徐建平 趙潔婷 葉 偉 朱東波 孫 曉 宋蓉蓉 許春偉 陳燕坪

HGF、c-MET及VEGF在非小細胞肺癌中的表達和意義

徐建平 趙潔婷 葉 偉 朱東波 孫 曉 宋蓉蓉 許春偉 陳燕坪

目的 探討肝細胞生長因子(HGF)、肝細胞生長因子受體(c-MET)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達與非小細胞肺癌臨床病理的關系。方法 將組織標本分為原發(fā)灶組(357例)和正常對照組(68例)，分別采用免疫組織化學方法檢測各組標本中HGF、c-MET及VEGF的表達情況。結果 非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中HGF表達陽性率分別為51.26%(183/357)和10.29%(7/68)，兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中c-MET表達陽性率分別為60.22%(215/357)和14.71%(10/68)，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中VEGF表達陽性率分別為45.38%(162/357)和11.76%(8/68)，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；HGF陽性表達率與腫瘤組織分化程度及臨床分期無關(P>0.05)，c-MET及VEGF陽性表達率與腫瘤組織分化程度及臨床分期相關(P<0.05)。結論 HGF和c-MET、VEGF可能共同參與了非小細胞肺癌的發(fā)生和發(fā)展，c-MET和VEGF或可作為預測非小細胞肺癌患者預后的標記物。

非小細胞肺癌；HGF；c-MET；VEGF

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:528～530)

肺腺癌同肺鱗癌共同隸屬于非小細胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)，發(fā)病率相對鱗癌偏低，一般較晚發(fā)生淋巴結轉移。肝細胞生長因子(HGF)是一段由間質細胞分泌的具有促分裂、分化及血管生成作用的多肽，也已證明在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[1]。通過與其受體c-MET蛋白結合，HGF才能發(fā)揮其生理病理作用。c-MET蛋白由c-MET基因編碼，在多種惡性腫瘤中存在異常調節(jié)[2]。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)可以引發(fā)血管內(nèi)皮細胞的增值和遷移，在功能上與HGF及c-MET蛋白在功能上類似。本研究采用免疫組化對非小細胞肺癌組織中的HGF、c-MET蛋白和VEGF的表達進行檢測，探討3者表達程度和臨床病理特征之間的關系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集2012年6月到2015年8月安徽省胸科醫(yī)院原發(fā)性非小細胞肺癌患者原發(fā)灶組織標本357例和正常肺組織68例。標本均經(jīng)過石蠟固定，并經(jīng)過病理科診斷確診。其中原發(fā)灶和正常組織中男性分別為142例和31例，女性分別為215例和37例，男女比例分別為0.66∶1和0.84∶1。年齡23～96歲，平均年齡為59歲。病理類型：鱗癌133例，腺癌224例。病理分期：Ⅰ、Ⅱ期164例，Ⅲ、Ⅳ期193例；病理分級：高分化157例，中分化116例，低分化或未分化84例。分期參照2009年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)和國際肺癌研究會(IASLC)公布的第7版肺癌國際分期標準。

1.2 方法

免疫組化染色結果判斷標準：所有標本常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，60 ℃溫箱烘烤90 min。采用EnVision二步法，實驗過程嚴格按照試劑盒說明書進行，高溫高壓抗原修復，DAB顯色，PBS代替一抗為陰性對照，已知陽性的肺組織為陽性對照。HGF、c-MET和VEGF陽性定位于細胞質，免疫組化判斷標準：HGF和VEGF主要分布于腫瘤細胞胞質，在間質細胞有少量分布，部分血管內(nèi)皮細胞也可見著色；c-MET僅分布于腫瘤細胞胞質和胞膜中，只有少數(shù)正常肺組織組化可見少量著色，400倍鏡下記陽性細胞較多的5個視野的陽性細胞數(shù)，<5%或無著色為陰性，≥5%為陽性[3]。

1.3 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 19.0進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，兩變量間的關系用Pearson相關法進行統(tǒng)計，檢驗水準定為α=0.05，并設定P值為雙側分布，P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中HGF、c-MET和VEGF的表達

非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中HGF表達陽性率分別為51.26%(183/357)和10.29%(7/68)，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中c-MET表達陽性率分別為60.22%(215/357)和14.71%(10/68)，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中VEGF表達陽性率分別為45.38%(162/357)和11.76%(8/68)，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 HGF表達與非小細胞肺癌臨床病理資料的關系

HGF在鱗癌中的陽性率為40.60%(54/133)，在腺癌中的陽性率為57.59%(129/224)，兩者無顯著性差異(P>0.05)，HGF與非小細胞肺癌的病理類型、分化程度及病理分期無相關性，見表1～表3。

2.3 c-MET表達與非小細胞肺癌臨床病理資料的關系

c-MET在鱗癌中的陽性率為38.35%(51/133)，在腺癌中的陽性率為73.21%(164/224)，兩者有顯著性差異(P<0.05)；c-MET表達與其病理分期分化程度有關(P<0.05)，見表1～表3。

