷的RSD分別為0.79%和0.48%，n=6，說明本試驗方法重復(fù)性較優(yōu)。

2.2 樣品含量測定取3批樣品，然后每批取6份樣，制備供試品溶液，測定樣品中綠原酸與連翹苷的含量，外標(biāo)法計算，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

2.3 影響試驗與加速試驗

2.3.1 影響因素試驗取樣品，分別在低溫（4℃）和高溫（60℃）條件下進(jìn)行實驗，于0、5、10 h時間點(diǎn)取樣測定各指標(biāo)，結(jié)果見表3。

表3 影響因素試驗

2.3.2 加速試驗把3批樣品放置在45℃下6個月，分別用1、2、3表示，其性狀、pH以及含量都沒有明顯變化，綠原酸為A，連翹苷為B。結(jié)果見表4。

2.4 薄層定性檢查結(jié)果樣品的相對密度1.12～1.50，pH6.0～8.0。檢查結(jié)果見圖1～3，分析結(jié)果見表5。

2.5 含量測定結(jié)果據(jù)查閱的相關(guān)資料和復(fù)方桑菊口服液的實驗結(jié)果［2-14］，本研究初步可定復(fù)方桑菊口服液中的綠原酸和連翹苷的含量標(biāo)準(zhǔn)為每1 ml含分別不低于0.06 mg和0.12 mg，目前測定的3個批次的復(fù)方桑菊口服液中的綠原酸和連翹苷中的含量都符合規(guī)定，測定結(jié)果見表6。

表4 加速試驗及長期試驗結(jié)果

圖1 桑葉

圖2 連翹

圖3 甘草

表5 相對密度、pH值測定結(jié)果

表6 樣品含量測定結(jié)果（n=3，%）

3 討論

復(fù)方桑菊口服液是傳統(tǒng)中成藥，該實驗采用薄層色譜法（TCL）進(jìn)行系統(tǒng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，建立科學(xué)高效的薄層色譜（HPLC）鑒別方法［15］。用高效液相色譜法（HPLC）對連翹苷和綠原酸含量進(jìn)行了含量測定，并開展線性關(guān)系分析、精密度、重復(fù)性以及穩(wěn)定性試驗等，這種方法簡便、結(jié)果穩(wěn)定、行之有效，對復(fù)方桑菊口服液進(jìn)行質(zhì)量控制；通過薄層色譜法（TCL）對桑菊感冒顆粒的系統(tǒng)研究發(fā)現(xiàn)，桑葉、連翹、甘草和薄荷的TLC所得檢測斑點(diǎn)顯色理想，與樣品相應(yīng)位置上的斑點(diǎn)顯色清晰，較大呈現(xiàn)圓斑狀，且陰性對照無斑點(diǎn)干擾，通過測定3個不同批號的復(fù)方桑菊口服液樣品，結(jié)果是每1 ml樣品中平均含綠原酸和連翹苷分別為0.045 mg和0.112 mg，RSD為0.45%和0.65%，結(jié)合桑葉、連翹、甘草的薄層色譜（HPLC）鑒別方法和連翹苷含量的高效液相色譜（HPLC）測量法，是一種高效，簡便，重復(fù)性好，精確度高的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，具有推廣性。

復(fù)方桑菊口服液作為一種新型的口服制劑，結(jié)合了傳統(tǒng)中藥理論和現(xiàn)代制劑工藝。在中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論的指導(dǎo)下，利用現(xiàn)代研究方法對復(fù)方桑菊處方中的君藥桑葉和野菊花進(jìn)行進(jìn)一步的系統(tǒng)研究，如新劑型的開發(fā)、藥效研究等，具有重要的社會價值和經(jīng)濟(jì)價值［16-18］。

中藥制劑的質(zhì)量控制是關(guān)乎其療效、安全性和穩(wěn)定性的關(guān)鍵問題，最終影響中醫(yī)藥的健康發(fā)展，到目前為止，我國乃至全世界中成藥的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的研究仍然停留在較低的水平。隨著高科技的引入，對于中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究得到了一定的發(fā)展，但是一味地依靠西醫(yī)、西藥等科技手段，不是解決建立科學(xué)有效的中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系最佳途徑，筆者所在課題組通過相關(guān)文獻(xiàn)的閱讀和相關(guān)實驗開展的所見所思，對更好建立中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系的思考體現(xiàn)為兩方面：一是中藥制劑質(zhì)量控制的前提是中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，結(jié)合大數(shù)據(jù)的不斷驗證。由于中成藥制劑是整個中醫(yī)文化的一部分，中成藥的根本依據(jù)是傳統(tǒng)的中醫(yī)理論，有必要加強(qiáng)中醫(yī)理論的研究、完善以及推廣。而中藥文化其本質(zhì)就是中華民族經(jīng)過幾千年的長期實踐的文化瑰寶，長期的實踐過程其實就是一個大數(shù)據(jù)的不斷驗證的過程，最終形成類似《神農(nóng)本草》《黃帝內(nèi)經(jīng)》《本草綱目》等優(yōu)秀典籍，現(xiàn)階段可借助大數(shù)據(jù)在中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系中得以應(yīng)用，將會得到更為科學(xué)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系［19］。二是合理利用現(xiàn)代技術(shù)。中藥由于其種類多，成分復(fù)雜，個體差異加大等，都為中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立帶來困難，隨著高科技的發(fā)展，一些先進(jìn)的檢測手段對于中成藥的研究就有明顯的促進(jìn)作用，如生物免疫技術(shù)、電子計算機(jī)技術(shù)以及中藥數(shù)字化圖譜指紋技術(shù)等，但一味地依賴這些手段將會喪失中醫(yī)文化的根本，不利于中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立［20］。

