黃 忠，趙書燕，2，林黑著，楊小立，廖經球，周傳朋，戚常樂，2

（1. 中國水產科學研究院南海水產研究所/農業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，廣東 廣州 510300；2. 上海海洋大學生命科學與技術學院，上海 201306；3.農業(yè)部南海水產動物育種與養(yǎng)殖重點實驗室，廣東 湛江 524000）

飼料蛋白中添加蝦蛋白肽對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長性能和抗氧化指標的影響

黃 忠1，趙書燕1，2，林黑著1，楊小立3，廖經球3，周傳朋1，戚常樂1，2

（1. 中國水產科學研究院南海水產研究所/農業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，廣東 廣州 510300；2. 上海海洋大學生命科學與技術學院，上海 201306；3.農業(yè)部南海水產動物育種與養(yǎng)殖重點實驗室，廣東 湛江 524000）

為研究兩種蛋白水平下添加蝦蛋白肽對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長性能和抗氧化指標的影響，設計6種飼料，以440、480 g/kg兩種飼料蛋白與0、10和20 g/kg 3種蝦蛋白肽添加量配制。結果顯示，相同蛋白水平下，石斑魚的終末均重和增重率均隨著蝦蛋白肽水平的上升而先上升后下降，10 g/kg蝦蛋白肽組顯著高于0、20 g/kg蝦蛋白肽組；蝦蛋白肽添加量相同時，480 g/kg飼料蛋白組顯著高于440 g/kg飼料蛋白組。蛋白質效率、肌肉粗蛋白和粗脂肪含量、血清AST和ALT活力、肝臟CAT和T-AOC活力的變化規(guī)律與增重率類似。餌料系數(shù)、血糖含量和肝臟MDA含量的變化規(guī)律則與之相反。試驗結果表明，在不同蛋白水平的飼料中添加蝦蛋白肽均能促進珍珠龍膽石斑魚幼魚的生長，并提高其抗氧化能力，但添加量過高會產生抑制作用，因此，蝦蛋白肽適宜添加量為10 g/kg。

蛋白水平；蝦蛋白肽；珍珠龍膽石斑魚；生長性能；抗氧化指標

肽是分子結構介于氨基酸和蛋白質之間的一類化合物，可水解為游離氨基酸以作合成組織蛋白的氮源或分解供能，也可以直接參與有機體蛋白質的合成；許多肽類物質還具有生物活性，可參與機體生命活動的調節(jié)，提高動物的生長性能，促進機體健康［1-3］。飼料工業(yè)中常用的肽類原料通常為蛋白質的酶解產物，分為海洋生物活性肽和陸地生物活性肽兩類，例如大豆生物活性肽［4］、豬血多肽［5］、酪蛋白肽［6-7］、蝦蛋白肽［2，8］等。其中，蝦蛋白肽是將水產加工業(yè)中的新鮮蝦頭等下腳料用多種微生物和生物復合酶經發(fā)酵酶解萃取所得的多肽，不僅粗蛋白含量高達50%以上，而且多肽類成分普遍具有較高的生物活性，同時還含有蝦青素、蝦腦磷脂、益生菌、微量元素及礦物質等營養(yǎng)素［2］。朱碧英等［1］研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加蝦蛋白肽可顯著提高產蛋高峰期過后處于衰減期蛋雞的產蛋率和蛋品質。在草魚（Ctenopharyngodon idella）飼料中添加一定比例的蝦蛋白肽可提高飼料表觀消化率和蛋白消化率，增加血液循環(huán)中生物活性肽含量，提高機體對氨基酸的利用率和蛋白質合成能力，減少肝胰臟和腸系膜脂肪貯積，提高草魚的生長性能［2，7］。因此，蝦蛋白肽是一種優(yōu)質的營養(yǎng)性添加劑，可顯著提高養(yǎng)殖動物的生長性能。

珍珠龍膽石斑魚是以鞍帶石斑魚（俗稱龍膽，Epinephelus lanceolatus）為父本、棕點石斑魚（俗稱老虎斑，Epinephelus fuscoguttatuss）為母本雜交而成的一種名貴海水魚類［9］，其生產性能的提高能夠帶來極大的經濟效益。近年來關于珍珠龍膽石斑魚的營養(yǎng)類研究逐漸增多，但是現(xiàn)階段尚沒有蝦蛋白肽在珍珠龍膽石斑魚飼料中應用的相關研究。為此，本研究通過在兩種蛋白含量的飼料中添加不同水平的蝦蛋白肽，以評估其對珍珠龍膽石斑魚生長性能、體成分、血清生化和抗氧化指標的影響，為蝦蛋白肽在石斑魚商品飼料中的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料配制

