陳 烈 劉 霖王智超 張繼龍 朱夢莉

（湖北省武漢市中西結(jié)合醫(yī)院，湖北 武漢 430022）

·研究報(bào)告·

參附注射液聯(lián)合去甲腎上腺素對膿毒癥休克大鼠sCD163、丙二醛、超氧化物歧化酶的影響*

陳 烈 劉 霖△王智超 張繼龍 朱夢莉

（湖北省武漢市中西結(jié)合醫(yī)院，湖北 武漢 430022）

目的 觀察參附注射液聯(lián)合去甲腎上腺素對內(nèi)毒素誘導(dǎo)的膿毒癥休克大鼠sCD163、丙二醛、超氧化物歧化酶的影響，探討參附注射液對膿毒癥休克的可能作用機(jī)制。方法 SD大鼠60只，制作膿毒癥休克大鼠模型，觀察給予藥物治療后大鼠血清sCD163、丙二醛、超氧化物歧化酶的變化。結(jié)果 空白組給藥后1、6、18 h sCD163含量與給藥前比較變化不明顯（均P＞0.05）。模型組1、6、18 h sCD163含量與給藥前比較，均升高（均P＜0.05）。西藥組、參附組、西藥加參附組sCD163含量給藥后與給藥前比較，均下降（均P＜0.05）。各組給藥后sCD163含量與模型組給藥后同期比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （均P＜0.05）。西藥加參附組給藥后sCD163含量與西藥組、參附組兩組同期比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。造模后模型組、西藥組、參附組、西藥加參附組超氧化物歧化酶含量與空白對照組比較明顯下降（均P＜0.05）；丙二醛含量則均明顯升高（均P＜0.05）。西藥組、參附組、西藥加參附組給藥后18 h超氧化物歧化酶含量與模型組同期比較均升高（均P＜0.05）；而丙二醛含量與模型組同期比較均下降（均P＜0.05）。且西藥加參附組的超氧化物歧化酶含量高于同期單純西藥組、參附組（均P＜0.05）；而丙二醛含量則低于同期單純西藥組、參附組（均P＜0.05）。結(jié)論參附注射液對膿毒癥休克大鼠具有抗氧化作用，sCD163可作為膿毒癥的診斷指標(biāo)及療效評價(jià)指標(biāo)。

膿毒癥休克 參附注射液 sCD163 丙二醛 超氧化物歧化酶

膿毒癥是由于病原微生物釋放大量內(nèi)毒素所致的全身炎性反應(yīng)綜合征，如治療不及時(shí)，可能發(fā)展為膿毒癥休克、多器官功能障礙（MODS）。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，約40%重癥患者合并有膿毒血癥，其死亡率高達(dá)36%，已成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾?。?］。研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥中氧化應(yīng)激反應(yīng)與多臟器功能衰竭密切相關(guān)。近幾年國內(nèi)外學(xué)者開始應(yīng)用抗氧化劑治療膿毒癥，并將其視為最有應(yīng)用前景的治療方法之一。本研究通過觀察參附注射液對膿毒癥大鼠sCD163、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量變化，進(jìn)一步探討參附注射液的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供相關(guān)理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 SD大鼠60只，體質(zhì)量（250±10）g，由武漢尚合生物有限公司提供（編號13900021）。

1.2 試驗(yàn)用藥及試劑 參附注射液（四川雅安三九藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號111232）。去甲腎上腺素（批號141204）。脂多糖（LPS）由上海晶優(yōu)生物科技有限公司提供。留取的血清標(biāo)本應(yīng)用于sCD163的檢測（Elisa大鼠試劑盒在武漢新啟迪科技有限公司購買）。采用黃嘌呤氧化酶法檢測血清中SOD活性；硫代巴比妥酸顯色法（TBA法）檢測血清中MDA含量。

1.3 造模方法 60只SD大鼠以戊二醛（劑量0.6 mL/ 100 g）腹腔注射麻醉，尾靜脈注射LPS 0.5 mg/kg，并將右頸動脈插管與多導(dǎo)聯(lián)生理記錄儀連接，記錄MAP、心率，當(dāng)MAP下降至基礎(chǔ)動脈壓的20%～30%提示造模成功。健康大鼠復(fù)制膿毒癥休克模型過程中，有4只大鼠意外死亡，6只大鼠平均動脈壓未達(dá)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)而被淘汰。剩余50只大鼠參與實(shí)驗(yàn)。

1.4 分組及給藥 實(shí)驗(yàn)大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對照組、模型組、西藥組、參附組、西藥加參附組5組，每組10只?？瞻讓φ战M即健康大鼠，不造模。模型組造模后，大鼠尾靜脈注射參附組同劑量0.9%氯化鈉注射液。西藥組造模后，大鼠尾靜脈注射去甲腎上腺素劑量為［0.1～0.2 μg/（kg·min）］。參附組造模后，大鼠尾靜脈注射參附注射液1.5 mL/kg。西藥加參附組造模后，大鼠尾靜脈注射去甲腎上腺素加參附注射液，劑量如上所述。

