麻鴻飛，季生吉，馬連學

（遼寧撫順礦務(wù)局總醫(yī)院檢驗科 遼寧 撫順 113008）

淋巴瘤患者血漿中miR-21、miR-155、miR-210的表達及臨床意義

麻鴻飛，季生吉，馬連學

（遼寧撫順礦務(wù)局總醫(yī)院檢驗科 遼寧 撫順 113008）

目的 探討淋巴瘤細胞患者血漿中miR-21、miR-155、miR-210的表達情況及臨床應(yīng)用價值。方法選取淋巴瘤患者36例，淋巴結(jié)炎性腫大患者36例與健康人群36例，抽取外周血，經(jīng)處理后，采用實時定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR)測定3組血漿中miR-21、miR-155、miR-210表達情況，并分析三種miRNA的診斷率。結(jié)果淋巴瘤病例組血漿中miR-21、miR-155、miR-210表達量顯著高于淋巴結(jié)炎性腫大組、健康對照組（P＜0.05）；miR-21診斷率為56.92%，miR-155診斷率為66.13%，miR-210診斷率為48.08%，三者聯(lián)合診斷率為83.33%。結(jié)論通過對血漿中miR-21、miR-155、miR-210的表達進行測定，可用于淋巴瘤的臨床診斷與療效判定，且三者聯(lián)合檢測具有較高診斷率，值得推廣。

淋巴瘤；miRNA；表達；意義

淋巴瘤是一種源自淋巴組織和淋巴結(jié)的惡性腫瘤疾病，該病男性患病率高于女性，該病發(fā)病率以4%的速度逐年遞增，迅速成為了嚴重影響人類健康的惡性腫瘤，給人們的生命健康造成了極大的威脅[1]。為此，加強淋巴瘤的診斷、治療與預(yù)后評價成為控制淋巴瘤的關(guān)鍵。目前，淋巴瘤診斷主要依靠淋巴結(jié)活檢病理診斷，但若淋巴瘤不屬于非表淺淋巴結(jié)腫大或者淋巴結(jié)較小的情況，則很難取材，并且病理診斷無法分析腫瘤負荷、分期、浸潤程度等情況，無法為臨床治療提供更加全面的臨床信息。游離腫瘤標志物主要是指蛋白多糖、細胞因子、核酸等物質(zhì)，其主要由腫瘤細胞內(nèi)部或者表面合成，或者由其他細胞誘導(dǎo)合成，并在其他體液、血液中均有相應(yīng)表達。微小RNA（miRNA）作為一種單鏈小分子RNA，調(diào)節(jié)著人類1/3左右的基因。近年來，大量臨床報道證實[2]，在細胞生命活動調(diào)節(jié)中，miRNA可能參與各種信號傳導(dǎo)途徑，并在細胞分化、增殖、免疫反應(yīng)等過程中發(fā)揮著重要作用，故推斷血漿中miR-21、miR-155、miR-210可作為淋巴瘤診斷、療效評價的重要指標。現(xiàn)結(jié)合本科室淋巴瘤患者血漿miR-21、miR-155、miR-210測定結(jié)果做如下總結(jié)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本研究病例均來自本院2013年1月～2015年12月接診的淋巴瘤患者，所有患者均經(jīng)淋巴結(jié)組織病理學檢測確診，選取36例作為本研究病例組，其中女12例，男24例，平均年齡（54.21±2.21）歲；從同期接診患者中選取淋巴結(jié)炎性腫大患者36例，其中女14例，男22例，平均年齡（52.35±2.62）歲；另從同期健康體檢人群中選取健康人群36例作為對照組，其中女15例，男21例，平均年齡（53.57±2.41）歲，3組患者臨床資料比較差異均無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標本采集與預(yù)處理 每例對象各取外周血3 mL，置于EDTA-K2抗凝管內(nèi)，以1 600 rpm速度，行10 min離心處理，取上層血漿轉(zhuǎn)移至EP管內(nèi)，再以13 300 rpm速度，行10 min離心處理，取上層血漿置于EP管內(nèi)，保存在-80℃環(huán)境下備用。

1.2.2 總RNA提取與純化預(yù)處理 取1.5 mLEP管，置入500 μL血漿，置于75℃中加熱5 min，放置于42℃下溫育1 h。向處理后樣本中加入體積相等的TRIzol試劑，充分混合，靜置于室溫下，20 min后向其中加入氯仿（1/5體積），充分振蕩15 s，靜置2 min；在4℃下行15 min離心處理，取上清液，并向其中加入體積相等的異丙醇，充分搖勻，放置于-20℃環(huán)境下沉淀，次日再次于4℃環(huán)境下，行10 min離心處理，去除上清液，并向其中加入75%乙醇（1倍體積），充分洗滌后，再次于4℃環(huán)境下，行10 min離心處理，去除上清液，沉淀晾干之后向其中加入適量的DEPC·H2O，確保其完全溶解，即可獲得血漿RNA樣本。

