黃喜楊佳劉豪健韋欽胡超何心怡

·實(shí)驗(yàn)研究·

黃精對(duì)環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少癥的影響

黃喜楊佳劉豪健韋欽胡超何心怡

目的觀察黃精對(duì)環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少癥的影響。方法采用連續(xù)3天腹腔注射環(huán)磷酰胺建立小鼠白細(xì)胞減少癥模型；將120只SPF級(jí)ICR小鼠隨機(jī)分成空白組、模型組和黃精高、中、低劑量組，每組20只，灌胃相應(yīng)藥物10天，測定小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)，并計(jì)算脾臟系數(shù)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)第10天，與空白組比較，模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)[（4.49±0.63）×109/L比（6.33±0.55）×109/L]和脾臟系數(shù)[（2.76±0.13）mg/g比（4.73±0.06）mg/g]均顯著降低（P<0.05）；與模型組比較，黃精中、高劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)[（10.54±0.89）×109/L、（6.19±0.18）×109/L]和脾臟系數(shù)[（4.08±0.29）mg/g、（3.08±0.11）mg/g]均顯著升高（P<0.05）。結(jié)論黃精粗提液對(duì)環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少和脾臟系數(shù)下降有明顯的改善和治療作用。

小鼠；白細(xì)胞減少癥；黃精；環(huán)磷酰胺

環(huán)磷酰胺（CTX）是臨床常用的化療藥物之一。CTX在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也破壞正常細(xì)胞，尤其對(duì)增殖旺盛的骨髓造血系統(tǒng)損傷較為嚴(yán)重，造成骨髓造血功能受抑制。由于各血細(xì)胞生成與代謝周期不同，粒細(xì)胞平均生存時(shí)間最短，因而骨髓抑制早期大多表現(xiàn)為白細(xì)胞尤其是粒細(xì)胞減少[1]。黃精是百合科黃精屬植物黃精的干燥根莖，中醫(yī)常用于治療肺虛燥咳、頭暈、脾胃陰虛、口干食少等。近年來有研究證明黃精具有增強(qiáng)免疫功能、降血脂、抗炎、抗病毒等多種藥理作用[2]。本研究以環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少癥為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，探討中藥黃精對(duì)環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少的影響及機(jī)制[3]。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物SPF級(jí)ICR小鼠120只，雄性，體質(zhì)量<25g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)：2008001660717。小鼠飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心SPF級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)房，每籠5只，每天定時(shí)投放小鼠飼料。

1.2 藥物與試劑環(huán)磷酰胺注射劑（0.2g/支，批號(hào)20160425，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司）；黃精（浙江中醫(yī)藥大學(xué)杭州濱江中醫(yī)門診部購買，經(jīng)專家鑒定）；其他試劑均為分析純。

1.3 儀器全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀（浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心血液中心提供。型號(hào)：ADVIA2120，德國拜耳公司）；加熱套（型號(hào):153003，上海勒頓實(shí)業(yè)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（型號(hào)：RE-3000，上海亞榮生化儀器廠上海）；循環(huán)水式多用真空泵（型號(hào)：SHB-Ⅲ，鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 黃精粗提液制備[3]取生黃精藥材，加10倍蒸餾水，水煎3h，過濾煎液，78℃減壓濃縮。濃縮制成0.5、1、1.5g/mL的黃精粗提液各200mL。分別裝瓶后高溫滅菌，存4℃冰箱備用。

2.2 分組給藥和造模[4]SPF級(jí)ICR雄性小鼠100只，常規(guī)飼養(yǎng)3天適應(yīng)環(huán)境。按照隨機(jī)數(shù)字表方法，分為空白組、模型組和黃精低、中、高劑量組，每組20只。第1～3天，空白組按當(dāng)日小鼠體質(zhì)量腹腔注射生理鹽水0.2mL/（10g·d），另四組在相同時(shí)間段，按當(dāng)日小鼠體量腹腔注射環(huán)磷酰胺溶液100mg/（kg·d），連續(xù)3天。

造模完成后，第4～10天，空白組和模型組小鼠灌胃蒸餾水0.2mL/（10g·d）；黃精低、中、高劑量組，分別灌胃0.5、1.0、1.5g/mL的黃精粗提液，均按當(dāng)日小鼠體質(zhì)量換算。

2.3 外周血常規(guī)白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)[5]實(shí)驗(yàn)第4、6、8和10天，各組隨機(jī)選取5只小鼠，眼眶采血，采用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀檢測外周血WBC計(jì)數(shù)。

2.4 檢測脾臟系數(shù)[5]實(shí)驗(yàn)第4、6、8和10天，各組隨機(jī)選取小鼠5只，測量小鼠體質(zhì)量，將小鼠脫臼處死后解剖取脾臟測量質(zhì)量，以脾臟質(zhì)量（mg）與體質(zhì)量（g）之比，計(jì)算小鼠脾臟系數(shù)（mg/g）。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以表示，計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間計(jì)量資料采用單因素（ANOVA）分析，兩兩比較方差齊時(shí)用LSD法，方差不齊時(shí)用Dunnett's T3法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 黃精對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響與空白組比較，模型組在第4、6、8和10天外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯降低（P＜0.05）。與模型組比較，第6、8、10天黃精中、高濃度組升高白細(xì)胞效果明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