1.5 標(biāo)本采集及處理 正常對照組大鼠通過尾靜脈留取血液。模型組、西藥組、參附組、西藥加參附組在給藥前及給藥后1、6、18 h分別取血，血標(biāo)本經(jīng)3000 r/min離心，留取血漿及血細(xì)胞。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組膿毒癥模型大鼠sCD163含量比較 見表1。結(jié)果示，空白組給藥后1、6、18 h sCD163含量與給藥前比較變化不明顯 （均P＞0.05）。模型組1、6、18 h sCD163含量與給藥前比較，均升高（均P＜0.05）。西藥組、參附組、西藥加參附組sCD163含量給藥后與給藥前比較，均下降（均P＜0.05）。各組給藥后sCD163含量與模型組給藥后同期比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。西藥加參附組給藥后sCD163含量與西藥組、參附組兩組同期比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），提示聯(lián)合治療組效果優(yōu)于單用藥物治療組。

2.2 各組膿毒癥模型大鼠給藥前、給藥后18 h SOD含量比較 見表2。結(jié)果示，造模后模型組、西藥組、參附組、西藥加參附組SOD含量與空白對照組比較明顯下降（均P＜0.05）。西藥組、參附組、西藥加參附組給藥后18 h SOD含量與模型組同期比較，均升高（均P＜0.05）；且西藥加參附組SOD含量高于同期單純西藥組、參附組（均P＜0.05）。

表1 各組膿毒癥模型大鼠sCD163含量比較（ng/mL，±s）

表1 各組膿毒癥模型大鼠sCD163含量比較（ng/mL，±s）

與本組給藥前比較，*P＜0.05；與模型組同期比較，△P＜0.05；與西藥組、參附組同期比較，#P＜0.05。

組別 n空白對照組 10模型組 10西藥組 10給藥前 給藥后1 h 給藥后6 h 給藥后18 h 19.15±6.50 20.68±8.78 20.41±9.18 21.35±8.76 75.64±15.35 88.76±17.35*97.28±19.32*108.22±24.31*81.45±22.51 68.50±16.47*△51.42±19.23*△33.26±15.92*△參附組 10 78.80±23.45 73.35±18.64*△56.64±17.83*△34.52±18.19*△西藥加參附組 10 86.77±17.80 66.81±18.42*△#45.39±16.48*△#26.42±14.86*△#

表2 各組膿毒癥模型大鼠給藥前、給藥后18 h SOD含量比較（U/mL，±s）

表2 各組膿毒癥模型大鼠給藥前、給藥后18 h SOD含量比較（U/mL，±s）

與空白對照組比較，&P＜0.05；與本組給藥前比較，*P＜0.05；與模型組同期比較，△P＜0.05；與西藥組、參附組同期比較，#P＜0.05。下同。

組別 n空白對照組 10模型組 10西藥組 10給藥前 給藥后18 h 440.21±26.21 442.56±29.38 310.77±24.95&281.65±27.53&308.83±23.31&363.71±26.45&*△參附組 10 309.57±25.43&353.82±27.69&*△西藥加參附組 10 310.08±25.81&395.77±26.25&*△#

2.3 各組膿毒癥模型大鼠給藥前、給藥后18 h MDA含量比較 見表3。結(jié)果示，經(jīng)造模后模型組、西藥組、參附組、西藥加參附組MDA含量與空白對照組比較均明顯升高（均P＜0.05）。西藥組、參附組、西藥加參附組給藥后18 h MDA含量與模型組同期比較，均下降（均P＜0.05）；且西藥加參附組MDA含量低于同期單純西藥組、參附組（均P＜0.05）。

表3 各組膿毒癥模型大鼠給藥前、給藥后18 h MDA含量比較（nmol/L，±s）

表3 各組膿毒癥模型大鼠給藥前、給藥后18 h MDA含量比較（nmol/L，±s）

組別 n空白對照組 10模型組 10西藥組 10給藥前 給藥后18 h 2.27±0.59 2.25±0.68 6.35±0.55&8.84±0.47&*6.52±0.61&4.58±0.61&*△參附組 10 6.68±0.54&4.73±0.54&*△西藥加參附組 10 6.47±0.63&3.38±0.42&*△#

3 討 論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為感染性休克的基本病機(jī)是“陽氣耗損，邪毒內(nèi)陷”，參附注射液組方源自參附湯，由紅參、黑附片組成，具有回陽救逆、益氣固脫的功效，臨床常用來治療休克重癥［2-3］?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)參附注射液中含有人參皂苷、人參蛋白、烏頭堿類生物堿等多種活性成分，其中人參皂苷可通過調(diào)節(jié)過氧化氫酶（CAT）和血清SOD活性，具有抗氧化作用，而人參蛋白可提高耐缺氧能力［4-7］。