試驗以魚粉、豆粕、花生粕、大豆?jié)饪s蛋白和次粉為主要原料設計了6種飼料，命名為CP44/SPP0、CP44/SPP1、CP44/SPP2、CP48/ SPP0、CP48/SPP1、CP48/SPP2（表1）。其中，CP44和CP48代表飼料粗蛋白分別為440、480 g/kg干物質，SPP0、SPP1和SPP2代表飼料中蝦蛋白肽的添加量分別為0、10、20 g/kg飼料。蝦蛋白肽由湛江市博泰生物化工科技實業(yè)有限公司提供（產品成分：粗蛋白質≥50.0%、粗脂肪≤3.0%、氨基酸≥42.0%、粗纖維≤5.0%、鈣≤3.0%、總磷≥1.0%、食鹽≤2.0%、粗灰分≤6.0%、水分≤10.0% ）。飼料制作時，先按配方順序將原料混合均勻，加350 g/kg自來水攪拌混勻，然后用F-26（Ⅲ）型雙螺旋桿擠條機制成粒徑為2.5 mm的沉性飼料，自然風干至水分為80～90 g/kg，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗對象及養(yǎng)殖管理

養(yǎng)殖試驗在中國水產科學研究院南海水產研究所深圳試驗基地展開，為期8周，所用石斑魚苗為深圳試驗基地自行孵化。試驗開始之前，隨機挑選大小均勻的500尾魚苗在室內養(yǎng)殖系統(tǒng)馴養(yǎng)2周以適應試驗條件，其間投喂商品飼料。馴養(yǎng)結束后，從中隨機選擇360尾體格健壯、規(guī)格整齊的魚苗分為6組，每組設3個重復，每個重復20尾魚，在500 L圓形玻璃鋼桶中開展養(yǎng)殖試驗，初始體質量為13.67（±0.11）g。每天表觀飽食投喂2次，投喂時間分別為8：00和16：00。每天記錄石斑魚攝食量、死亡數(shù)量等數(shù)據(jù)。試驗期間水溫25.0～29.0℃，溶氧＞5.0 mg/L，氨氮＜0.1 mg/L，pH值為7.7～7.8，鹽度30‰～32‰，自然光照，流水，不間斷充氣。

表1 飼料配方及營養(yǎng)成分（g/kg）

1.3 樣品采集和生長指標分析

養(yǎng)殖試驗結束后，所有試驗魚停止投喂，空腹24 h，用10 mg/L的丁香酚（購于上海醫(yī)療器械股份有限公司）麻醉后，稱量和記錄每個桶中試驗魚的體質量、數(shù)量。隨后從每個桶中隨機選取6尾魚用于尾靜脈取血，在4℃條件下靜置30 min，3 000 r/min離心2 min，取上清液（血清），-80℃下保存。隨后取試驗魚兩側側線上的背肌用于肌肉成分分析，樣品-20℃下保存。最后，將試驗魚解剖，取其中的3尾魚分離出內臟、肝臟和脂肪并稱重，記錄數(shù)據(jù)備用，再將肝臟置于-20℃下保存，用于抗氧化指標測定。

生長性能和形體指標計算公式如下：

1.4 飼料和肌肉成分分析

試驗飼料和魚樣肌肉的常規(guī)成分測定：水分測定采用105℃常壓干燥法；粗蛋白采用凱氏定氮法（1030-Auto-analyzer，Tecator AB，瑞士H?gan?s）；粗脂肪采用索氏抽提法（HT6，Tecator AB，瑞士H?gan?s）；灰分用550℃灼燒法。

1.5 血清生化指標測定

血清生化指標采用全自動生化分析儀（Hitachi 7170，日本東京） 及試劑盒 （Daiichi Pure Chemicals Co.，Ltd，日本東京）進行分析，主要測定谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、血糖（GLU）、膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）和球蛋白（Glo）等指標。

1.6 肝臟抗氧化指標測定

肝臟用勻漿機勻漿后取上清液用于抗氧化指標測定，采用南京建成生物研究所生產的試劑盒，參照試劑盒說明測定過氧化氫酶（CAT）、總抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）等指標。

試驗采用Excel和SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。先對數(shù)據(jù)作單因素方差分析（ANOVA），處理若有顯著差異，再作Duncan's法多重比較。