2.4 VEGF表達與非小細胞肺癌臨床病理資料的關系

VEGF在鱗癌中的陽性率為49.62%(66/133)，在腺癌中的陽性率為42.86%(96/224)，兩者無顯著性差異(P>0.05)；VEGF表達與其病理分期及即分化程度有關(P<0.05)，VEGF表達與其組織學類型無關見表1～表3。

表1 HGF、c-MET及VEGF表達與肺癌組織學 類型的關系(例，%)

表2 HGF、c-MET和VEGF表達與肺癌 病理分期的關系(例，%)

表3 HGF、c-MET和VEGF表達與肺癌 分化程度的關系(例，%)

3 討論

肺癌是全球第一大癌癥，在我國肺癌是發(fā)病率和死亡絕對數(shù)最高的惡性腫瘤，肺癌的發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)是其他所有惡性腫瘤的總和，按組織亞型分類肺癌患者中有85%以上為非小細胞肺癌[4-8]。肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)基因約有70 kb，包含18個外顯子17 個內(nèi)含子，定位于7號染色體的q21.1，是目前已知的生物學活性最廣泛的細胞因子，是由間質源性細胞如成纖維細胞、平滑肌細胞等產(chǎn)生的多效生長因子。國內(nèi)外的研究均證實HGF 可激活c-MET/HGF受體酪氨酸激酶，增強HGF/c-MET系統(tǒng)的信號轉導，其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中促增殖、侵襲和轉移的生物學效應已被確認[9-13]，c-MET作為其唯一的酪氨酸激酶受體,活化后可激活下游RAS-MAPK/ERK、PI3K-PKB/AKT等信號通路,參與誘導多種上皮細胞有絲分裂、存活增加、運動能力增強、向胞外基質侵襲、腺管狀形態(tài)發(fā)生等,在胚胎發(fā)育、上皮生長、組織分化、損傷修復等過程中發(fā)揮重要的調控作用[14]。許多惡性腫瘤都伴有c-MET 基因的擴增和過度表達。本研究中非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中HGF表達的陽性率分別為51.26%(183/357)和10.29%(7/68)，兩組之間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中c-MET表達的陽性率分別為60.22%(215/357)和14.71%(10/68)，兩組之間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；HGF在鱗癌中的陽性率為40.60%(54/133)，在腺癌中的陽性率為57.59%(129/224)，兩者無顯著性差異(P>0.05)；HGF在不同病理學分期及不同組織病理學分級(即分化程度)的非小細胞肺癌組織當中差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；c-MET在鱗癌中的陽性率為38.35%(51/133)，在腺癌中的陽性率為73.21%(164/224)，兩者有顯著性差異(P<0.05)；c-MET在不同病理學分期及不同組織病理學分級(即分化程度)的非小細胞肺癌組織當中差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，分級分期越晚，分化越差，其陽性率越有升高趨勢。

VEGF是血管內(nèi)皮細胞特異性的肝素結合生長因子(heparin-binding growth factor)，可在體內(nèi)誘導血管新生(induce angiogenesis in vivo)，是主要的血管生成調節(jié)因子之一。VEGF是高度保守的同源二聚體糖蛋白。二條分子量各為24kDa的單鏈以二硫鍵組成二聚體。VEGF分解的單體無活性，去除N 2糖基對生物效應無影響，但可能在細胞分泌中起作用。由于mRNA不同的剪切方式，產(chǎn)生出分別VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF185、VEGF206等至少5種蛋白形式，其中VEGF121、VEGF145、VEGF165是分泌型可溶性蛋白，能直接作用于血管內(nèi)皮細胞促進血管內(nèi)皮細胞增殖，增加血管通透性，與腫瘤轉移、侵襲以及腫瘤血管生成密切相關[15]。非小細胞肺癌原發(fā)灶組織和正常組織中VEGF表達的陽性率分別為45.38%(162/357)和11.76%(8/68)，兩組之間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；VEGF在鱗癌中的陽性率為49.62%(66/133)，在腺癌中的陽性率為42.86%(96/224)，兩者無顯著性差異(P>0.05)；VEGF在不同病理學分期及不同組織病理學分級(即分化程度)的非小細胞肺癌組織當中差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，病理分期越晚，分化越低，其陽性率越有升高趨勢。綜上所述，HGF和c-MET、VEGF可能共同參與了非小細胞肺癌的發(fā)生和發(fā)展，c-MET和VEGF或可作為預測非小細胞肺癌患者預后的標記物。

[1] Zeng Q,Chen S,You Z,et al.Hepatocyte growth factor inhibits anoikis in head and neck squamous cell carcinoma cells by activation of ERK and Akt signaling independent of NF kappa B〔J〕.J Biol Chem,2002,277(28):25203-25208.

[2] Toschi L,Cappuzzo F.Clinical implications of MET gene - copy number in lung cancer〔J〕.Future Oncol,2010,6(2):239-247.