［1］吳曉慧.桑菊飲加減治療上呼吸道感染40例［J］.陜西中醫(yī)2009，30（4）：401-402.

［2］李元林，吳群，陳瑤.桑菊口服液抗菌活性成分研究［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2015，12（6）：38-39.

［3］彭凱麗，李新民，李元林，等.正交試驗優(yōu)選復(fù)方桑菊口服液中藥材的提取工藝［J］.中國藥房，2014，29（6）：50-51.

［4］侯飛燕，周全彩.復(fù)方桑菊口服液的質(zhì)量控制研究［J］.中南藥學(xué)，2014，25（5）：431-432.

［5］王志東，梁榮瑞.中藥野菊花的藥理作用研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2009，15（6）：906-909.

［6］張振亞，方學(xué)平.野菊花提取物抑制呼吸道合胞病毒作用的體外實驗研究［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2006，22（4）：245-247.

［7］蔡蓁蓁.中成藥的傳統(tǒng)劑型與新劑型［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2014（1）：46-50.

［8］鄭璐璐，張貴君.野菊花藥效組成抗炎的生物效應(yīng)研究［J］.天津中醫(yī)藥，2011，1（1）：70.

［9］吳石磊.桑葉中東莨菪素提取分離，含量分析及體外抗菌活性研究［D］.重慶：西南大學(xué)，2009.

［10］姜麗霞.HPLC法測定野菊花中綠原酸的含量［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，4（6）：54-56.

［11］尉芹，馬希漢.綠原酸及其提取分離方法評述［J］.中成藥，2001，23（2）：135-137.

［12］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：279.

［13］彭凱麗.復(fù)方桑菊口服液的制備工藝及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［D］.衡陽：南華大學(xué)，2014.

［14］李元林，吳群，彭凱麗，等.RP-HPLC法對復(fù)方桑菊口服液中的綠原酸蒙、花苷、連翹苷的含量測定［J］.湖南師范大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2013，10（3）：90-93.

［15］孫蓮，胡爾西單.薄層-紫外分光光度法測定桑葉中的綠原酸［J］.時珍國醫(yī)國藥，2006，17（7）：1199-1201.

［16］沈梅芳，李小萌，單琪媛.薄荷化學(xué)成分與藥理作用研究新進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30（7）：1484-1487.

［17］李海英，文毅.桑菊感冒片標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.遼寧中醫(yī)藥雜志，2005，32（8）：829-830.

［18］林麗美，許招懂，姚江雄，等.夏桑菊口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中成藥，2012，34（8）：1500-1505.

［19］王榮到，蘇鵬，李哲.淺談杏仁和苦杏仁的藥理作用及臨床應(yīng)用［J］.基層中藥雜志，2009，45（9）：45-49.

［20］王春芳，張衛(wèi)兵.HPLC測定抗病毒口服液中連翹苷的含量［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2004，5（3）：44-46.

［2016－11－15收稿，2016－12－12修回］［本文編輯：劉一洋］

Study on the quality standard of Compound Sangjü oral liquid

WEI Na，YU Li.Dept.of Pharmacy，the General Hospital of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

ObjectiveTo establish a quality control method Compound Sangjü oral liquid and inspect its stability，so as to provide the basis for clinical use.It was important to analyze the content of Sangju oral liquid. MethodsA HPLC was used to determination the content of chlorogenic and phillyrin.The YMC-Pack ODS-AQL column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used，the mobile phase was acetonitribe-water（75∶25），the temperature was 25℃，and the detection wavelength was 220 nm，the flow rate was 1.0 ml/min.Storage observation method was used to determine its stability.ResultsThe linear ranges of chlogenic acid and phillyrin were 0.011-0.22 and 0.02-0.4 μg，The average recoveries of chlorogenic acid and phillyrin were 99.7%and 99.5%respectively.Comparing the preparation placed for 6 months，it was found the 3 samples had all no obvious change.ConclusionThe abovementioned method is simple，reliable，and can be used as a reference for the quality standard.The preparation is stable during the inspected time.

High performance liquid chromatography；Quality control；Chlogenic acid；Phillyrin；Compound Sangjü oral liquid

R927.1

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.06.025

250031山東濟(jì)南，原濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科（魏娜，于莉，徐建江）；山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物所（尹茂山）

徐建江，Email：xjj8605@163.com