3.2 黃精對(duì)脾臟系數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)第4天，與空白組比較，模型組脾臟系數(shù)明顯減小，差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）；隨后模型組脾臟系數(shù)緩慢升高，但是仍明顯低于空白組（P＜0.05）；第8、10天黃精低濃度組與模型組比較，升高脾臟系數(shù)效果不明顯，黃精中、高濃度組與模型組比較，脾臟系數(shù)增長快（P＜0.05）。見表2。

4 討論

研究發(fā)現(xiàn)，黃精含有多糖、甾體皂苷、蒽醌、生物堿等化學(xué)成分，具有較好的調(diào)節(jié)免疫作用。

本組結(jié)果顯示，通過腹腔連續(xù)注射CTX的方式可以較好地復(fù)制小鼠白細(xì)胞減少癥模型，由于小鼠體內(nèi)環(huán)磷酰胺代謝較為緩慢，部分藥物滯留體內(nèi)，致模型組小鼠外周血白細(xì)胞在在停止腹腔注射環(huán)磷酰胺后繼續(xù)下降；第6天后模型組小鼠外周血白細(xì)胞緩慢升高，但是仍低于空白組。黃精低劑量組與模型組相比，外周血白細(xì)胞升高效果不明顯，而黃精中、高劑量組小鼠外周血白細(xì)胞升高明顯。

表1 各組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

表1 各組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

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表2 各組小鼠脾臟系數(shù)比較

表2 各組小鼠脾臟系數(shù)比較

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

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脾臟是人體重要免疫器官，含有大量的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組小鼠脾臟系數(shù)明顯低于空白對(duì)照組,造模效果佳，且脾臟系數(shù)雖隨時(shí)間緩慢升高，但始終低于空白對(duì)照組（P<0.05）。與模型組相比，黃精中、高劑量組在中、后期脾臟系數(shù)提升明顯（P<0.05）。

本研究顯示，黃精不僅可以升高環(huán)磷酰胺致白細(xì)胞減少癥小鼠外周血白細(xì)胞，加快緩解環(huán)磷酰胺致白細(xì)胞減少作用，還可以保護(hù)環(huán)磷酰胺致白細(xì)胞減少癥小鼠脾臟功能，其作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

［1］王月英，吳紅英，李德冠，等.E838對(duì)環(huán)磷酞胺所致小鼠白細(xì)胞減少癥的防治研究［J］.中國輻射衛(wèi)生，2008，17（3）：279-280.

［2］張凡凡，王瑩瑩，楊莉，等.對(duì)腫瘤放化療后白細(xì)胞減少的中藥用藥規(guī)律分析［J］.世界中醫(yī)藥，2015，10（6）：928-930.

［3］盧煥俊，劉思源，李香蘭.黃精提取液對(duì)正常小鼠抗疲勞能力的影響及機(jī)制探討［J］.山東醫(yī)藥，2014，54（27）：39-41.

［4］熊國林，邢爽，申星，等.不同劑量環(huán)磷酞胺對(duì)正常ICR小鼠外周血象的影響［J］.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2015，23（5）：1493-1496.

［5］李潔，侯甲福，李麗，等.小白花地榆總皂苷對(duì)環(huán)磷酞胺致小鼠白細(xì)胞減少癥影響的研究［J］.中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)，2015，7（2）：13-14.

（收稿：2016-06-20修回：2016-08-26）

Effect of Huangjing on CTX-induced Leukopenia in Mice

HUANG Xi,YANG Jia,LIU Haojian,WEI Qin, HU Chao,HE Xinyi.Department of Clinical Medicine,the Second College of Clinical Medicine,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310053),China

ObjectiveTo investigate the effect of huangjing（solomanseal rhizome）on CTX-induced leukopenia in mice.MethodsOne hunderd and twenty SPF ICR mice were randomly divided into blank control group,model group,high,medium and low doses of huangjing groups,with 20 mice in each group.Except for control group,the mice in other groups were copied to leukopenia model by intreperitoneal injection of CTX for 3d,then they were given by gavage the corresponding drug for 10d.After the treatment,the WBC of mice was determined and spleen index was calculated.ResultsOn D10,the WBC and the spleen index of model group were lower than those of blank control group[（4.49±0.63）×109/L vs（6.33±0.55）×109/L,P<0.05;（2.76±0.13）mg/g vs（4.73±0.06）mg/g,P< 0.05].Compared with model group,the medium and high doses of huangjing groups had higher level of WBC and spleen index[（10.54±0.89）×109/L and（6.19±0.18）×109/L;（4.08±0.29）mg/g and（3.08±0.11）mg/g;all P<0.05].ConclusionHuangjing crude extract can improve and treat the symptoms of decreased WBC and spleen index in mice with CTX-induced leukopenia.

mice;leukopenia;huangjing（solomanseal rhizome）;CTX

浙江中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系（杭州310053）

黃喜，Tel：18258284665；E-mail：18258284665@163.com