溫周瑞

摘要：綜述了小龍蝦白斑綜合征在中國的流行情況、研究進展，包括在小龍蝦白斑綜合征流行病學、病理學、檢測技術及免疫預防等方面的研究工作，提出了綜合防控對策。

關鍵詞：小龍蝦（Procambarus clarkia）；白斑綜合征；進展；對策

中圖分類號：S945 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）09-1601-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.09.001

Research Progress and Control Countermeasures of White Spot Syndrome of Procambarus clarkii in China

WEN Zhou-rui

（Hubei Fisheries Research Institute，Wuhan 430071， China）

Abstract： This paper reviewed the epidemic situation and research progress of white spot syndrome of Procambarus clarkii in China， including the epidemiology， pathology， detection technique and immunoprophylaxis of white spot syndrome， and put forward the comprehensive prevention and control measures.

Key words： Procambarus clarkia； white spot syndrome； advance； strategies

近年來，中國小龍蝦（即克氏原螯蝦，Procambarus clarkii）的人工養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展很快，2014年全國養(yǎng)殖產(chǎn)量達到66萬t，湖北省養(yǎng)殖產(chǎn)量39.3萬t，約占全國小龍蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量的60%[1]。2015年湖北省稻田養(yǎng)蝦面積18.65萬hm2，池塘養(yǎng)殖面積6.79萬hm2，各類水體養(yǎng)殖小龍蝦總面積超過26.67萬hm2，小龍蝦產(chǎn)量43.3萬t，同比增加10.2%；湖北省小龍蝦養(yǎng)殖、加工、流通、餐飲綜合產(chǎn)值603.1億元，同比增幅達23.79%。

隨著小龍蝦養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，養(yǎng)殖規(guī)模迅猛擴大，苗種與產(chǎn)品流通空間拓展，養(yǎng)殖過程中小龍蝦疾病的危害日益嚴重，特別是白斑綜合征時有發(fā)生，造成較大的經(jīng)濟損失，嚴重威脅著小龍蝦養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展。本文旨在對當前中國小龍蝦白斑綜合征的發(fā)生流行情況及其研究進展進行全面分析，并對防治措施進行探討。

1 白斑綜合征概述

白斑綜合征（White spot disease，WSD）俗稱白斑病，是由白斑綜合征病毒（White spot syndrome virus，WSSV）引起的嚴重傳染性疾病，20世紀90年代以來一直嚴重威脅著全世界對蝦的養(yǎng)殖安全。白斑綜合征病毒屬線頭病毒科（Nimaviridae）白斑病毒屬（Whispovirus）[2]。白斑綜合征的特點是發(fā)病急、死亡率高，死亡速度快。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）、亞太地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展網(wǎng)絡中心（NACA）將其列為強制通報的疫病[3]。2008年被農(nóng)業(yè)部定為一類疫病。

2 小龍蝦白斑綜合征在中國的流行情況

小龍蝦在中國的人工養(yǎng)殖歷史不長，養(yǎng)殖初期由于集約化程度不高等原因幾乎未見發(fā)病，最近幾年小龍蝦的疾病逐漸增多，小龍蝦白斑綜合征在部分省份開始流行。最早于2006年5月在浙江省舟山市發(fā)生[4]，2007年5月江蘇省首次在省內(nèi)發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖小龍蝦發(fā)生白斑綜合征[5，6]，2008年江蘇省白斑綜合征發(fā)病面積近6 667 hm2，占整個養(yǎng)殖面積的20%[7]。2008年5月中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所、中國科學院武漢病毒研究所在湖北檢測到白斑綜合征病毒[8]。2009年5月安徽省某養(yǎng)殖場發(fā)現(xiàn)[9]。現(xiàn)在已成為威脅小龍蝦產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的一種主要病害。

3 小龍蝦白斑綜合征的研究進展

中國學者開展小龍蝦白斑綜合征的研究始于20世紀90年代，魏靜等[10]用小龍蝦作為動物模型培養(yǎng)增殖白斑綜合征病毒（WSSV）。隨后關于WSSV在小龍蝦中的研究主要集中在利用WSSV在小龍蝦體內(nèi)增殖和感染的特性，研究將其用于對蝦病毒增殖、藥物篩選和免疫反應等方面的實驗動物模型等[11]。最近關于小龍蝦白斑綜合征的研究較多，主要集中在以下幾個方面。

