趙娟，劉寧，郭婧婧，陳偉，鐘一鳴，劉文恩

(中南大學湘雅醫(yī)院檢驗科，長沙 410008)

·臨床實驗研究·

7種腫瘤相關抗原自身抗體檢測在肺癌診斷中的意義*

趙娟，劉寧，郭婧婧，陳偉，鐘一鳴，劉文恩

(中南大學湘雅醫(yī)院檢驗科，長沙 410008)

目的 探討7種腫瘤相關抗原自身抗體(p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE抗體)在初診肺癌患者中的臨床診斷價值。方法 收集我院108例初診肺癌患者、96例體檢健康者、120例肺部良性疾病患者和227例其他癌癥患者。ELISA法檢測各組血清中7種自身抗體的水平，繪制ROC曲線分析其對肺癌的診斷效能，并比較7種自身抗體聯(lián)合檢測在不同臨床病理特征肺癌患者間和各受試組間的陽性率。結果 肺癌組7種自身抗體水平均高于健康人對照組、肺部良性疾病組和其他癌癥組，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。7種自身抗體聯(lián)合檢測診斷初診肺癌患者敏感性為62.00%，特異性為89.80%，AUCROC為0.769，其敏感性和AUCROC均高于各自身抗體單項檢測。7種自身抗體聯(lián)合檢測在肺癌組的陽性率明顯高于健康人對照組(χ2=50.885，P<0.01)、肺部良性疾病組(χ2=56.341，P<0.01)以及其他癌癥組(χ2=46.812，P<0.01)。結論 7種腫瘤相關抗原自身抗體聯(lián)合檢測可作為潛在的肺癌輔助診斷指標。

自身抗體；肺癌；診斷價值

抗原性腫瘤標志物雖對肺癌有一定的診斷價值，但其主要用于療效監(jiān)測，對早期診斷意義不大[1]。腫瘤相關抗原(tumor-associated antigen, TAA)自身抗體在肺癌早期診斷中有良好的診斷效能[2-3]。目前已證實多種TAA與肺癌相關，其相應的自身抗體可用于肺癌的臨床診斷[4]。有學者篩選出14種TAA自身抗體組合用于肺癌診斷，但其成本較高，臨床應用價值不大[5]。本研究依據(jù)孫蘇彭等[5]的專利，進一步評估p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1 和CAGE 7種TAA自身抗體聯(lián)合檢測在初診肺癌患者診斷中的臨床應用價值。報道如下。

1 材料和方法

1.1 研究對象 收集我院2016年9-11月就診的初診肺癌患者108例，男85例，女23例，年齡32～78歲，中位年齡59歲。肺癌診斷依據(jù)中國臨床腫瘤學會(CSCO)《原發(fā)性肺癌診療指南 2016.V1》。納入標準：(1)患者初診，此前未接受放化療或手術治療；(2)由纖支鏡、經(jīng)皮穿刺、淋巴結或淺表腫物活檢和體腔積液細胞學檢查等病理學檢驗確診；(3)遠處轉(zhuǎn)移及分期經(jīng)病理活檢、CT或MRI評價；(4)未并發(fā)其他腫瘤且病史資料完整。同時具備以上4條者即可納入肺癌組。排除標準：對接受過放化療或手術治療肺癌患者，或同時患有嚴重的肝腎功能不全、糖尿病、感染、其他類型腫瘤、分期不明確、非肺癌初診患者予以排除。按病理組織學分期：肺腺癌 59例，肺鱗癌35例，小細胞肺癌9例，其他類型肺癌5例(大細胞肺癌2例，粘液表皮樣癌2例和腺鱗癌1例)；按TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期6例，Ⅲ期40例，Ⅳ期46例。收集同期就診的體檢健康者96例，男75例，女21例，年齡30～78歲，中位年齡58歲；肺部良性疾病患者120例，男78例，女42例，年齡16～88歲，中位年齡55歲，包括肺結核53例，肺炎42例，慢性阻塞性肺疾病(COPD)25例；其他癌癥患者227例，男114例，女111例，年齡18～85歲，中位年齡54歲，包括肝癌[6]73例，乳腺癌[7]71例，結直腸癌[8]83例，此前均未接受任何放化療等相關臨床治療且無肺部轉(zhuǎn)移。本研究獲本院醫(yī)學倫理學委員會批準，研究對象知情同意。

1.2 標本收集與處理 所有研究對象均在入院時(體檢健康者于體檢時)清晨空腹采集靜脈血10 mL，3 500 r/min離心5 min，分離血清，8 h內(nèi)完成檢測，不能及時檢測的標本置-20 ℃保存。

