侯 巍 陽(yáng)愛國(guó) 郭 莉 莫 西

（四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川成都 610041）

淺談犬庫(kù)布病毒及檢測(cè)方法

侯 巍 陽(yáng)愛國(guó) 郭 莉 莫 西

（四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川成都 610041）

犬庫(kù)布病毒（Canine Kobuviruses，CaKoV）屬于小RN A病毒科（Picornaviridae）A型愛知病毒（Aichivirus A）屬。研究表明犬庫(kù)布病毒（Canine Kobuviruses）與犬病毒性腹瀉存在一定相關(guān)，2011年該病毒第一次在美國(guó)從患急性胃腸炎的犬中檢測(cè)出[1]，而后中國(guó)[2]、非洲[3]、意大利[4]、英國(guó)[5]等國(guó)家相繼被發(fā)現(xiàn)。

庫(kù)布病毒；檢測(cè)

1 犬庫(kù)布病毒的簡(jiǎn)史

1.1 犬庫(kù)布病毒的發(fā)現(xiàn)及其分類

庫(kù)布病毒屬于小RNA病毒科中新增加的屬。2011年，從美國(guó)患有急性胃腸炎的犬中檢測(cè)出第一株犬庫(kù)布病毒。根據(jù)基因序列分析，其距離AiV基因A和B型，因此研究人員對(duì)這些病毒命名為犬科庫(kù)布病毒（CaKoV）[1]。研究證明[2]- [7]，庫(kù)布病毒通過被污染的食物或水糞-口途徑感染，并且它們?cè)谌撕蛣?dòng)物[8][9]的胃腸炎中具有潛在的致病作用[10]。

根據(jù)基因序列分析顯示，CaKoV在遺傳上接近小鼠庫(kù)布病毒M-5（在氨基酸水平同源性84.0%）[4]與 AiV（在氨基酸水平同源性達(dá)80.0%）[11]。根據(jù)國(guó)際病毒分類學(xué)委員會(huì)（ICTV）制定的標(biāo)準(zhǔn)（小RNA病毒科內(nèi)，如果在P1、P2和P3區(qū)域氨基酸具有40%、40%和50%同源性，就可以歸為一屬），因此CaKoV可以被認(rèn)為是來自鼠科布病毒（MuKoV 1型）和人類AiV（AiV1型）的不同基因型（CaKoV 1型），同屬愛知A型[12]。

1.2 犬庫(kù)布病毒的流行

犬庫(kù)布病毒的國(guó)內(nèi)外流行情況見表1

表1 犬庫(kù)布病毒流行情況表

2 犬庫(kù)布病毒基因結(jié)構(gòu)

犬庫(kù)布病毒是一種極小的球形病毒，直徑約為 30nm，二十面體、無囊膜的單股正鏈 RNA 病毒。與所有的微RNA 病毒一樣，CaKoV成員具有相似的基因組結(jié)構(gòu)：包括 5- UTR、一個(gè)大的開放閱讀框（open reading frame，ORF）、3-UTR以及Poly（A）tail。ORF編碼的蛋白依次為L(zhǎng)（非結(jié)構(gòu)蛋白）、VP0、VP3和VP1（結(jié)構(gòu)蛋白）、2A-2B-2C（非結(jié)構(gòu)蛋白）和3A-3B-3C-3D（非結(jié)構(gòu)蛋白）。

根據(jù)Genbank載錄的全基因序列分析中國(guó)株CH-1，韓國(guó)株12D049，英國(guó)株UK003， 美國(guó)株US-PC0082。中國(guó)CH-1株長(zhǎng)度為8216bp，韓國(guó)12D049株長(zhǎng)度為8292bp，英國(guó)UK003株的長(zhǎng)度為8213bp。

3 病毒的鑒定

3.1 病毒的培養(yǎng)