3.1 流行病學的研究

3.1.1 病原的確定 王忠發(fā)等[4]對浙江省舟山市一口小龍蝦養(yǎng)殖池的發(fā)病小龍蝦進行實驗室病原學檢測與病原回歸健康小龍蝦，證實引起蝦病暴發(fā)的病原體為對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）。丁正峰等[6]對揚州邵伯湖、淮安白馬湖、南京祿口、盱眙等地的發(fā)病小龍蝦采集了100余只樣品，從患病小龍蝦體內(nèi)檢測出大量WSSV，并證明該病毒即為引起小龍蝦病害的病原。2008年長江水產(chǎn)研究所魚病研究室首次在湖北荊州養(yǎng)殖小龍蝦中檢出對蝦白斑綜合征病毒。張叔勇等[8]在湖北省境內(nèi)的養(yǎng)殖小龍蝦的樣品中也分離到WSSV。陳昌福等[12]證明患病小龍蝦組織中存在致病性病毒和細菌。潘子豪等[9]證實安徽某地養(yǎng)殖的小龍蝦近年暴發(fā)的疫病病原為WSSV。洪徐鵬[13]對取自南京市農(nóng)貿(mào)市場，產(chǎn)地分別為南京市六合區(qū)的養(yǎng)殖池塘、江蘇高淳縣的石臼湖和固城湖、江蘇丹陽市的長江水域以及江西鄱陽湖的小龍蝦樣本（平均體重20 g），經(jīng)過PCR檢測后發(fā)現(xiàn)，江西鄱陽湖、江蘇高淳縣的石臼湖和固城湖的小龍蝦不攜帶WSSV，其余各采樣組均不同程度攜帶WSSV。

3.1.2 發(fā)病癥狀 小龍蝦白斑綜合征的癥狀主要有以下幾點：①病蝦活力低下，附肢無力，無法支撐身體，應激能力較弱，大多分布于池塘邊；②病蝦體色較健康蝦灰暗，無光澤，部分蝦頭胸甲處有黃白色斑點；③蝦體解剖后可見頭胸甲內(nèi)側(cè)有一層薄膜，疑是蛻殼困難；胃腸道空而無食或充滿水，部分病蝦有黑腮癥狀；④部分蝦尾部肌肉發(fā)紅或者呈現(xiàn)白濁樣；⑤ 死亡過程是先死大規(guī)格蝦，再死中規(guī)格蝦，最后小規(guī)格蝦也陸續(xù)死亡；⑥解剖后可見患病蝦肝胰臟腫大，其顏色較正常蝦深，部分患病蝦的肝胰臟有壞死現(xiàn)象，腸道的顏色有明顯分節(jié)的現(xiàn)象；⑦血淋巴不易凝固，頭胸甲易剝離。死亡率為30%～50%[6，12，14]。

3.1.3 流行季節(jié) 小龍蝦白斑綜合征發(fā)病季節(jié)一般在3月底至7月。江蘇省2008年監(jiān)測到的最早發(fā)病塘口為4月16日，較2007年提前近一個月[5]。朱建中等[11]研究表明，接種WSSV的螯蝦，22～25 ℃時，一般于2～7 d 內(nèi)死亡；30～32 ℃時，平均死亡時間2～6 d；15～19 ℃時，平均2～10 d 內(nèi)死亡；8～10 ℃時，平均死亡時間3～13 d。試驗結(jié)果顯示，較高的溫度季節(jié)感染強度較大。

3.1.4 感染途徑 潘子豪等[9]認為冷凍餌料魚是導致小龍蝦感染W(wǎng)SSV并暴發(fā)流行的原因之一。因為小龍蝦養(yǎng)殖有的使用冷凍海水飼料魚，混雜海蝦等甲殼類，促進了WSSV向內(nèi)陸地區(qū)的“遷移”。養(yǎng)殖水體的排放或者實驗室垃圾處理不善導致帶有WSSV的病蝦或寄主進入長江，從而被長江中的小龍蝦攝食導致感染W(wǎng)SSV[13]。內(nèi)地從沿海地區(qū)引進小龍蝦、南美白對蝦等苗種也增加了引進白斑綜合征病毒的風險。

