周厚繼，鄭敏，吳良濤，萬潤，華敏，汪德生*

(1. 四川省鹽源縣職業(yè)技術中學校，四川鹽源 615700；2. 貴州大學動物疫病研究所，貴陽 550025 )

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鹽源縣養(yǎng)豬場豬圓環(huán)病毒感染情況調(diào)查與分析

周厚繼1，鄭敏2，吳良濤2，萬潤2，華敏2，汪德生2*

(1. 四川省鹽源縣職業(yè)技術中學校，四川鹽源 615700；2. 貴州大學動物疫病研究所，貴陽 550025 )

為了解鹽源縣養(yǎng)豬場豬圓環(huán)病毒病感染情況，本實驗采集養(yǎng)豬場豬血清樣本1980頭份和疑似病例組織樣本135頭份，分別采用ELISA和PCR方法進行豬圓環(huán)病毒2型抗體和核酸檢測，結(jié)果顯示：在種豬場、商品豬場和農(nóng)戶豬場中，豬圓環(huán)病毒2型抗體的陽性率分別為37.50%(15/40)、32.84%(582/1772)和29.76%(50/168)，平均為32.68% (647/1980)；在種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、育成豬和哺乳仔豬中，豬圓環(huán)病毒2型抗體的陽性率分別為37.50%(3/8)、57.03%(73/128)、29.48%(342/1160)和33.47%(229/684)；在種豬場、商品豬場和農(nóng)戶豬場疑似病例中，豬圓環(huán)病毒核酸檢出率分別為86.36%(19/22)、77.45%(79/102)和72.73%(8/11)。結(jié)果表明，鹽源縣養(yǎng)豬場已普遍存在豬圓環(huán)病毒感染，應加強該病的預防與控制。

鹽源縣；豬圓環(huán)病毒病；ELISA；PCR；調(diào)查

豬圓環(huán)病毒病(porcine circovirus diseases, PCVDs)是指由豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)感染引起的一類綜合癥候群，主要以進行性消瘦和多系統(tǒng)病理損傷為特征，包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、豬皮炎-腎病綜合癥(PDNS)、豬繁殖障礙(PRF)、豬呼吸道綜合癥(PRDC)、豬增生性壞死性肺炎(PNP)、豬壞死性淋巴結(jié)炎(PNL)、仔豬肉芽腫性腸炎(PGE)和新生仔豬先天性震顫(PCT)等，是危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要疫病之一[1-2]。

豬圓環(huán)病毒感染后能導致豬衰竭死亡，但更重要的是感染豬發(fā)生嚴重的免疫抑制，引發(fā)其他病毒(如豬藍耳病病毒、豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒等)或病原細菌(如大腸桿菌、副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌等)的繼發(fā)感染[3-5]。由于健康豬群感染豬圓環(huán)病毒后常不表現(xiàn)任何臨床癥狀，易被養(yǎng)豬場所忽視。研究資料顯示，我國大部分養(yǎng)豬場臨床健康豬群均可檢測到PCV-2血清抗體陽性，說明我國養(yǎng)豬場普遍存在豬圓環(huán)病毒感染[6-8]。但我縣養(yǎng)豬場豬圓環(huán)病毒感染情況尚未清楚。因此，筆者等于2016年3月至11月采集養(yǎng)豬場豬血清樣本和疑似病例組織樣本，采用ELISA和PCR方法開展了規(guī)模養(yǎng)豬場豬圓環(huán)病毒感染情況調(diào)查，以期為鹽源縣養(yǎng)豬場豬圓環(huán)病毒病的防控提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 豬血清樣本及組織病料 豬血清樣本計1980份，采自鹽源縣29個養(yǎng)豬場的未免疫豬圓環(huán)病毒病疫苗豬群，-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫回i組織病料(包括淋巴結(jié)、脾臟、肺臟等)計135頭份，采集鹽源縣18個養(yǎng)豬場疑似豬圓環(huán)病毒感染的發(fā)病豬，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要檢測試劑及實驗儀器 豬圓環(huán)病毒2型抗體ELISA 檢測試劑盒，購自武漢科前生物工程有限公司；DNA/ RNA提取試劑盒，購自寶生物(大連)工程有限公司；豬圓環(huán)病毒PCR 檢測試劑盒，購自北京世紀元亨動物防疫技術有限公司；其他試劑均為分析純。酶標儀，為美國Bio-Rad公司產(chǎn)品；PCR儀，為美國ABI公司產(chǎn)品。

1.3 豬圓環(huán)病毒血清抗體檢測 豬圓環(huán)病毒2型血清抗體檢測，根據(jù)武漢科前生物工程有限公司生產(chǎn)的豬圓環(huán)病毒2型抗體ELISA 檢測試劑盒說明書進行。