1.3 主要試劑和儀器 7種自身抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)及其配套試劑盒購自杭州凱保羅公司；Synergy 2型酶聯(lián)儀(BioTek公司)。

1.4 ELISA檢測7種TAA自身抗體 嚴格按照試劑盒說明書操作，酶聯(lián)儀讀取450 nm處吸光度(A450 nm)值，各自身抗體試劑盒參考范圍(U/mL)分別為：p53<13.1、PGP9.5<11.1、SOX2<10.3、GAGE7<14.4、GBU4-5<7.0、MAGE<11.9、CAGE<7.2。

1.5 統(tǒng)計學分析 用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行?？贵w水平經(jīng)正態(tài)性檢驗為偏態(tài)分布，用中位數(shù)(四分位數(shù))[M(P25,P75)]表示，多組間比較采用 Kruskal-WallisH檢驗，兩組間比較采用非參數(shù)Mann-WhitneyU檢驗；自身抗體單項、聯(lián)合檢測診斷效能通過繪制ROC曲線分析；計數(shù)資料以卡方檢驗比較組間差異。以P<0.05表示有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組血清自身抗體檢測水平 肺癌組患者血清p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1 和CAGE水平均高于健康人對照組、肺部良性疾病組和其他癌癥組，差異有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。而健康人對照組、肺部良性疾病組和其他癌癥組間7種自身抗體水平差異比較均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1 肺癌組和其他受試組血清中各自身抗體檢測水平比較[ M(P25，P75)]

注：與肺癌組相比，*，P<0.05；#，P<0.01。

2.2 自身抗體單項和7種自身抗體聯(lián)合檢測對肺癌患者診斷能評價 以肺癌患者作為疾病組，非肺癌患者(健康人對照組、肺部良性疾病組和其他癌癥組)作為對照組，繪制ROC曲線分析7種自身抗體單項檢測以及聯(lián)合檢測(一個指標為陽性即判結果為陽性)對初診肺癌患者的診斷效能。ROC曲線見圖1。結果顯示，7種自身抗體聯(lián)合檢測的敏感性(62.00%)和ROC曲線下面積AUCROC(0.769)均高于各自身抗體單項檢測。見表2。

圖1 自身抗體單項檢測和聯(lián)合檢測診斷肺癌的ROC曲線

表2 各自身抗體單項檢測與7種自身抗體聯(lián)合檢測診斷效能

2.3 7種自身抗體聯(lián)合檢測在不同臨床病理特征肺癌患者中的陽性率比較 7種自身抗體聯(lián)合檢測在肺癌患者不同年齡段、不同性別、不同病理類型和不同臨床分期中的陽性率差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表3。

表3 不同臨床病理特征肺癌患者7種自身抗體聯(lián)合檢測的陽性率比較

參數(shù)總例數(shù)陽性例數(shù)(%)χ2P年齡(歲) <605333(62．26)0．0580．809 ≥605533(60．00)性別 男8553(62．35)0．2590．611 女2313(56．52)吸煙 有6340(63．49)0．3610．548 無4526(57．78)組織學分型? 小細胞肺癌95(55．56) 腺癌5933(55．93)0．9250．630 鱗癌3523(65．71)TNM分期 Ⅰ～Ⅱ期2213(59．09) Ⅱ～Ⅲ期4024(60．00)0．1310．937 Ⅳ期4629(63．04)

注：*，其他病理類型肺癌由于例數(shù)過少且分型不一致，未納入統(tǒng)計。

2.4 7種自身抗體聯(lián)合檢測的陽性率比較 7種自身抗體聯(lián)合檢測在肺癌組的陽性率[61.11%(66/108)]明顯高于健康人對照組[12.50%(12/96)]、肺部良性肺部疾病組[14.16%(16/120)]和其他癌癥組[22.91%(52/227)]，差異均有統(tǒng)計學意義(χ2分別為50.885、56.341和46.812，P均<0.01)。肺部良性疾病組陽性率與健康人對照組間差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.033，P=0.896)。其他癌癥組陽性率明顯高于健康人對照組(χ2=4.600，P=0.032)和肺部良性疾病組(χ2=4.567，P=0.033)。