試驗表明，注射和口服均能使小龍蝦感染發(fā)病，而浸泡方式不能使小龍蝦發(fā)病。在水體中，WSSV可能不以離體傳播為主要方式，病毒以存在于組織內(nèi)的形式，通過食物鏈來完成從一個宿主到另一個宿主的傳播。因此，在養(yǎng)殖過程中應認真處理好發(fā)病死亡的蝦，如在遠離養(yǎng)殖塘處掩埋等，以杜絕病毒的進一步擴散[13]。

3.2 有關病理學研究

人工感染試驗表明，被感染的小龍蝦胃、鰓等的上皮組織以及結(jié)締組織的細胞核明顯腫大和嗜伊紅染色；電鏡觀察發(fā)現(xiàn)胃部、鰓部組織的細胞核內(nèi)有大量的桿狀病毒樣病毒粒子[15]。在受感染瀕死螯蝦的胃、中腸和循環(huán)血淋巴中觀察到大量病毒粒子；在肝胰腺組織的細胞中觀察到少量病毒粒子[16，17]。感染W(wǎng)SSV后螯蝦血細胞密度呈現(xiàn)先升后降的趨勢，至感染后第6天血細胞密度僅為對照組的21.3%；被感染血細胞內(nèi)的病毒量始終呈上升趨勢，達到最高感染率時螯蝦處于瀕死狀態(tài)[18]。黃樺等[19]的試驗結(jié)果顯示，受感染的小龍蝦體內(nèi)病毒含量與其死亡呈正相關；健康的小龍蝦和感染病毒的小龍蝦體內(nèi)的ATPase活性分別為7.337 U/mgprot和4.212 U/mgprot，有極顯著的差異。小蝦對WSSV敏感性比較高，感染后易死亡；中等蝦對WSSV敏感性比小蝦低，感染后不易死亡；大蝦對WSSV敏感性最低，感染后最不易死亡。

3.3 WSSV檢測技術

在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，快速準確地檢測出白斑綜合征病毒，對正確診斷、科學防治至關重要。不少學者開展了WSSV檢測技術研究。徐進等[20]對傳統(tǒng)對蝦白斑綜合征病毒的PCR檢測方法中的病毒模板DNA的提取方法加以改進，建立了一種快速檢測小龍蝦WSSV的PCR方法。王軼南等[21]應用抗WSSV的混合單克隆抗體標記螯蝦血細胞內(nèi)的病毒，進而通過流式細胞術對血細胞的病毒感染強度進行了初步定量分析，其結(jié)果對闡明WSSV在螯蝦血細胞內(nèi)的增殖規(guī)律及進一步研究WSSV的感染機制奠定了基礎。李文杰等[22]建立的巢式PCR方法適宜于WSSV的檢測，特別是對小龍蝦感染早期和中期的檢測，同時該方法可以應用于小龍蝦親本、苗種的檢測篩選，以及在小龍蝦養(yǎng)殖過程中的WSSV動態(tài)監(jiān)測。環(huán)介導等溫擴增（LAMP）法可以快速、靈敏、特異性地檢測小龍蝦WSSV，其靈敏度與巢式PCR相比，高出約500倍，且不需要專用的PCR儀，是檢測WSSV的一種理想方法[23]。張玲等[24]利用建立的WSSV實時熒光定量PCR技術檢測感染了WSSV后小龍蝦組織內(nèi)病毒數(shù)量的時序動態(tài)變化。