2 結果與分析

2.1 兩種飼料蛋白水平添加蝦蛋白肽對石斑魚生長性能和形體指標的影響

飼料粗蛋白水平和蝦蛋白肽水平均對石斑魚的生長性能產生顯著影響（表2）。相同飼料蛋白水平下，石斑魚的終末均重和增重率均隨著蝦蛋白肽水平的上升而先上升后下降，其中蝦蛋白肽10 g/kg處理顯著高于0、20 g/kg處理；蝦蛋白肽添加量相同時，480 g/kg飼料蛋白水平顯著高于440 g/kg飼料蛋白水平。蛋白質效率的變化規(guī)律與增重率類似，但飼料蝦蛋白肽添加量為20 g/kg時，480 g/kg飼料蛋白水平試驗魚的蛋白質效率與440 g/kg飼料蛋白水平沒有顯著差異。餌料系數(shù)的變化規(guī)律則與蛋白質效率完全相反。440 g/kg飼料蛋白水平下，攝食量隨著蝦蛋白肽水平的上升而下降，處理間差異顯著；480g/kg飼料蛋白水平下，各試驗組的攝食量則沒有顯著差異。值得一提的是，不添加蝦蛋白肽時，低蛋白水平的攝食量顯著高于高蛋白水平；而蝦蛋白肽添加量為10、20 g/kg時，二者沒有顯著差異。各處理試驗魚的存活率均在90%以上，且處理間沒有顯著差異。

表2 兩種飼料蛋白水平添加蝦蛋白肽對石斑魚生長性能和形體指標的影響

從表2可以看出，試驗魚的形體指標變化幅度較小，僅有CP44/SPP0處理的脂體比顯著高于CP48/SPP1處理，其他處理均沒有顯著差異。各處理試驗魚的臟體比和肝體比也沒有顯著差異。

2.2 兩種飼料蛋白水平添加蝦蛋白肽對石斑魚肌肉成分的影響

隨著飼料蛋白水平和蝦蛋白肽添加量的變化，試驗魚肌肉的各營養(yǎng)成分發(fā)生了一定的改變（表3）。相同蛋白水平下，石斑魚肌肉的粗蛋白含量和粗脂肪含量均隨蝦蛋白肽水平的上升而先上升后下降；蝦蛋白肽添加量相同時，480 g/kg飼料蛋白水平的粗蛋白和粗脂肪含量都高于440 g/kg飼料蛋白水平。但是，僅有CP48/ SPP1處理試驗魚肌肉的粗蛋白含量顯著高于CP44/SPP0、CP44/SPP1、CP44/SPP2、CP48/SPP2處理；CP44/SPP0、CP44/SPP2處理的粗脂肪含量顯著低于其他4個處理。各處理試驗魚肌肉的水分和灰分差異不顯著。

表3 兩種飼料蛋白水平添加蝦蛋白肽對石斑魚肌肉成分的影響（g/kg）

2.3 兩種飼料蛋白水平添加蝦蛋白肽對石斑魚血清生化指標的影響

由表4可知，相同蛋白水平下，血清中AST和ALT活力均隨著飼料蝦蛋白肽水平的上升而先上升后下降，其中蝦蛋白肽10 g/kg處理顯著高于0、20 g/kg處理；蝦蛋白肽添加量相同時，480 g/kg飼料蛋白水平顯著高于440 g/kg飼料蛋白水平。CP44/SPP0、CP48/SPP0、CP48/SPP2處理試驗魚血清中ALP活力顯著高于CP44/ SPP1、CP44/SPP2處理。試驗魚血糖含量變化趨勢與AST完全相反。CP48/SPP1、CP48/SPP2處理試驗魚血清中膽固醇和甘油三酯含量顯著低于其他4個處理。相同飼料蛋白水平下，血清白蛋白和球蛋白含量均隨著蝦蛋白肽水平的上升而下降；其中，440 g/kg飼料蛋白水平下，處理間白蛋白含量差異顯著；480 g/kg飼料蛋白水平下，各處理球蛋白含量發(fā)生了顯著變化。處理間血清總蛋白含量沒有顯著差異。

