李金昌，余麗莉，吳鈞，嚴(yán)楓

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇省惡性腫瘤分子生物學(xué)及轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 南京 210009)

·臨床實(shí)驗(yàn)研究·

圍手術(shù)期食管鱗狀細(xì)胞癌患者血清UHRF1水平變化*

李金昌，余麗莉，吳鈞，嚴(yán)楓

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇省惡性腫瘤分子生物學(xué)及轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 南京 210009)

目的 檢測(cè)食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)患者血清泛素樣含PHD和環(huán)指域1(UHRF1)水平，分析其在不同臨床病理參數(shù)亞組間的差異以及圍手術(shù)期的變化。方法 收集130例ESCC患者術(shù)前血清，另收集其中62例患者的術(shù)后1周血清以及14例患者術(shù)后1周和2周血清，以67例體檢健康者作為對(duì)照組。同時(shí)收集患者臨床病理資料。用ELISA法檢測(cè)血清UHRF1含量，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、配對(duì)t檢驗(yàn)及單因素方差分析比較不同組間水平差異。結(jié)果 130例ESCC患者術(shù)前血清UHRF1含量明顯高于健康人對(duì)照組(t=7.680,P<0.01)；在不同年齡、性別、腫瘤部位和大體分型間UHRF1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),不同腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、pTNM分期間血清UHRF1水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。62例患者術(shù)后UHRF1水平較術(shù)前明顯降低(t=5.530,P<0.01)，且與健康人對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.622,P>0.05)；14例患者術(shù)前、術(shù)后1周、術(shù)后2周血清UHRF1水平逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.595,P<0.01)。結(jié)論 血清UHRF1可作為圍手術(shù)期動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的潛在指標(biāo)。

食管鱗狀細(xì)胞癌；泛素樣含PHD和環(huán)指域1；動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)

泛素樣含PHD和環(huán)指域1(ubiquitin-like with PHD and ringfinger domains 1，UHRF1)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種與DNA甲基化有關(guān)的表觀遺傳學(xué)修飾相關(guān)蛋白質(zhì)[1]，在乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌、子宮頸癌等多種腫瘤組織中高表達(dá)[2-5]。研究表明，在食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)組織中UHRF1高表達(dá)[6-8]，但在ESCC圍手術(shù)期血清UHRF1蛋白質(zhì)水平定量檢測(cè)目前尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)ELISA法定量檢測(cè)ESCC患者手術(shù)前后血清UHRF1水平，探究其判斷手術(shù)效果和圍手術(shù)期動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的價(jià)值，并分析其在不同臨床病理參數(shù)亞組間的差異。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象與一般資料 收集2015年6月至2016年12月南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胸外科初診收治入院進(jìn)行根治手術(shù)的ESCC患者130例(男102例，女28例)，中位年齡64歲(四分位間距49～67歲)。均經(jīng)病理組織學(xué)確診為ESCC。按分化程度進(jìn)行分組：≥中分化組包括高級(jí)別上皮內(nèi)瘤5例、高-中分化19例和中分化58例；<中分化組包括中-低分化31例和低分化17例。除手術(shù)外，患者未接受放、化療或其他抗腫瘤治療。收集同時(shí)期67例體檢健康者作為對(duì)照組(男20例，女47例)，中位年齡60歲(四分位間距55～63歲)。通過(guò)我院病案室電子病歷系統(tǒng)和病理科數(shù)據(jù)庫(kù)查詢ESCC患者臨床病理資料，腫瘤部位分段、浸潤(rùn)深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和pTNM分期參照美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)2016年發(fā)布的第8版標(biāo)準(zhǔn)[9]；大體分型依據(jù)《食管癌規(guī)范化診治指南》[10]。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)和研究對(duì)象知情同意。

1.2 標(biāo)本采集 分別采集患者和健康人對(duì)照組清晨空腹外周靜脈血5 mL，4 000 r/min離心5 min，分離血清，置-80 ℃保存?；颊叩牟裳獣r(shí)間點(diǎn)如下：130例ESCC患者術(shù)前，其中62例術(shù)前+術(shù)后1周、14例術(shù)前+術(shù)后1周+術(shù)后2周。