3.4 免疫預防研究

有些學者進行了有關小龍蝦白斑綜合征免疫研究。袁軍法等[25]利用原核表達的對蝦白斑綜合征病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP28口服免疫小龍蝦，結(jié)果表明VP28 能有效激起機體的免疫反應。用家蠶-桿狀病毒表達系統(tǒng)在蠶蛹體內(nèi)表達的重組病毒囊膜蛋白rVp28制成的疫苗口服免疫小龍蝦，觀察了其對白斑綜合征病毒人工感染的保護作用。結(jié)果表明，重組囊膜蛋白rVp28免疫后，對口服感染具有顯著的保護作用，對注射感染有一定的保護作用[26]。Jha等[27]認為用在酵母細胞中表達的病毒囊膜蛋白VP19與VP28重組蛋白制成的疫苗對小龍蝦免疫預防白斑綜合征是可行的。也有人嘗試利用中草藥提高小龍蝦的免疫力。郝忱等[28]在基礎日糧中添加中草藥復合添加劑（0.3%大黃+0.3%淫羊藿+0.2%黃芪+0.2%板藍根）可以促進小龍蝦的生長，提高機體的非特異性免疫力以及抵抗白斑病綜合征病毒的能力。洪徐鵬等[29]發(fā)現(xiàn)，添加0.8%的黃芪多糖可提高小龍蝦26.67%的存活率，對提高小龍蝦抗WSSV感染有很好的效果。

4 防控對策

隨著小龍蝦養(yǎng)殖規(guī)模進一步擴大，未來幾年小龍蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量將繼續(xù)上升。因此小龍蝦白斑綜合征的防控工作十分重要。2014年農(nóng)業(yè)部辦公廳就小龍蝦白斑綜合征防控下發(fā)文件，2015年開始把湖北省等內(nèi)陸省份小龍蝦白斑綜合征納入國家水生動物疫病監(jiān)測計劃。為全面做好小龍蝦白斑綜合征防控工作，提出以下對策。

4.1 深化小龍蝦白斑綜合征的研究

在短短的10幾年間，小龍蝦從一個基本未開發(fā)利用的野生種，迅速發(fā)展成年產(chǎn)量數(shù)十萬噸的養(yǎng)殖對象。因環(huán)境脅迫變大，流通頻繁，受病原威脅加大，種質(zhì)退化等因素，導致小龍蝦養(yǎng)殖過程中發(fā)生白斑綜合征。迄今對小龍蝦白斑綜合征的研究十分薄弱，亟需開展小龍蝦白斑綜合征病原學、流行病學、快速檢測診斷和防治技術研究。

4.2 加強疫病監(jiān)測報告

加強小龍蝦白斑綜合征監(jiān)測，及時全面掌握發(fā)病情況，一旦發(fā)現(xiàn)疫情，按照《動物防疫法》規(guī)定的疫病報告制度報告。利用省級水生動物疫病監(jiān)控中心和縣級水生動物疫病防治站，建設全省的小龍蝦病害預警體系和防控網(wǎng)絡。

4.3 實施苗種產(chǎn)地檢疫制度

苗種帶毒是WSSV蔓延的重要原因[5]。嚴控疫區(qū)苗種流出，嚴格實施苗種產(chǎn)地檢疫，建立引種的檢疫隔離區(qū)，試點建立無白斑綜合癥苗種場。對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。根據(jù)水域和流域的自然隔離情況劃區(qū)，并實施劃區(qū)管理。

4.4 積極開展技術服務

水產(chǎn)科研和技術推廣機構(gòu)加強對養(yǎng)殖生產(chǎn)者的指導和技術培訓，指導他們嚴格按照相關養(yǎng)殖技術規(guī)范組織開展生產(chǎn)。

4.5 強化養(yǎng)殖生產(chǎn)管理

推廣健康養(yǎng)殖技術，加強水源管理，防止水源帶毒；選擇健康無病毒苗種，把好苗種質(zhì)量關；控制合理養(yǎng)殖密度，調(diào)控好水質(zhì)，保持良好的養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境；使用優(yōu)質(zhì)飼料，減少養(yǎng)殖自身污染；捕撈成蝦時，要盡量小心操作減少人為干擾，避免留塘蝦產(chǎn)生應激反應。

4.6 嚴格控制疫病擴散

發(fā)現(xiàn)并確定疫情后，要采取緊急的強制控制、撲滅等措施，并及時發(fā)出通報，嚴控疫區(qū)小龍蝦流出。及時撈出病死蝦，避免因小龍蝦自相殘食引起病原迅速擴散；對病死蝦要采取焚毀、掩埋、高溫等方法進行無害化處理；對發(fā)病池塘水體、接觸疫病水體的工具、器皿等其他物品必須消毒殺菌處理，發(fā)病池塘水體未經(jīng)處理嚴禁排放，切斷病原傳播途徑。

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