表4 兩種飼料蛋白水平添加蝦蛋白肽對石斑魚血清生化指標的影響

2.4 兩種飼料蛋白水平添加蝦蛋白肽對石斑魚肝臟抗氧化指標的影響

飼料蛋白水平和蝦蛋白肽添加量的改變均對石斑魚肝臟的抗氧化指標產生顯著影響（表5）。相同飼料蛋白水平下，肝臟CAT活力和T-AOC含量均隨著蝦蛋白肽水平的上升而下降；其中，440 g/kg飼料蛋白水平下，處理間T-AOC含量差異顯著；480 g/kg飼料蛋白水平下，各處理的CAT活力和T-AOC含量都發(fā)生了顯著變化。MDA的變化規(guī)律則與T-AOC相反，且僅有CP48/SPP1處理魚肝臟的總抗氧化能力顯著高于CP44/SPP0、CP44/SPP2處理。

表5 兩種飼料蛋白水平添加蝦蛋白肽對石斑魚肝臟抗氧化指標的影響

3 結論與討論

肽類是蛋白質降解為氨基酸的中間產物，相較于二者，肽類在吸收利用上有明顯的優(yōu)勢，可以有效提高飼料利用率，促進魚類生長［2，10］。在飼料中添加 2%小肽制品可以使歐鰻（Anguilla anguilla）的生長率和飼料效率分別提高38.62%和 8.05%［11］。馮健等［8］在草魚飼料中添加了0.5% 3種不同的小肽（蝦蛋白肽、魚粉水解物和酶解酪蛋白）后，與空白對照相比顯著提高了蛋白質效率、飼料利用率和增重率。馮健等［2］還發(fā)現(xiàn)添加1%蝦肽蛋白不會繼續(xù)提高草魚的生產性能，相較于添加0.5%蝦肽蛋白反而略有下降。類似的研究結果在本試驗中也有所體現(xiàn)，在440、480 g/kg飼料蛋白水平下，珍珠龍膽石斑魚的增重率均隨著蝦蛋白肽添加量的升高而先上升后下降，餌料系數(shù)則與之相反。說明蝦蛋白肽的添加促進了試驗魚對飼料的利用，這可能與肽類物質能夠提高蛋白消化率和飼料表觀消化率有關［2］。魚類對小肽的吸收主要依賴于H+或Ca2+轉運體系，相對于轉運游離氨基酸的Na+轉運體系，具有耗能低、轉運速度快、載體不易飽和等優(yōu)點；還可以避免氨基酸之間的吸收競爭，減少滲透壓問題，提高吸收率［3，11］。同時，肽類的抗原性比蛋白質低，營養(yǎng)價值更高［3］。因此，在飼料中添加小肽可以提高草魚對日糧中蛋白質的利用率和機體自身蛋白質合成能力［2］。試驗中蝦蛋白肽的適量添加（10 g/kg）也促進了蛋白質的吸收利用，提高了蛋白質效率和肌肉蛋白含量，降低了血糖含量。肽類物質在狼鱸（Dicentrarchus labrax）［12］、大西洋鮭（Salmo salar）［13］、西伯利亞鱘（Acipenser baerii Brandt）［14］、異育銀鯽（Carassius auratus gibelio×Cyprinus carpio）［15］、美洲黑石斑魚（Centropristis striata）［16］等魚類的應用中也表現(xiàn)出了良好的促生長效果。

魚類會根據(jù)自身的能量需求調整攝食量，飼料能量偏低時會自動增加攝食量［17］。試驗中不添加蝦蛋白肽時，440 g/kg飼料蛋白水平顯著高于480 g/kg飼料蛋白水平。石斑魚幼魚通過加大攝食量滿足自身對蛋白質和能量的需求［18］。蝦蛋白肽添加量為10、20 g/kg時，二者沒有顯著差異。這與蝦蛋白肽的促消化吸收作用有關，蝦肽蛋白進入腸道后，刺激腸道中開放型細胞分泌激素調節(jié)消化酶的分泌［19］，飼料消化速率提升，較快滿足了魚體對蛋白質和能量的需求，石斑魚不再持續(xù)加大攝食量。馮健等［2］發(fā)現(xiàn)飼料中添加蝦蛋白肽可以提高草魚的飼料表觀消化率和蛋白質消化率，從側面印證了小肽可以促進魚類消化酶的分泌。而兩個20SPP處理蛋白質效率的顯著下降可能與蛋白質水平過高有關，過量的蛋白質都被直接分解供能，利用率低下［20］，具體的作用機理尚不清楚。

