楊 微,張 宇,楊 光,司玉霞,王彩霞,王麗新,盧北燕,李梅秀

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

ADM及VEGF-C在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織的表達①

楊 微,張 宇,楊 光,司玉霞,王彩霞,王麗新,盧北燕,李梅秀

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討腎上腺髓質(zhì)素(ADM)和血管內(nèi)皮細胞生長因子-C(VEGF-C)在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達情況及臨床意義。方法：運用免疫組化方法測量40例子宮內(nèi)膜樣腺癌病理標(biāo)本中ADM、VEGF-C的水平。結(jié)果:子宮內(nèi)膜樣腺癌組中ADM的陽性率是70%，較增生期子宮內(nèi)膜組、不典型增生組顯著增高(P<0.05)。子宮內(nèi)膜樣腺癌組中VEGF-C的陽性率是65%，較增生期子宮內(nèi)膜組、不典型增生組顯著增高(P<0.05)。子宮內(nèi)膜樣腺癌中兩種蛋白的水平同淋巴遷移聯(lián)系緊密，同分化程度無聯(lián)系。結(jié)論：ADM、VEGF-C協(xié)同促進了宮內(nèi)膜樣腺癌的演化和侵襲，對于臨床治療及判斷預(yù)后有重要價值。

子宮內(nèi)膜樣腺癌；ADM；VEGF-C；轉(zhuǎn)移

VEGF-C是一種血管通透性因子，可以強烈提高血管內(nèi)皮細胞的再生，增加微血管壁的通透能力，并能刺激淋巴管內(nèi)皮細胞增生。VEGFR-2和VEGFR-3是VEGF-C的兩種受體，前者一般散布在血管內(nèi)皮細胞，由于腫瘤組織生長迅速，造成局部環(huán)境缺氧，提高受體與VEGF-C的結(jié)合能力，從而增加腫瘤組織微血管內(nèi)皮通透性，促進腫瘤組織微血管的形成，促使腫瘤的發(fā)展與擴散。后者存在于淋巴內(nèi)皮細胞，與其結(jié)合后可以提高淋巴管通透能力，促進腫瘤細胞的淋巴遷移。ADM最初由Kitamura等[1]在人嗜鉻細胞瘤組織提取出的多肽類物質(zhì)，ADM可以通過促進腫瘤血管及淋巴管的形成，促使腫瘤細胞的生長及遷移。有報道ADM在妊娠期高血壓疾病[2]、胰腺癌[3]、腦膠質(zhì)細胞瘤[4]、嗜鉻細胞瘤細胞[5]及乳腺癌[6]中呈過表達，且乳腺癌患者血漿組織中ADM的表達與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。

1 材料和方法

1.1 實驗標(biāo)本

隨機選取佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科2012～2016年間接收的子宮內(nèi)膜樣腺癌標(biāo)本40例，年齡38～70歲，平均55.28歲，其中累及淋巴16例，無淋巴累及24例。根據(jù)分化程度分為高分化腺癌組29例，中低分化腺癌組11例，另選取增生期子宮內(nèi)膜組織20例、不典型增生子宮內(nèi)膜組織20例作為對照組。所選實驗對象術(shù)前均未實施放化療和激素治療等。

1.2 試劑

ADM、VEGF-C抗體均為兔多克隆抗體，ADM購自武漢博士德生物工程有限公司，VEGF-C購自福州邁新生物科技有限公司，DAB試劑盒選自福州邁新生物科技有限公司。

1.3 實驗方法

具體免疫組化過程嚴格按照SP試劑盒產(chǎn)品說明書進行，抗體均以0.1M的PBS緩沖液稀釋,VEGF-C工作濃度為1：100，ADM工作濃度為1:200, 高壓修復(fù)法進行抗原修復(fù)，DAB試劑顯色，中性樹膠封固 , 光鏡下觀察。

1.4 結(jié)果判定

ADM、VEGF-C均表達于胞質(zhì)或胞膜上，棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。依據(jù)染色程度進行評分：陰性無顯色(0)；弱陽性顯色為淺黃色(1)；中度陽性顯色為棕黃色(2)；強陽性顯色為深棕黃色(3)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0 統(tǒng)計軟件,進行卡方檢驗，確定P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義，二者相關(guān)性用Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 子宮內(nèi)膜樣腺癌組中ADM、VEGF-C與對照組中的水平分析

ADM在子宮內(nèi)膜樣腺癌組的陽性表達率為70%，較增生期子宮內(nèi)膜組、不典型增生組顯著增高(P<0.05)。VEGF-C在子宮內(nèi)膜樣腺癌組的陽性表達率為65%，較增生期子宮內(nèi)膜組、不典型增生組顯著增高(P<0.05)。不典型增生組ADM、VEGF-C的陽性率分別為40%、20%，對比增生期組無顯著差異(P>0.05)。見表1。

表1 ADM與VEGF-C在子宮內(nèi)膜樣腺癌組 與對照組的表達(n=20)

注：檢驗ADM、VEGF-C在各分組中表達差異的方法采用卡方檢驗。ADM組ab比較P=0.025,χ2=5;ac比較P=0.003,χ2=8.688;bc比較P=0.507,χ2=0.440。VEGF-C組ab比較P=0.001,χ2=10.8;ac比較P=0.01,χ2=6.563;bc比較P=0.465,χ2=0.533。