3 討論

本研究結果顯示，肺癌患者血清7種自身抗體水平均明顯高于健康人對照組、肺部良性疾病組和其他癌癥組，這與Chapman等[9]的研究結果較為一致，表明各自身抗體在非肺癌人群血清中含量較低，能很好地區(qū)分肺癌患者和非肺癌人群。此外，其他癌癥組7種自身抗體水平較健康人對照組和肺部良性疾病組均升高。這與7種自身抗體聯(lián)合檢測在肺癌組陽性率最高，且其他癌癥組陽性率高于肺部良性疾病組和健康人對照組的結果一致。提示所選用的自身抗體可能在其他癌癥患者體內(nèi)也存在。如p53抗體的產(chǎn)生與多種癌癥的發(fā)生密切相關[10]，SOX2抗體可見于肝癌[11]，PGP9.5抗體可見于結直腸癌[12]，MAGE-A被證實與肺癌高度相關[13]。

在自身抗體單項檢測中,各自身抗體敏感性低，診斷效能不佳。7種自身抗體聯(lián)合檢測特異性(89.80%)雖有所下降，但敏感性(62.00%)和AUCROC(0.769)明顯升高，提示7種自身抗體聯(lián)合檢測可有效提高診斷效能。Wang等[4]采用5種自身抗體聯(lián)合檢測肺癌的診斷效能較本研究結果明顯偏低。而Dai等[14]報道的7種自身抗體聯(lián)合檢測的診斷效能優(yōu)于本研究。原因可能與所選抗體譜不同、研究對象存在地域和人群差異、檢測方法不相同等因素有關。

將肺癌患者按不同臨床特征進行分組分層，計算7種自身抗體聯(lián)合檢測在肺癌患者不同年齡段、不同性別、不同病理類型和不同臨床分期中的陽性率均無明顯區(qū)別(P均<0.05)，提示自身抗體總體在不同分組間分布較均勻，Chapman等[9]也得出了相同結論。特別是不同分期肺癌患者間陽性率差異無統(tǒng)計學意義，說明自身抗體在肺癌早期甚至臨床癥狀出現(xiàn)前即可升高而被檢測到，這可能與免疫應答強大的生物信號放大作用有關。因此，考慮將自身抗體聯(lián)合檢測作為肺癌早期篩查和診斷的指標，能彌補傳統(tǒng)腫瘤標志物對早期肺癌敏感性過低的缺點[15]。但本研究中小細胞肺癌、其他病理類型肺癌和Ⅰ～Ⅱ期肺癌患者樣本量偏少，后續(xù)研究可延長標本收集時間以增大樣本量。

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(本文編輯：許曉蒙)

Clinical significance of seven autoantibodies determination in the diagnosis of lung cancer

ZHAOJuan,LIUNing,GUOJing-jing,CHENWei,ZHONGYi-ming,LIUWen-en

(DepartmentofClinicalLaboratory,XiangyaHospital,CentralSouthUniversity,Changsha410008,Hunan,China)

Objective To investigate the diagnostic value of seven tumour-associated autoantibodies, including p53, PGP9.5, SOX2, GAGE7, GBU4-5, MAGE A1 and CAGE autoantibodies, in the newly diagnosed patients with lung cancer. Methods A total of 108 patients with newly diagnosed lung cancer, 120 with benign lung diseases, 227 with other cancers and 96 healthy controls were enrolled in the study. Their serum levels of seven autoantibodies were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The ROC curve was drawn and used to analyze their diagnostic efficiency for lung cancer. The diagnostic value of the combination of seven autoantibodies in different groups was also compared. Results The serum levels of seven autoantibodies in lung cancer patients were significantly higher than those in the patients with benign lung diseases or other cancers and healthy controls (P<0.05). The sensitivity, specificity and AUCROCof the combination of seven autoantibodies in the preliminary diagnosis of lung cancer were 62.00%, 89.80% and 0.769, respectively, and its sensitivity and AUCROCwere higher than those of single autoantibody. The positive rate of the combination of seven autoantibodies in lung cancer patients was significantly higher than those in healthy controls (χ2=50.885,P<0.01) and the patients with benign lung diseases (χ2=56.341,P<0.01) or other cancers (χ2=46.812,P<0.01). Conclusion The combination detection of seven autoantibodies, including p53, PGP9.5, SOX2, GAGE7, GBU4-5, MAGE A1 and CAGE, may serve as potential markers for the diagnosis of lung cancer.

autoantibody; lung cancer; diagnostic value

10.13602/j.cnki.jcls.2017.05.02

國家自然科學基金(81672066)。

趙娟，1991年生，女，碩士研究生，主要從事實驗方法評價與微生物學研究。

劉文恩，教授，博士，博士研究生導師，E-mail:Wenenliu@163.com。

R734.2

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2017-03-22)