本試驗各處理的存活率雖沒有顯著差異，但蝦蛋白肽10 g/kg處理的血清AST和ALT活力以及肝臟總抗氧化能力、CAT活力顯著低于0、20 g/kg處理，而MDA的變化卻與上述指標完全相反。這與飼料添加蝦蛋白肽含有的一些小肽可完整地進入血液循環(huán)增加血液循環(huán)中生物活性肽的含量有關［2］。生物活性肽能直接清除超氧負離子和羥自由基，降低DNA鏈斷裂和氧化性損傷、蛋白質-蛋白質和蛋白質- DNA交聯(lián)斷裂以及脂質過氧化的程度［3］，保護肝臟健康，降低肝臟MDA含量；也可以促進免疫器官的發(fā)育，促進CAT、免疫球蛋白等非特異性免疫因子的生成和分泌，進一步提高機體的抗氧化能力［21］。在飼料中添加小肽后發(fā)現(xiàn)西伯利亞鱘血清中的白蛋白和球蛋白都有不同程度的提高。在凡納濱對蝦飼料中添加1%小肽可顯著提高試驗蝦超氧化物歧化酶的活力，提升其抗氧化能力［21］。李清等［22］還發(fā)現(xiàn)，隨著小肽用量的增加，成鯉血液中免疫球蛋白逐漸升高，尿素氮水平明顯低于對照，提高了成鯉的免疫力，與本試驗的研究結果一致。

綜上所述，本試驗中飼料蛋白水平無論是440 g/kg，還是480 g/kg，飼料中添加適量的蝦蛋白肽均能提高珍珠龍膽石斑魚幼魚的消化吸收能力，提升其生長性能和抗氧化能力，但是過量添加蝦蛋白肽會對石斑魚的生產性能產生抑制作用。根據(jù)試驗魚生長性能和抗氧化指標的變化規(guī)律，石斑魚飼料中蝦蛋白肽的適宜添加量為10 g/kg。

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（責任編輯 崔建勛）

Effects of dietary shrimp protein-peptides on growth performance and antioxidant indices of juvenile Epinephelus lanceolatus×E. fuscoguttatuss under two dietary protein levels

HUANG Zhong1，ZHAO Shu-yan1，2，LIN Hei-zhao1，YANG Xiao-li3，LIAO Jing-qiu3，ZHOU Chuan-peng1，QI Chang-le1，2
（1. Key Laboratory of South China Sea Fishery Resources Exploitation & Utilization，Ministry of Agriculture/ South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Guangzhou 510300，China；2. School of Life Science and Technology，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306，China；3. Key Laboratory of Aquatic Animal Breeding and Culturing for South China Sea，Ministry of Agriculture，Zhanjiang 524000，China）

To investigate the effects of dietary shrimp protein-peptides （SPP） on growth performance and antioxidant indices of juvenile Epinephelus lanceolatus×E. fuscoguttatuss under two dietary protein levels，six diets were formulated to contain two crude protein （CP） concentrations （440 g/kg and 440 g/kg） and three SPP levels（0 g/kg，10 g/kg and 20 g/kg）. Each diet was randomly assigned to triplicate treatments of 20 fishes for 8 weeks，and the initial body weight of fish was 13.67（±0.11）g. The results indicated that when the dietary protein concentration was the same，the final body weight （FBW） and weight gain rate （WGR） significantly increased with SPP level increasing to 10 g/kg，beyond which a decrease was observed. When the SPP level was the same，F(xiàn)BW and WG of 480 g/kg CP group were significantly higher than those of 440 g/kg CP group. The change trends of protein efficiency ratio，muscle crude protein and crude fat contents，serum AST and ALT activities，hepatic CAT and T-AOC activities were similar with WGR. Meanwhile，the change trends of feed conversion ratio，serum glucose content and liver MDA content were the opposite with WGR. In summary，adding SPP in diets containing different protein concentrations could promote the growth performance of juvenile E. lanceolatus×E. fuscoguttatuss，and increase its antioxidant capacity，but adding too high level of SPP would cause inhibition. Therefore，the suitable SPP level was is 10 g/kg.

dietary protein concentration；shrimp protein-peptides；Epinephelus lanceolatus×E. fuscoguttatuss；growth performance；antioxidant indices

S963.32

A

1004-874X（2017）03-0128-08

2016-12-20

國家公益性行業(yè)（農業(yè)）科研專項（201403011）

黃忠（1984-），男，碩士，助理研究員, E-mail：huangzhongnhs@163.com

林黑著（1965-），男，博士，研究員，E-mail：linherzhao@163.com

黃忠，趙書燕，林黑著，等.飼料蛋白中添加蝦蛋白肽對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長性能和抗氧化指標的影響［J］.廣東農業(yè)科學，2017，44（3）：128-135.