病毒分離培養(yǎng)是鑒定病原行之有效的方法，AiV可以在Vero或BS-C-1細(xì)胞上增殖并能觀察到明顯的細(xì)胞病變[13]。

3.2 病毒的檢測(cè)

3.2.1 免疫學(xué)檢測(cè)方法

2016年日本學(xué)者通過酶聯(lián)免疫吸附的方法在犬的糞便中成功檢測(cè)到AiV[14]。此外，報(bào)道稱，有研究學(xué)者在198只狗血清樣品和97只貓血清樣品中檢測(cè)到愛知病毒IgG抗體的，分別為74只（37.4%）的67只（69.9%），檢測(cè)到的抗體最高滴度為1：2000。

3.2.2 分子生物技術(shù)

由于PCR 方法具有敏感、快速、特異及可重復(fù)性的優(yōu)點(diǎn)，因此對(duì)于CaKoV的檢測(cè)大都采用了RT-PCR 的方法。由于CaKoV的致病性及其機(jī)制尚不清楚，臨床診斷也無法進(jìn)行，基因檢測(cè)可能是在未來很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)的主要檢測(cè)方法見表2。

表2 檢測(cè)犬庫(kù)布病毒方法

[1] Kapoor A，Simmonds P，Dubovi E J，et al. Characterization of a canine homolog of human Aichivirus[J].Journal of Virology，2011，85 （21）：11520-11525.

[2] Li C，Wei S，Guo D，et al. Prevalence and phylogenetic analysis of canine kobuviruses in diarrhoetic dogs in northeast China[J].Journal of Veterinary Medical Science，2015，78（1）：70-74.

[3] Olarte-Castillo X A，Heeger F，Mazzoni C J，et al.Molecular characterization of canine kobuvirus in wild carnivores and the domestic dog in Africa[J].Virology，2015，477（3）：89-97.

[4] Di M B，Di F E，Ceci C，et al. Canine kobuviruses in diarrhoeic dogs in Italy[J].Veterinary Microbiology，2013，166（1）：246-249.

[5] Carmonavicente N，Buesa J，Brown P A，et al. Phylogeny and prevalence of kobuviruses in dogs and cats in the UK[J].VeterinaryMicrobiology，2013，164（3-4）：246-252.

[6] Soma T，Matsubayashi M，Sasai K. Detection of kobuvirus RNA in Japanese domestic dogs[J]. Journal of Veterinary Medical Science，2016，78（11）：117.

[7] Choi S，Lim S I，Yong K K，et al. Phylogenetic Analysis of Astrovirus and Kobuvirus in Korean Dogs[J].Journal of Veterinary Medical Science，2014，76（3）：1141-1145.

[8] Khamrin P，Maneekarn N，Okitsu S，et al. Epidemiology of human and animal kobuviruses[J].VirusDisease，2014，25（2）：195-200.

[9] Felix D J，Sigrid B，Souza L L K D，et al. Aichi virus shedding in high concentrations in patients with acute diarrhea[J].Emerging Infectious Diseases，2011，17（8）：1544-1548.

[10] Ambert-Balay K，Lorrot M，Bon F，et al. Prevalence and genetic diversity of Aichi virus strains in stool samples from community and hospitalized patients[J].Journal of Clinical Microbiology，2008，46 （4）：1252-1258.

[11] Phan TG，Kapusinszky B，Wang C，et al. The fecal viral flora of wild rodents[J].PLoS Pathog，2011，（7）：218.

[12] Knowles N J，Hovi T，Hyypi? T，et al. Virus Taxonomy，Ninth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses：Picornaviridae[J]. 2012，（5）：855-881.

[13] Y amashita T，Kobayashi S，Sakae K，et al. Isolation of cytopathic small round viruses with BS-C-1 cells from patients with gastroenteritis[J].The Journal of Infectious Diseases，1991，164 （5）：954-957.

[14] Wang C，Lan D，Cui L，et al. Molecular characterization of a porcine kobuvirus strain in China.[J].Archives of Virology，2012，157（3）：573-578.