2.2 子宮內(nèi)膜樣腺癌中ADM、VEGF-C的水平與其參數(shù)間的關(guān)系

ADM在癌腫累及淋巴結(jié)組的陽性表達率為93.7%，較無淋巴結(jié)累及組陽性率有顯著增高(P<0.05)；高分化腺癌組中ADM的陽性率為65.5%，較中低分化腺癌組陽性率無顯著差異(P>0.05)。癌腫累及淋巴組VEGF-C的陽性率為92%，較無淋巴累及組陽性率顯著增高(P<0.05)；VEGF-C在高分化腺癌組的陽性率為72.4%，較中低分化腺癌組陽性率無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2 ADM、VEGF-C與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3ADM、VEGF-C在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的相關(guān)性分析

本研究顯示，在40例子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中ADM和VEGF-C呈一致性表達共有37例，其中同時陽性表達17例;ADM(+)而VEGF-C(-)11例;ADM(-)而VEGF-C(+)9例;兩者同時陰性表達3例。經(jīng)Spearman等級相關(guān)性分析顯示，ADM與VEGF-C表達呈正相關(guān)(P<0. 05)，表明兩者之間存在某種調(diào)控作用。見表3。

表3 ADM、VEGF-C在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的相關(guān)性分析

注：P<0.05

3 討論

子宮內(nèi)膜樣腺癌是指起源于內(nèi)膜腺體的子宮體癌，為雌激素依賴型即I型，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，侵襲及遷移是影響子宮內(nèi)膜樣腺癌生存率的主要原因，如何早期診斷，及時系統(tǒng)的治療是降低子宮內(nèi)膜樣腺癌病死率的關(guān)鍵因素。在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的過程中，微血管的形成及淋巴遷移是其重要環(huán)節(jié)。血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)及腎上腺髓質(zhì)素(ADM)可加快腫瘤微血管的形成及淋巴遷移，促進腫瘤的轉(zhuǎn)移及擴散。朱等[7]研究證實，VEGF-C是致使食管鱗癌術(shù)后生存率較低的重要因素。Hashimoto等[8]經(jīng)過RT-PCR得出，VEGF--CmRNA在子宮頸癌組織中顯著高于正常宮頸組織，且與淋巴遷移相干，提示預(yù)后較差。Nishida等采用免疫組化法測定80例卵巢癌中VEGF-C的表達，得出VEGF-C的表達與卵巢癌的浸潤密切相關(guān)，證實VEGF-C是卵巢癌發(fā)生淋巴結(jié)遷移的危險因素。ZudaireE等研究發(fā)現(xiàn)ADM可以增加腫瘤細胞VEGF的分泌，從而促進腫瘤血管形成。張等[9]在研究ADM及VEGF在肺癌在組織中表達時發(fā)現(xiàn)ADM及VEGF均高表達，ADM,VEGF通過自分泌和/或旁分泌形式協(xié)同促進和維持腫瘤細胞的生長。

本課題通過對ADM、VEGF-C在子宮內(nèi)膜樣腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，兩種蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌的侵襲、遷移等方面擁有重要意義，子宮內(nèi)膜樣腺癌的淋巴受累組ADM、VEGF-C的陽性率顯著增高，兩種蛋白的表達的不斷增加，致使本病的預(yù)后不佳。本實驗研究證實ADM、VEGF-C呈顯著正相關(guān)，在促進子宮內(nèi)膜樣腺癌的演變進程中起協(xié)同作用。

綜上所述，ADM、VEGF-C是影響子宮內(nèi)膜樣腺癌轉(zhuǎn)歸的重要因素，對于評估子宮內(nèi)膜樣腺癌的預(yù)后有指導(dǎo)意義，臨床可通過滅活兩種蛋白的基因及受體從而延緩子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)展，其二者互相作用的分子機制值得深入探討。

[1]KitamuraK,Kangawa，KawamotoM,etal.Adrenomedullin:anovelHypotensivepeptideisolatedfromhumanpheochromocytoma[J].BiochemBiophysResConunun,1993,192：553-560

[2]陳敏秀，王秀梅，劉春雨，等.血漿腎上腺髓質(zhì)素水平在妊娠期高血壓疾病患者中的影響[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2008,31(1)：7-9

[3]KelegS,KayedH,JiangX,etal.Adrenomedullinisinducedby坷poxiaandenhancespancreaticcancercellinvasion[J].IntJCancer,2007,121(1):21-32

[4]BoudouresqueF,BerthoisY,MartinPM,etal.Roleofadrenomedullininglioblastomasgrowth[J].BullCancer, 2005, 92(4):317-326

[5]BetchenSA,MusatovS,RobertsJ,etal.PTENinhibitsadrenomedullinexpressionandfunctioninbraintumorcells[J].JNeurooncol, 2006, 79(2):117-123

[6]OehlerMK,FischerDC,Orlowska-VolkM,etal.Tissueandplasmaexpressionoftheangiogenicpeptideadrenomedullininbreastcancer[J].BrJCancer, 2003, 89(10):1927-1933

[7]朱曉峰，王林，戚家峰，等.食管癌患者術(shù)前血清HCG、VEGF-C的表達及臨床意義[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2011,34(2):3-5

[8]HashimotoI,KedamaJ,SekiN,eta1.Vaseularendothelialgrowthfactor-Cexpressionanditsrelationshiptopelviclymphnodestatusininvasiveeerviealcancer[J].BrJCancer，2001, 85(1):93-97

[9]張延例，于忠和.ADM與VEGF在肺癌血漿和組織中的表達、相關(guān)性及意義[J].山西醫(yī)科大學(xué)，2010,8(28)：9-17

佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)研究類(自然類)面上項目，編號：JMSUJCMS2016-036。

楊微(1966～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。

張宇(1989～)女，黑龍江鶴崗人，在讀碩士研究生。E-mail：1172977041@qq.com。

R

B

1008-0104(2017)02-0045-02

2016-12-20)