王海剛, 謝紅梅, 韓 雪, 張立獻, 趙文增

(華北石油管理局總醫(yī)院 普外二科, 河北 任丘, 062552)

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uH2B在原發(fā)性結腸腺癌中的表達及其與臨床病理參數(shù)的關系

王海剛, 謝紅梅, 韓 雪, 張立獻, 趙文增

(華北石油管理局總醫(yī)院 普外二科, 河北 任丘, 062552)

目的 探討原發(fā)性結腸腺癌組織中組蛋白H2B單素泛化(uH2B)的表達水平及與患者臨床病理參數(shù)的關系。方法 選取2013年1月—2016年1月本院胃腸外科手術切除的83例結腸腺癌組織標本、癌旁組織，既往收集的20例正常結腸組織，采用免疫組化染色觀察各組組織標本中uH2B蛋白的表達程度，并分析與原發(fā)性結腸腺癌患者臨床病理參數(shù)的關系。結果 結腸癌組織標本中uH2B蛋白的陽性表達率46.99%, 低于癌旁組織的83.13%、正常結腸黏膜組織的90.00%, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05); 癌旁組織和正常結腸黏膜組織中uH2B蛋白的陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05); 結腸癌組織標本中uH2B蛋白的陽性表達率與腫瘤的TNM分期、分化程度、淋巴結轉移相關(P<0.05), 與患者的年齡、性別、腫瘤浸潤深度、腫瘤最大徑的關系不顯著(P>0.05)。結論 結腸癌組織標本中uH2B蛋白表達率降低，并且與患者的腫瘤的TNM分期、分化程度、淋巴結轉移具有相關性。

原發(fā)性結腸腺癌; 組蛋白H2B單素泛化; 臨床病理參數(shù)

結腸癌是臨床上較為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，相關研究證實結腸腺癌的發(fā)病率占到了各種結腸癌病理類型的35%以上，且近年來具有明顯的上升趨勢[1]。各種因素均可以促進結腸癌的發(fā)生發(fā)展，基因突變、癌基因相關蛋白的表達翻譯等，是調控和促進結腸癌等惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的核心因素[2-3]。近年來研究[4-5]發(fā)現(xiàn)，表觀遺傳學領域中對于相關癌基因組蛋白的表達修飾，可以顯著影響到消化系統(tǒng)上皮細胞來源惡性腫瘤的發(fā)生。組蛋白H2B(uH2B)的單素泛化的表達調控，可以通過影響下游基因轉錄水平，進而促進結腸癌的發(fā)生發(fā)展。本研究通過 選取2013年1月-2016年1月本院胃腸外科手術切除的83例結腸腺癌組織標本，探討了uH2B在結腸癌、癌旁組織及正常組織中的表達，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月—2016年1月本院胃腸外科手術切除的83例結腸腺癌組織標本、癌旁組織，既往收集的20例正常結腸組織進行研究。原發(fā)性結腸腺癌83例，男48例，女35例; 年齡41～79歲，平均年齡(63.1±9.4)歲; 腫瘤分化程度：高分化24例，中分化22例，低分化37例; 浸潤深度：肌層42例，漿膜層41例，淋巴結轉移38例。正常結腸組織20例，男12例，女8例; 年齡36～79歲，平均年齡(61.7±13.6)歲。2組的年齡、性別構成差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。納入標準：所有患者均在本院接受手術治療，術后病理學檢查確診為原發(fā)性結腸腺癌; 術前未接受放化療、免疫治療; 正常腸黏膜組織來源于外傷手術術后標本; 入選對象的各項基礎資料完整。排除標準：轉移性結腸癌患者; 伴有其他部位惡性腫瘤疾病的患者; 臨床資料不完整、未經病理學證實的患者。