1.3 主要儀器與試劑 多功能酶聯(lián)儀SpectraMax M2(美國(guó)美谷分子儀器公司)，低速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)，快速自動(dòng)高壓滅菌儀SX-700(日本TOMY公司)，恒溫水槽(上海精密儀器公司)，血清UHRF1檢測(cè)ELISA試劑盒(廈門(mén)慧嘉公司)。

1.4 血清UHRF1檢測(cè) 用ELISA法，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，用酶聯(lián)儀在450 nm波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度(A)值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算UHRF1濃度。

2 結(jié)果

2.1 ESCC患者術(shù)前血清UHRF1水平及不同臨床病理參數(shù)亞組間的比較 130例ESCC患者術(shù)前組血清UHRF1水平為(298.01±138.46) ng/L，明顯高于67例健康人對(duì)照組(165.12±40.83) ng/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.680，P<0.01)。對(duì)130例ESCC患者術(shù)前血清UHRF1水平在各臨床病理參數(shù)亞組間差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示，不同年齡、性別、腫瘤部位、大體分型患者間術(shù)前UHRF1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，不同腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和pTNM分期患者間術(shù)前UHRF1水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，腫瘤較大、分化程度較差、浸潤(rùn)深度較深以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分期和pTNM分期較晚者術(shù)前UHRF1水平較高。見(jiàn)表1。

表1 ESCC患者不同臨床病理參數(shù)亞組間術(shù)前血清UHRF1水平比較

臨床病理參數(shù)n濃度(ng/L)檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量aP值年齡(歲)0．0280．978 <6464297．75±144．04 ≥6466298．44±133．94性別0．4160．678 女28288．42±112．15 男102300．76±145．23腫瘤部位0．7050．496 胸上段18325．52±144．61 胸中段77300．50±148．95 胸下段35278．71±109．08大體分型0．4720．853 斑塊型鱗癌11330．43±160．29 乳頭型鱗癌4331．82±65．29 糜爛型鱗癌10351．68±188．91 潰瘍型鱗癌65294．44±145．12 髓質(zhì)型鱗癌25272．84±111．18 縮窄型鱗癌5287．34±132．16 蕈傘型鱗癌5301．95±129．99 其他b5273．54±93．68腫瘤大小(cm)2．1470．034 <472274．38±119．08 ≥458327．54±155．35分化程度2．3660．019 ≥中分化82276．50±123．75 <中分化48335．00±155．00浸潤(rùn)深度/T分期2．6640．009 Tis/T1/T264266．13±114．08 T366329．10±153．14淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移/N分期7．8840．000 N071261．39±102．84 N138310．85±153．42 N215361．42±143．09 N36493．41±192．12pTNM分期6．1370．003 Ⅰ期24263．21±101．46 Ⅱ期53264．54±109．99 Ⅲ期+Ⅳ期53347．45±163．46

注：a,兩組均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(統(tǒng)計(jì)量為t)，3組及以上均數(shù)比較采用單因素方差分析(統(tǒng)計(jì)量為F)；b，包括5例高級(jí)別上皮內(nèi)瘤。

2.2 ESCC患者手術(shù)前后血清UHRF1水平變化 62例ESCC患者血清UHRF1水平術(shù)后較術(shù)前明顯降低，分別為(188.01±107.27) ng/L和(309.33±135.42) ng/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.530,P<0.01)。同時(shí)，術(shù)后血清UHRF1水平與健康人對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.622,P>0.05)。14例ESCC患者連續(xù)檢測(cè)其術(shù)前、術(shù)后1周和術(shù)后2周血清UHRF1濃度，分別為(313.27±117.24) ng/L、(227.20±127.68) ng/L和(152.89±74.68) ng/L，呈依次降低趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.595,P<0.01)。見(jiàn)圖1。