1.4 豬圓環(huán)病毒特異基因檢測 取保存的組織病料樣本，經(jīng)研磨后反復凍融3次，離心收集上清，采用DNA/RNA提取試劑盒提取病毒DNA，以豬圓環(huán)病毒PCR 檢測試劑盒擴增豬圓環(huán)病毒2型特異性核酸片段，經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳后，于凝膠成像系統(tǒng)觀察并記錄結(jié)果。

1.5 檢測數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 采用SPSS 19.0軟件對所測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié) 果

2.1 不同類型養(yǎng)豬場豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測結(jié)果

采用ELISA檢測試劑盒對采集自不同類型養(yǎng)豬場1980份豬血清樣本進行豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測，結(jié)果如表1所示。

表1 不同類型養(yǎng)豬場豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測結(jié)果Tab 1 Detection of porcine circovirus Type 2 antibody in pig farms of different types

不同類型養(yǎng)豬場均可檢出豬圓環(huán)病毒2型抗體，抗體陽性率為32.68%(647/1980)，其中種豬場、商品豬場和農(nóng)戶豬場的抗體陽性率分別為37.50%(15/40)、32.84%(582/1772)和29.76%(50/168)。由此可見，種豬場豬圓環(huán)病毒2型抗體陽性率最高，應加強種豬場豬圓環(huán)病毒病預防控制，從源頭上消除該病感染。

2.2 不同生長階段豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測結(jié)果

采用ELISA檢測試劑盒對采集自不同生長階段豬群1980份血清樣本進行豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測，結(jié)果如表2所示。

表2 不同生長階段豬群豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測結(jié)果Tab 2 Detection of porcine circovirus Type 2 antibodies at different growth stage pigs

不同生長階段豬群均可檢出豬圓環(huán)病毒2型抗體，抗體陽性率為32.68%(647/1980)，其中種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、育成豬和哺乳仔豬的抗體陽性率分別為37.50%(3/8)、57.03%(73/128)、29.48%(342/1160)和33.47%(229/684)。由此可見，在不同生長階段豬群中經(jīng)產(chǎn)母豬的豬圓環(huán)病毒2型抗體陽性率最高，因此應加強經(jīng)產(chǎn)母豬豬圓環(huán)病毒病的預防控制，以減少豬圓環(huán)病毒的垂直傳播與水平傳播。

2.3 養(yǎng)豬場豬圓環(huán)病毒2型核酸檢測結(jié)果 采用PCR檢測試劑盒對采集自不同類型養(yǎng)豬場135頭份疑似病例組織樣本進行豬圓環(huán)病毒2型核酸檢測，結(jié)果如表3所示。

表3 養(yǎng)豬場豬群豬圓環(huán)病毒2型核酸檢測結(jié)果Tab 3 Detection of porcine circovirus Type 2 nucleic acid in pig farms

不同類型養(yǎng)豬場疑似病例均可檢出豬圓環(huán)病毒2型核酸，檢出率為78.52%(106/135)，其中種豬場、商品豬場和農(nóng)戶豬場的檢出率分別為86.36%(19/22)、77.45%(79/102)和72.73%(8/11)。由此可見，鹽源縣養(yǎng)豬場中已普遍存在豬圓環(huán)病毒病感染，應得到足夠的重視。

3 討論與結(jié)論

豬圓環(huán)病毒病是目前危害養(yǎng)豬場健康發(fā)展的重要疫病之一，其中豬圓環(huán)病毒2型在世界范圍內(nèi)廣泛分布并且在豬群中存在至少有50多年[9]，但由于豬圓環(huán)病毒病單獨感染導致豬只大批死亡現(xiàn)象較為少見，且感染后表現(xiàn)明顯臨床癥狀的不到20%，因此很多養(yǎng)豬場對豬圓環(huán)病毒病不夠重視。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，鹽源縣養(yǎng)豬場未免疫豬群中豬圓環(huán)病毒血清抗體的陽性率為32.68%(647/1980)，且不同類型養(yǎng)豬場不同生長階段豬群均存在不同程度的血清抗體陽性率；在受檢豬場的疑似病例組織樣本中，豬圓環(huán)病毒核酸檢出率為78.52%(106/135)。這些結(jié)果說明，鹽源縣養(yǎng)豬場已普遍存在豬圓環(huán)病毒感染，應當引起養(yǎng)豬場的高度重視。