1.2 免疫組化方法

采用石蠟切片，切片厚度3 μm, 3% H2O2室溫孵育5 min, 采用去離子水水沖洗3次，每次3 min, 采用濃度為10% 牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 mL純水)封閉，室溫孵育5 min, 加入uH2B蛋白抗體(鼠來源，南京碧云天生物科技有限公司), 37 ℃ 孵育2 h, PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min, 滴加HRP標記的二抗(兔來源，購自羅氏檢測公司), 37 ℃ 孵育30 min, PBS 沖洗3次，每次5 min, 加入 NBT/BCIP色劑顯色5 min, 復染，脫水，透明，封片，鏡下觀察。OLIPICS電子顯微鏡購自上海精密儀器有限公司，配套試劑購自南京泰康生物科技有限公司。

1.3 免疫組化判斷標準

免疫組化陽性結果判定: uH2B蛋白的陽性著色表達于細胞膜，呈黃色、棕黃色、褐色顆粒表達，根據著色強度: 0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；根據陽性細胞比例：陽性細胞數(shù)目所占比例<10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細胞數(shù)所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽性。(-)為總分<3分，陰性表達; (+)為3～5分，弱陽性表達; (2+)為6-9分，中陽性表達; (3+)為>9分，強陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據統(tǒng)計分析采用SAS 10.0進行處理，計量資料采用均數(shù)±標準差進行統(tǒng)計描述; 計數(shù)資料采用百分率進行統(tǒng)計描述, 2組間比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 3類組織標本的uH2B蛋白的陽性率比較

結腸癌組織標本中uH2B蛋白的陽性表達率46.99%, 低于癌旁組織的83.13%、正常結腸黏膜組織的90.00%, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05); 癌旁組織和正常結腸黏膜組織中uH2B蛋白的陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05), 見表1、圖1。

表1 3類組織標本的uH2B蛋白的陽性率比較

2.2 結腸癌組織標本中的uH2B蛋白的陽性率 與患者病理參數(shù)的關系

結腸癌組織標本中uH2B蛋白的陽性表達率與腫瘤的TNM分期、分化程度、淋巴結轉移具有相關性(P<0.05), 與患者的年齡、性別、腫瘤浸潤深度、腫瘤最大徑的關系不顯著(P>0.05), 見表2。

3 討 論

飲食習慣的改變、過度飲酒及遺傳易感等因素均可以促進結腸腺癌的發(fā)生發(fā)展，特別是在年齡大于45歲的老年吸煙男性人群中，結腸腺癌的發(fā)病率可達0.005%以上，且近年來具有明顯上升趨勢[6-7]。結腸癌患者容易早期發(fā)生淋巴結及血行轉移，臨床預后較差, 5年生存率不足35%, 中位生存時間不足32個月[8], 而通過對于結腸腺癌發(fā)生發(fā)展過程中相關遺傳學生物機制的研究，可以為結腸癌的免疫靶向治療或者綜合性的生物學治療提供新的靶點或者思路。

A為正常結腸黏膜組織;B為癌旁組織;C為原發(fā)性結腸腺癌組織圖1 免疫組化染色病理圖(200倍)

表2 uH2B蛋白的陽性率與患者臨床病理參數(shù)的關系[n(%)]

表觀遺傳學的改變對于惡性腫瘤的發(fā)生具有重要的調控作用，組蛋白的乙?；?、硫酸化、磷酸化及甲基化等修飾方式，可以通過誘導下游癌基因轉錄起始因子的活性，促進結腸上皮黏膜細胞周期的異?；罨瑢е掳┘毎倪^度增殖[9]。然而迄今為止對于組蛋白uH2B蛋白的單素泛化研究較少。uH2B蛋白可以在H2A、H2B、H3、H4的氨基末端區(qū)域的某些專一位置形成N6-乙酰賴氨酸，通過H1位點的磷酸化，進而影響轉錄共同抑制復合物的形成，參與轉錄阻遏和抑癌基因的沉默等過程[10-11]。已有的研究[12]探討了uH2B蛋白的單素泛化改變與肝癌及食管癌發(fā)生的關系，認為uH2B蛋白的單素泛化可以提高消化系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生概率，并促進病情的臨床進展。本研究的創(chuàng)新性在于探討了uH2B蛋白在結腸腺癌組織中表達的同時，分析了其與結腸癌患者臨床病理特征的關聯(lián)。