圖1 ESCC患者手術(shù)前后血清UHRF1水平變化

3 討論

UHRF1可能參與表觀遺傳學(xué)調(diào)控，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[11-12]，通過(guò)招募DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT1至半甲基化的DNA上來(lái)維持DNA甲基化[1]。DNA甲基化與年齡存在一定相關(guān)性，但在不同疾病、樣本等研究的結(jié)論并不一致[13]，有報(bào)道UHRF1在結(jié)直腸癌[3]、胃癌[4]、食管癌[6,8]等組織表達(dá)水平與患者年齡、性別無(wú)關(guān)。本研究結(jié)果顯示：術(shù)前血清UHRF1水平在不同年齡和性別的ESCC患者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能因?yàn)槿梭w衰老和體內(nèi)甲基化水平變化是一個(gè)復(fù)雜的多方面作用的生物過(guò)程，單一的UHRF1對(duì)DNA甲基化并未產(chǎn)生直接影響。此外，發(fā)現(xiàn)血清UHRF1水平在不同腫瘤部位、大體分型組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和pTNM分期之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；血清UHRF1升高的患者，腫瘤體積較大、分化較差、侵襲較深；術(shù)前血清UHRF1水平顯著高于健康人對(duì)照組(P<0.01)，研究結(jié)果與組織中UHRF1檢測(cè)的報(bào)道相似[6-8]。ESCC患者行食管癌根治手術(shù)1周后血清UHRF1水平較之術(shù)前明顯降低(P<0.01)，且趨于健康人水平，提示可作為判斷手術(shù)效果的指標(biāo)；連續(xù)監(jiān)測(cè)其術(shù)前、術(shù)后1周和術(shù)后2周血清UHRF1水平變化，呈依次下降趨勢(shì)。因此，可根據(jù)血清UHRF1水平變化評(píng)估患者病情進(jìn)展，檢測(cè)血清UHRF1水平可用于ESCC圍手術(shù)期監(jiān)測(cè)。本研究尚存在標(biāo)本量偏少問(wèn)題，缺少良性疾病對(duì)照組結(jié)果的支持，血清UHRF1對(duì)ESCC的診斷價(jià)值有待證實(shí)，后續(xù)工作中將增加樣本量，補(bǔ)充更長(zhǎng)時(shí)間段和更多時(shí)間點(diǎn)的檢測(cè)，進(jìn)一步深入研究。

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(本文編輯：劉群)

Changes of serum UHRF1 levels in perioperative patients with esophageal squamous cell carcinoma

LIJin-chang,YULi-li,WUJun,YANFeng

(DepartmentofLaboratoryMedicine,CancerHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,JiangsuKeyLaboratoryofMolecularandTranslationalCancerResearch,Nanjing210009,Jiangsu,China)

Objective To detect serum ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1 (UHRF1) levels in the patients with esophageal squamous cell carcinoma (ESCC), and analyze their differences among different clinicopathological features subgroups and changes during the perioperative period. Methods Serum samples from 130 preoperative ESCC patients, 62 patients 1 week after operation, 14 patients 1 week and 2 weeks after operation and 67 healthy controls, and clinicopathological data from ESCC patients were collected. Serum UHRF1 levels were detected by ELISA, and the differences among different groups were analyzed with independent t test, paired t test or one-way ANOVA. Results Serum UHRF1 levels in 130 preoperative ESCC patients were significantly higher than that in healthy controls (t=7.680,P<0.01), and they were related to the ESCC patients′ tumor size, differentiation degree, tumor invasion, lymph nodes metastasis and pTNM stage (P<0.05), but unrelated to the patients′ age, gender, tumor location and types (P>0.05). Serum UHRF1 levels in 62 postoperative patients were significantly lower than that before operation (t=5.530,P<0.01), but similar to that in healthy controls (t=1.622,P>0.05). The serum UHRF1 levels before operation, 1 week after operation and 2 weeks after operation in 14 ESCC patients decreased gradually (F=7.595,P<0.01). Conclusion Serum UHRF1 levels may be a potential biomarker for dynamically monitoring perioperative ESCC patients.

esophageal squamous cell carcinoma; ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1; dynamic monitoring

10.13602/j.cnki.jcls.2017.05.05

國(guó)家自然科學(xué)基金(21475063)；江蘇省醫(yī)學(xué)領(lǐng)軍人才與創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)基金(LJ201617)。

李金昌，1990年生，男，碩士研究生，主要從事腫瘤分子診斷和腫瘤標(biāo)志物研究。

嚴(yán)楓，研究員，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail:yanfeng1895@163.com。

R730.4

A

2017-03-17)