針對豬圓環(huán)病毒病廣泛的流行勢態(tài)和嚴重的危害狀況，世界各個國家都開展了PCV-2疫苗的研制工作，如德國勃林英格公司PCV-2亞單位疫苗、荷蘭英特威公司PCV-2滅活疫苗、美國富道公司Suvaxvn PCV-1/PCV-2重組滅活疫苗、法國梅里亞公司CIRCOVAC?PCV-2滅活疫苗以及我國洛陽普萊柯生物工程有限公司的豬圓環(huán)病毒疫苗、上海海利生物藥品有限公司的海利圓環(huán)病毒疫苗(圓畢凈)和哈爾濱獸醫(yī)研究所的PCV-2滅活疫苗等[10-12]。通過臨床應用表明，疫苗免疫后能使豬群死亡率降低6%～7%，同時能使仔豬在5周齡內(nèi)有效地抵御PCV-2的感染。但僅靠疫苗接種是不能控制豬圓環(huán)病毒病的發(fā)生與流行，必須采取有效的綜合防控措施，包括：(1) 制定科學免疫程序，提高豬群抗病能力。疫苗接種是控制豬圓環(huán)病毒病的有效方法，建議的免疫程序是：仔豬在5周齡和7周齡各免疫一次(若是母豬未免，則提前至2周齡和4周齡)；后備母豬和青年公豬配種前免疫2次，間隔2周后再免疫1次；懷孕母豬在懷孕第10周和12周各免疫1次；經(jīng)產(chǎn)母豬和公豬間隔2周各免疫1次[13]。(2) 加強豬群飼養(yǎng)管理，減少應激因素刺激。改善飼養(yǎng)環(huán)境，減少應激因素，包括：嚴格引種檢疫，實行全進全出制度；科學飼養(yǎng)密度，嚴禁不同大小/批次豬只混養(yǎng)；注意保溫和通風，禁止飼喂霉變飼料；定期滅鼠與殺蚊，無害化處理污物；保持圈舍清潔衛(wèi)生，全面落實消毒制度；保證仔豬及時吸吮初乳，提高仔豬抗病力等。(3) 定期開展疫情監(jiān)測，及時淘汰患病豬只。嚴格疫病監(jiān)測制度是保障養(yǎng)豬場健康發(fā)展的有力措施，一般要求：每季度開展1次豬圓環(huán)病毒2型血清抗體檢測，每半年進行1次豬圓環(huán)病毒2型病原檢查，特別是公豬精液病原檢查；及時挑出弱豬、病豬，及時隔離與消毒，淘汰隱性感染的公豬和母豬。(4) 采取合理藥物預防，控制豬群繼發(fā)感染。豬圓環(huán)病毒病是一種免疫抑制性疾病，在平時的飼養(yǎng)管理中可以選用既有免疫增強和免疫調(diào)節(jié)功能、又有抗病毒/抗細菌/抗應激作用的細胞因子制劑和中草藥制劑及某些化學物質(zhì)，以提高豬群免疫抵抗力，防止豬藍耳病病毒、豬鏈球菌、豬副嗜血桿菌、豬肺炎支原體等病原的繼發(fā)感染。

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(編輯：李文平)

Investigation and Analysis of Porcine Circovirus Infection in Pig Farms of Yanyuan County

ZHOU Hou-ji1, ZHENG Min2, WU Liang-tao2, WAN Run2, HUA Min2, WANG De-sheng2*

(1. Vocational Technical Middle School of Yanyuan County, Sichuan Yanyuan, 615700, China;2. Institute of Animal Diseases, Guizhou University, Guiyang, 550025, China)

WANG De-sheng, E-mail:zjqzsb110513@163.com

To understand the infection situation of porcine circovirus disease in Yanyuan pig farms, 1980 samples of serum and 135 samples of suspected cases were collected and detected by ELISA and PCR respectively. The results showed that the positive rate of Porcine circovirus type 2 antibody were respectively 37.50% (15/40), 32.84% (582/1772) and 29.76% (50/168) in breeding, commercial and scattered farms, with an average of 32.68% (647/1980). The positive rates of antibody were respectively 37.50% (3/8), 57.03% (73/128), 29.48% (342/1160) and 33.47% (229/684) in the boars, the multiparous sows, the breeding pigs and the suckling piglets. Among the swine breeding farms, commercial farms and scattered farms, the detection rates of porcine circovirus in suspected cases were respectively 86.36% (19/22), 77.45% (79/102) and 72.73% (8/11). These results suggested that the porcine circovirus infection have been prevalent in pig farms of Yanyuan County, should strengthen for prevention and control of this disease.

Yanyuan courty; porcine circovirus disease; ELISA; PCR; investigation

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.5.03

周厚繼，學士，中教高級教師，從事畜牧獸醫(yī)方面教學與科研工作。

汪德生。E-mail：zjqzsb110513@163.com

2017-01-13

A

1002-1280 (2017) 05-0012-04

S852.65