本研究發(fā)現(xiàn)，在結腸腺癌及癌旁組織中uH2B蛋白均呈現(xiàn)出了明顯的低表達態(tài)勢，其表達濃度明顯低于正常對照組織，特別是結腸腺癌組織中的uH2B蛋白的表達濃度更低，低于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學意義，這些均提示了uH2B蛋白參與到了結腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中。uH2B蛋白的單素泛化改變，可以在影響組蛋白四級空間結構的基礎上，促進癌基因轉錄和反應，從而導致結腸癌的發(fā)生發(fā)展。Coskun D等[13-14]通過免疫組化分析了72例結腸癌樣本量的臨床資料，發(fā)現(xiàn)uH2B在結腸癌組織中的表達強度僅僅為15%，明顯低于癌旁組織，這與本研究結論較為一致。免疫組化染色分析可以發(fā)現(xiàn), uH2B蛋白主要表達于癌細胞的細胞膜及細胞核周邊，提示其可能通過影響到細胞內遺傳物質的轉錄或者細胞膜上第二信使的合成等途徑影響到結腸癌的發(fā)生，但相關具體機制仍然需要進一步探討。對于uH2B蛋白與結腸癌臨床病理特征的關系研究可以發(fā)現(xiàn), uH2B蛋白與結腸腺癌的TNM分期、分化程度、淋巴結轉移具有明顯的相關性，表明uH2B蛋白可能影響到了結腸癌的細胞分化及淋巴結侵襲等病理過程, uH2B蛋白表觀遺傳性水平的修飾，對于癌細胞分化及淋巴結轉移等的影響考慮主要與組蛋白的修飾有關，但需要注意的是，本研究并未發(fā)現(xiàn)uH2B蛋白與結腸癌組織浸潤深度的關系，這與Kim D等[15]的結論并不完全一致，考慮到樣本量的不足、臨床資料的收集偏移等，均可能影響到了結論的差別。

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Expression of uH2B in primary adenocarcinoma of the colon and its relationship with clinicopathological parameters

WANG Haigang, XIE Hongmei, HAN Xue, ZHANG Lixian, ZHAO Wenzeng

(SecondDepartmentofGeneralSurgery,GeneralHospitalofNorthChinaPetroleumAdministration,Renqiu,Hebei, 062552)

Objective To study of primary colorectal adenocarcinoma histone H2B single prime generalization (uH2B) and its relationship with clinicopathological parameters.Methods Colonic cancer tissue samples and para-carcinoma tissue of gastrointestinal surgery resection of 83 cases were selected from January 2013 to January 2016 in our hospital, and normal colon tissue of 20 cases was collected, and uH2B protein expression level in tissue samples was observed using immunohistochemical staining, and its relationship with clinical pathological parameters of patients with primary colonic carcinoma was analyzed.Results The positive expression rate of uH2B protein in colon cancer tissues was 46.99%, which was lower than 83.13% of adjacent tissues and 90.00% in normal colon mucosa, the differences were statistically significant (P<0.05); But there was no significant difference in the positive expression of uH2B protein in adjacent tissues and normal colonic mucosa (P>0.05); The positive expression rate of tumor uH2B protein in colon cancer tissues in the TNM stage was correlation with degree of differentiation and lymph node metastasis (P<0.05), and it had no significant relationship with the patient′s age, gender, tumor invasion depth, tumor size (P>0.05).Conclusion The decreased expression rate of uH2B protein in colon carcinoma tissue is correlated with the TNM stage, differentiation degree and lymph node metastasis of the patients.

primary adenocarcinoma of the colon; generalization of histone H2B; clinical pathological parameters

2016-12-22

中國石油華北油田礦區(qū)臨床醫(yī)學研究項目(2011-HB-G27-3)

R 735.3

A

1672-2353(2017)09-099-04

10.7619/jcmp.201709025