范國宇

【摘要】 目的 研究G蛋白耦聯(lián)受體30（GPR30）在三陰性乳腺癌中的表達及意義。方法 收集178例病理診斷為乳腺癌患者的病理標(biāo)本， 進行免疫組化染色， 分析GPR30表達情況及其與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果 雌激素受體（ER）（+）患者GPR30表達率61.46%與ER（-）患者表達率60.98%比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；孕激素受體（PR）（+）患者GPR30表達率61.11%與PR（-）患者表達率59.09%比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；GPR30與ER、PR在乳腺癌患者中的表達是相互獨立的， 作為獨立因素存在。三陰性乳腺癌患者GPR30表達率78.26%與ER（+）患者比較， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P<0.05）。結(jié)論 GPR30是預(yù)測三陰性乳腺癌患者預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物， GPR30在三陰性乳腺癌內(nèi)分泌治療中具有重要作用。

【關(guān)鍵詞】 G蛋白耦聯(lián)受體30；內(nèi)分泌治療；三陰性乳腺癌

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.12.014

【Abstract】 Objective To study the expression and significance of G protein-coupled receptor 30 （GPR30） in triple-negative breast cancer. Methods Pathological specimen of 178 breast cancer patients confirmed by pathological diagnosis were collected for immumohistochemical staining， and analysis were made on GPR30 expression situation and its relation to clinical indicators. Results Estrogen receptor （ER）（+） patients had no statistically significant difference in GPR30 expression rate as 61.46% comparing with 60.98% in ER（-） patients （P>0.05）. Progestrone receptor （PR）（+） patients had no statistically significant difference in GPR30 expression rate as 61.11% comparing with 59.09% in PR（-） patients （P>0.05）. GPR30 and ER， PR were mutually independent in expression of breast cancer， and they existed as independent factors. Triple-negative breast cancer patients had statistically significant difference in GPR30 expression rate as 78.26% comparing with ER（+） patients （P<0.05）. Conclusion GPR30 is a biology marker in predicting prognosis of triple-negative breast cancer， and it plays an important role in endocrinotherapy of triple-negative breast cancer.

【Key words】 G protein-coupled receptor 30； Endocrinotherapy； Triple-negative breast cancer

三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer， TNBC）占乳腺癌的15%～20%， 病死率是ER陽性患者的2倍， 三陰性乳腺癌不表達ER、PR以及人表皮生長因子受體-2（HER-2）， 缺乏內(nèi)分泌治療、靶向治療的指征， 術(shù)后以化療為主要治療手段， 與非三陰性類型的乳腺癌比較， 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高， 總體生存率低[1]。G蛋白耦聯(lián)受體30（G protein-coupled receptor 30， GPR30）屬于G蛋白耦聯(lián)受體家族， 是一種膜性結(jié)合性雌激素受體， 參與乳腺癌細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等行為。2013年有報道GPR30和三陰性乳腺癌高度相關(guān)， 與高復(fù)發(fā)率有關(guān)[2]。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 本研究收集本院2005～2015年病理診斷為乳腺癌的178例患者病理標(biāo)本， 平均隨訪時間48個月， 其中ER（+）患者96例、 ER（-）患者82例， PR（+）90例、PR（-）88例， 其中三陰性患者46例。

1. 2 實驗方法 取178例患者病理標(biāo)本石蠟切片進行常規(guī)脫蠟、水洗后抗原修復(fù)， 用3%的H2O2封閉15 min， PBS漂洗后用正常山羊血清封閉30 min， 室溫孵育1 h， PBS漂洗， 用硫酸鎳銨顯色5 min， 酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片， 空白對照用PBS取代一抗。在解剖鏡下選取免疫陽性區(qū)域， 放入2.5%戊二醛于4℃固定2 h， PBS漂洗， 1%鋨酸后固定， 撈于有支持膜的200目鎳網(wǎng)上， 醋酸雙氧鈾-枸櫞酸鉛染色， 每組免疫組化染色切片選取15張， 顯微鏡觀察。

1. 3 評分標(biāo)準(zhǔn) 參照ER免疫組化評分系統(tǒng)， 每張切片選取5個高倍視野進行記數(shù)， 陽性細胞的百分率（A）：<1%為1分；1%～10% 為2分；11%～33% 為3分；34%～66% 為4分；67%～100%為 5分。染色程度（B）：全部細胞陰性為0分；染色細胞弱陽性為1分；中等陽性為2分；強陽性為3分；（A）+（B）總和5～8分， 為抗原表達陽性， 否則為陰性。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

ER（+）患者GPR30表達率61.46%與ER（-）患者表達率60.98%比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；PR（+）患者GPR30表達率61.11%與PR（-）患者表達率59.09%比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；GPR30與ER、PR在乳腺癌患者中的表達是相互獨立的， 作為獨立因素存在。三陰性乳腺癌患者GPR30表達率78.26%與ER（+）患者比較， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P<0.05）。見表1。