[3] 王 琳,王魯平.結直腸纖維絨毛鋸齒狀腺瘤臨床病理學及免疫組織化學的觀察〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2011,18(12):905-909.

[4] Siegel RL,Miller KD,Jemal A.Cancer statistics,2016〔J〕.CA Cancer J Clin,2016,66(1):7-30.

[5] Chen W,Zheng R,Baade PD,et al.Cancer statistics in China,2015〔J〕.CA Cancer J Clin,2016,66(2):115-132.

[6] Fang MY,Wang SY,Zheng YB,et al.Prognostic and predictive signicance of plasma hepatocyte growth factor and carcinoembryonic antigen in non-small lung cancer after surgery〔J〕.Eur Rev Med Pharmacol Sci,2014,18(3):398-403.

[7] Xu C,Wang G,Wang W,et al.Association between epidermal growth factor receptor mutations and the expression of excision repair cross-complementing protein 1 and ribonucleotide reductase subunit M1 mRNA in patients with non-small cell lung cancer〔J〕.Exp Ther Med,2015,9(03):880-884.

[8] Xu C,Wang G,Wang W,et al.Association between EML4-ALK fusion gene and thymidylate synthase mRNA expression in non-small cell lung cancer tissues〔J〕.Exp Ther Med,2015,9(06):2151-2154.

[9] Lee KH,Choi EY,Kim MK,et al.Hepatoma-derived growth factor regulates the bad-mediated apoptotic pathway and induction of vascular endothelial growth factor in stomach cancer cells〔J〕.Oncol Res,2010,19(2):67-76.

[10] Hu ZX,Geng JM,Liang DM,et al.Hepatocyte growth factor protects human embryonic stem cell derived-neural progenitors from hydrogen peroxide-induced apoptosis〔J〕.Eur J Pharmacol,2010,645 (1-3):23-31.

[11] Togo S,Sugiura H,Nelson A,et al.Hepatic growth factor (HGF) inhibits cigarette smoke extract induced apoptosis in human bronchial epithelial cells〔J〕.Exp Cell Res,2010,316(20):3501-3511.

[12] Tjin EP,Groen RW,Vogelzang I,et al.Functional analysis of HGF/MET signaling and aberrant HGF-activator expression in diffuse large B-cell lymphoma〔J〕.Blood,2006,107(2):760-768.

[13] Forte G,Minieri M,Cossa P,et al.Hepatocyte growth factor effects on mesenchymal stem cells:proliferation,migration,and differentiation〔J〕.Stem Cells,2006,24(01):23-33.

[14] Birchmeier C,Birchmeier W,Gherardi E,et al.Met,metastasis,motility and more〔J〕.Nat Rev Mol Cell Biol,2003,4(12):915-925.

[15] Nakamura T,Matsumoto K.Angiogenesis inhibitors:from laboratory to clinical application〔J〕.Biochem Biophys Res Commun,2005,333(2):289-291.

(編輯：吳小紅)

Expression and Significance of HGF,c-MET and VEGF in Non-small Cell Lung Cancer

XUJianping,ZHAOJieting,YEWei,etal.

AnhuiChestHospital,Hefei,230032

Objective To explore the expression of HGF,c-MET and VEGF in non-small cell lung cancer,and their relationship with clinical pathology.Methods The tissue specimens were divided into primary tumor group(357 cases) and normal control group(68 cases),respectively using immunohistochemical method to detect each specimen expression of HGF,c-MET and VEGF.Results There was a significant difference between primary tumor group[51.26%(183/357)]and normal control group[10.29%(7/68)]by HGF protein expression in non-small cell lung cancer(P<0.05);There was significant difference between primary tumor group[60.22%(215/357)]and normal control group[14.71%(10/68)]by c-MET protein expression in non-small cell lung cancer(P<0.05);There was a significant difference between primary tumor group[45.38%(162/357)]and normal control group[11.76%(8/68)]by VEGF protein expression in non-small cell lung cancer(P<0.05);The positive expression rate of HGF protein had nothing to do with tumor tissue differentiation degree and the staging of tumor tissue(P>0.05),and the positive expression rate of c-MET and VEGF were associated with the differentiation degree and the staging of tumor tissue(P<0.05).Conclusion The protein of HGF and c-MET and VEGF may be involved in the occurrence and development of non-small cell lung cancer,and c-MET and VEGF maybe used as markers for predicting the prognosis of patients with non-small cell lung cancer.

Non-small cell lung cancer;HGF;c-MET;VEGF

福建省自然基金青年人才創(chuàng)新項目(編號：2014J05085)

230032 安徽省胸科醫(yī)院(徐建平，趙潔婷，葉 偉，朱東波，孫 曉，宋蓉蓉)；350014 福建省腫瘤醫(yī)院(許春偉，陳燕坪)

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.04.002

R734.2

A

1001-5930(2017)04-0528-03

2016-06-17

2017-03-08)