近些年，氧化應(yīng)激與膿毒癥的關(guān)系倍受關(guān)注，目前認(rèn)為膿毒癥疾病過程中的氧化損傷或是導(dǎo)致細(xì)胞損傷、器官功能失調(diào)、機(jī)體死亡的重要原因。氧化應(yīng)激是指機(jī)體遭受感染刺激后，大量炎性介質(zhì)釋放，通過呼吸爆發(fā)，產(chǎn)生過多活性氧（ROS）或其代謝障礙并超過內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)對其的消除能力時(shí)，致使脂質(zhì)過氧化、蛋白質(zhì)變性、核酸受損及線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器損傷，從而導(dǎo)致組織損傷［8-9］。部分研究表明膿毒癥相關(guān)器官功能障礙的發(fā)生和發(fā)展與氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)，其可能主要通過高活性氧代謝物直接修飾宿主蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控導(dǎo)致酶功能失調(diào)、對細(xì)胞成分造成脂質(zhì)過氧化損傷，破壞生物膜通透性，改變遺傳信息，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)、代謝和功能紊亂［10-11］。另一方面，膿毒癥時(shí)器官組織多合并缺血缺氧，在這種缺血缺氧情況下又可使活性氧（ROS）產(chǎn)生增加，從而進(jìn)一步加重組織損傷。本研究中發(fā)現(xiàn)應(yīng)用參附注射液聯(lián)合去甲腎上腺素治療后大鼠SOD含量升高，MDA含量下降，較單純參附組或西藥組數(shù)值改變幅度更明顯，提示其有較好抗氧化作用，與目前現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果基本一致。

膿毒癥以全身炎性反應(yīng)綜合癥為主要表現(xiàn)的疾病，是急診監(jiān)護(hù)病房中常見的疾病之一，易合并多臟器功能衰竭，死亡率高。CD163又名血紅蛋白清道夫受體，分子量約130 KDa，屬于清道夫受體家族B類第一亞組，是目前僅發(fā)現(xiàn)存在于單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞膜上的跨膜分子［12］。膿毒癥時(shí)細(xì)菌分泌的內(nèi)毒素能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞細(xì)胞膜上的CD163經(jīng)蛋白切割后成為可溶性血紅蛋白清道夫受體（sCD163）于血液中。有學(xué)者通過研究證實(shí)sCD163可通過巨噬細(xì)胞對炎癥進(jìn)程調(diào)節(jié)，并可通過巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)生成CO，發(fā)揮抗炎作用［13-14］。Gaini S等通過觀察膿毒癥患者sCD163與CRP的變化，證實(shí)sCD163對膿毒癥的預(yù)后判斷有重要意義，其敏感性明顯優(yōu)于CRP，可做為臨床評估感染嚴(yán)重程度的敏感指標(biāo)及療效評價(jià)指標(biāo)，值得臨床推廣及應(yīng)用［15-16］。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)經(jīng)LPS造模成功后模型組sCD163值隨時(shí)間推移逐漸升高，而空白對照組sCD163的含量無明顯變化。給予相應(yīng)藥物治療后，西藥組、參附組、西藥加參附組治療后sCD163值較前下降，其中西藥加參附組與單純西藥組、參附組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示參附注射液聯(lián)合去甲腎上腺素效果優(yōu)于單用西藥組或參附組。

綜上所述，本研究通過參附注射液聯(lián)合去甲腎上腺素觀察對膿毒癥大鼠sCD163、SOD、MDA的影響，發(fā)現(xiàn)SCD163可作為早期膿毒癥診斷指標(biāo)及膿毒癥嚴(yán)重程度及治療效果評價(jià)指標(biāo)，并證實(shí)參附注射液有一定的抗氧化作用，值得進(jìn)一步深入研究。

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Effect of Shenfu Injection Combined with Norepinephrine on sCD163，Malondialdehyde and Superoxide Dismutase in Endotoxin Induced Septic Shock Rats

CHEN Lie，LIU Lin，WANG Zhichao，et al. WuhanHospital of Integrated Chinese and Western Medicine，Hubei，Wuhan 430022，China.

Objective：To observe the effect of Shenfu injection combined with norepinephrine on sCD163，malondialdehyde and superoxide dismutase in endotoxin induced septic shock rats and study the possible mechanism of Shenfu injection on septic shock.Methods：60 SD rats were selected to make septic shock rat models.The changes of serum sCD163，malondialdehyde and superoxide dismutase after treatment was observed.Results：Shenfu injection combined with noradrenaline decreased the numerical treatment of sCD163，MDA in septic shock rats，compared with Western medicine group and Shenfu group，the difference had statistical significance.And superoxide dismutase content of Western medicine+Shenfu group was higher than that of the western medicine group and the Shenfu group，the difference was statistically significant（all P＜0.05）.The curative efficacy in the norepinephrine injection+Shenfu group was superior to Shenfu injection group or western medicine group.Conclusion：Shenfu injection has antioxidant effect on septic shock rats，sCD163 can be used as a diagnostic index and therapeutic evaluation index of sepsis.

Shenfu injection；Septic shock；SCD163；Malondialdehyde；Superoxide dismutase

R285.5

A

1004-745X（2017）04-0598-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.04.010

2016-12-20）

武漢市衛(wèi)計(jì)委科研資助項(xiàng)目（WZ14A05）

△通信作者（電子郵箱：linln750215@163.com）