3 討論

三陰性乳腺癌是高度異質(zhì)性乳腺癌亞型， 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高， 目前欠缺有效的輔助治療手段， 僅有的全身細胞毒性化療難以取得滿意的效果， 治療手段有限[3]。本研究中GPR30在三陰性乳腺癌表達異常升高， 是乳腺癌預(yù)后不佳的生物指標(biāo)， 也提示這種獨立作用的雌激素受體很有可能在三陰性乳腺癌患者的不良預(yù)后中扮演重要角色[4]。

研究表明雌激素和抗雌激素藥物[三苯氧胺（TAM）等] 可活化GPR30信號發(fā)揮效應(yīng)， 與激活EGFR/ERK轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)[5-8]。有臨床試驗應(yīng)用雌激素處理細胞周期中位于S期的DNA量明顯高于對照組， 增殖能力明顯提高， 其促生長效應(yīng)被GPR30特異性拮抗劑G15阻斷， 說明雌激素可活化GPR30促進三陰性乳腺癌細胞系的增殖[9-13]。研究證明EGFR特異性抑制劑AG1478、GPR30特異性抑制劑G15， ERK特異性抑制劑U0126靶向抑制GPER/EGFR/ERK信號通路， 可以降低三陰性乳腺癌轉(zhuǎn)移、侵襲能力[5， 14]， 已有腫瘤相關(guān)成纖維細胞中結(jié)締組織生長因子及 MMPs 等分子的藥物進入Ⅲ期臨床試驗， 有待于進一步臨床研究。

綜上所述， GPR30是預(yù)測三陰性乳腺癌患者預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物， GPR30在三陰性乳腺癌內(nèi)分泌治療中具有重要作用。

參考文獻

[1] Girgert R， Emons G， Griindker C. Inactivation of GPR 30 reduces growth of triple-negative breast cancer cells： possible application in targeted therapy. Breast Cancer Res Treat， 2012， 134（1）：199-205.

[2] Steiman J， Peralta EA， Louis S， et al. Biology of the estrogen receptor， GPR30， in triple negative breast cancer. Am J Surg， 2013， 206（5）：698-703.

[3] Wei W， Chen ZJ， Zhang KS， et al. The activation of protein-coupled receptor 30 （GPR30） inhibits proliferation of estrogen receptor-negative breast cancet cells in vitro and in vivo. Cell Death Dis， 2014， 2（5）：e1428.

[4] Catalano S， Giordano C， Panza S， et al. Tamoxifen through GPER upregulates aromatase expression： a novel mechanism sustaining tamoxifen-resistant breast cancer cell growth. Breast Cancer Res Treat， 2014， 146（2）：273-285.

[5] Elbaz M， Nasser MW， Ravi J， et al. Modulation of the tumor microenvironment and inhibition of EGF/EGFR pathway： novel anti-tumor mechanisms of Cannabidiol in breast cancer. Mol Oncol， 2015， 9（4）：906-919.

[6] 余騰驊， 羅浩軍， 嚴(yán)玉釗， 等. GPR30介導(dǎo)雌激素對三陰性乳腺癌MDA-MB-468細胞系增殖的影響. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報， 2014， 36（14）：1467-1471.

[7] 余騰驊， 王智亮， 趙晨暉， 等. 雌激素激活GPR30/ERK通路促進三陰性乳腺癌MDA-MB-468細胞遷移及侵襲. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報， 2014， 36（20）：2077-2082.

[8] 趙晨暉， 余騰驊， 涂剛. 雌激素受體GPER在乳腺癌中的研究現(xiàn)狀. 腫瘤防治研究， 2015， 42（12）：1248-1252.

[9] 朱克鵬， 楊光倫， 涂剛. GPR30在乳腺癌內(nèi)分泌治療耐受中的作用研究. 中國癌癥雜志， 2011， 21（8）：648-653.

[10] 朱克鵬. GPR30在原發(fā)及復(fù)發(fā)性乳腺癌中的表達和意義. 重慶醫(yī)科大學(xué)， 2012.

[11] 楊玉華， 婁丹， 呂小梅. 乳腺癌中雌激素受體GPR30與ER、PR及HER2的相關(guān)性. 實用醫(yī)學(xué)雜志， 2015（17）：2854-2856.

[12] 羅浩軍. GPR30、CTGF及FN在乳腺癌中的表達與意義. 重慶醫(yī)科大學(xué)， 2010.

[13] 阮姝琴. 重組人Heregulin-β1上調(diào)GPR30表達及對乳腺癌生物學(xué)行為影響的研究. 浙江大學(xué)， 2012.

[14] 陳花， 馬海蓉. 乳腺癌治療新靶點GPER1研究進展. 中華腫瘤防治雜志， 2014， 21（12）：959-964.

[收稿日期：2017-02-15]