1.2.3 RNA定量與質(zhì)量鑒定 采用分光光度計對RNA純度、濃度進行測定，做好標記。

1.2.4 RT-PCR 運用實時定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR)對總RAN RT引物、PCR引物進行測定。

1.2.5 PCR產(chǎn)物電泳及分析 取標本PCR產(chǎn)物8 μl電泳，對目的PCR產(chǎn)物條帶進行測定，并運用Quantity one軟件對擴增條帶亮度進行分析，并測定基因U6亮度。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS15.0對本次研究數(shù)據(jù)進行分析處理，組間均數(shù)比較獨立樣本均以t值檢驗。α=0.05為檢驗標準。

2 結(jié)果

2.1 3組對象3種miRNA表達 淋巴瘤病例組血漿中miR-21、miR-155、miR-210表達量與淋巴結(jié)炎性腫大組、健康對照組比較，有顯著升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 3組對象3種miRNA表達診斷價值 miR-21診斷率為56.92%，miR-155診斷率為66.13%，miR-210診斷率為48.08%，三者聯(lián)合診斷率為83.33%。見表2。

3 討論

淋巴瘤的發(fā)病原因目前尚不明確，但學界認為與自身免疫功能異常、感染、放射性物質(zhì)環(huán)境等均有直接關(guān)聯(lián)[3]。組織活檢是淋巴瘤診斷的主要標準，該方法具有較高準確性，且操作方法非常直觀，但這種方法取材難度較大，加之創(chuàng)傷面積大，患者普遍難以接受。為此，排除臨床特征檢查和影像學等診斷手段，血清腫瘤標記物的優(yōu)勢隨之體現(xiàn)，并成為了臨床疾病診斷、預(yù)后判斷等重要方法[4]。目前關(guān)于miRNA的來源問題尚無統(tǒng)一定論，但經(jīng)過長期的研究已證實，其與血細胞有較大關(guān)聯(lián)，且經(jīng)過大量實驗發(fā)現(xiàn)，外周miRNA在酸堿、溫度等變化的情況下，其表達仍然非常穩(wěn)定，同時外周血不存在性別差異，更利于參照值的設(shè)定[5]。為此，血漿miRNA檢測是一種操作簡單且不易受干擾的標志物，故本研究通過對血漿中miR-21、miR-155、miR-210表達進行測定，分析其在淋巴瘤診斷中的應(yīng)用價值。

表1 miR-21、miR-155、miR-210在3組中的表達量（±s）

表1 miR-21、miR-155、miR-210在3組中的表達量（±s）

注：與病例組比較，aP＜0.05

項目miR-21 miR-155 miR-210健康對照組（n=36）1.10±0.55a1.04±0.49a1.50±0.91a病例組（n=36）1.34±0.39 1.23±0.34 2.01±1.01淋巴結(jié)炎性組（n=36）0.78±0.23a0.62±0.35a1.09±0.32a

表2 miR-21、miR-155、miR-210對3組的診斷率（n）

miR-21在多種實體瘤中均有表達，有研究者[6]通過對比正常人與彌漫大B細胞淋巴瘤患者血清中miR-21表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淋巴瘤患者的表達量是常人的2.56倍左右，故其認為在彌漫大B細胞淋巴瘤診斷、鑒別中，可將miR-21作為重要標志物。miR-155位于人類21號染色體上，其表達水平直接受到BIC轉(zhuǎn)錄水平的影響。有研究[7]通過對彌漫大B細胞淋巴瘤患者血清miR-155表達量進行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-155的拷貝數(shù)相較于正常的B細胞中表達量高出10-30倍。miR-210作為一種缺氧特異性miRNA，當體外處于缺氧狀態(tài)時，其表達量會呈現(xiàn)為明顯升高，有研究者[8]通過對彌漫大B細胞淋巴瘤患者血清與淋巴組織中miR-210表達量進行測定發(fā)現(xiàn)，均呈現(xiàn)為高表達，且相較于常人高出4.15倍。

本研究通過選取miR-21、miR-155、miR-210作為腫瘤檢測標志物，采用RT-PCR對其表達量進行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淋巴瘤病例組患者中miR-21、miR-155、miR-210表達量均顯著高于淋巴結(jié)炎性腫大組、健康對照組（P＜0.05）。該結(jié)果與上述各文獻報道結(jié)果一致，這表明miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤中均呈現(xiàn)為高表達，可用于淋巴瘤的臨床診斷。另通過對miR-21、miR-155、miR-210診斷價值進行對比，結(jié)果顯示，三者聯(lián)合診斷的診斷率可達到了83.33%，顯著高于miR-21、miR-155、miR-210單一診斷率。該結(jié)果表明，三者聯(lián)合診斷具有更高的診斷價值。

綜上所述，通過對淋巴瘤、淋巴結(jié)炎性腫大與健康人群血漿中miR-21、miR-155、miR-210進行測定，證實miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤中呈現(xiàn)為高表達，且三者聯(lián)合診斷具有較高價值，故認為miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤診斷、治療、預(yù)后判定中具有較高應(yīng)用價值。

[1]胡應(yīng)霞，張海蓉，石圍，等.血漿miR-155、miR-196a、miR-21和miR-210對胰腺癌的早期診斷價值[J].腫瘤，2015，34（10）：1135-1143.

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.07.014