王進(jìn)雅++諸留珍++陸璐葛++蕾丁玲

[摘要] 目的 研究反復(fù)喘息嬰幼兒血清中淋巴細(xì)胞亞群的變化和意義。 方法 方便收集南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院2013年6月—2015年1月住院反復(fù)喘息患兒54例，年齡均在3歲以下，按哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)分3組，預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性組（A組）、哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陰性組（B組）、正常對(duì)照組（C組）。哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性組22例，哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陰性組22例，正常對(duì)照組10例。所有患兒入院當(dāng)日采集靜脈血，流式細(xì)胞儀檢測(cè)患兒血清T淋巴細(xì)胞（CD3+）、B淋巴細(xì)胞（CD19+），T輔助性淋巴細(xì)胞（CD3+、CD4+），T抑制性淋巴細(xì)胞（CD3+、CD8+）的水平。 結(jié)果 A組共22例，淋巴細(xì)胞免疫分型異常者17例，占總數(shù)的77.27%；B組共22例，淋巴細(xì)胞免疫分型異常者3例，占總數(shù)的13.63%；C組共10例，淋巴細(xì)胞免疫分型異常者1例，占總數(shù)的11.11%。A組與C組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；B組與C組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 反復(fù)喘息嬰幼兒，哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性組淋巴細(xì)胞亞群功能失衡，而哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陰性組淋巴細(xì)胞亞群功能正常。

[關(guān)鍵詞] 淋巴細(xì)胞亞群；喘息；嬰幼兒；哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R725 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2016）12（b）-0032-04

Study on the Expression of Lymphocyte Subsets in the Serum of Infants and Young Children with Recurrent Wheezing

WANG Jin-Ya，ZHU Liu-Zhen， LU Lu，GE Lei，DING Ling

Second Affiliated Hospital of Pediatrics of Ningjing Medical University ， Nanjing， Jiangsu Province， 210003 China

[Abstract] Objective To study the changes and significance of lymphocyte subsets in the serum of infants and young children with repeated wheezing. Methods Convenient collect 54 cases of hospitalized children with recurrent wheezing in the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University from June 2013 to January 2015. The tests were given to three groups according to asthma Predictive Index， which were prediction index positive group （ group A）， asthma prediction index negative group （group B）， normal control group （group C）. there were 22 cases in group A； there were 22 cases in B group，also； there were 10 cases in group C. Venous blood was collected on the day of admission for all test patients. Flow cytometry was used to detect the levels of serum T lymphocytes （CD3+）， B lymphocytes （CD19+）， T helper lymphocytes （CD3+， CD4+） and T inhibitory lymphocytes（CD3+， CD8+） in test children. Results A group of 22 cases， 17 cases of abnormal lymphocyte immune type， accounting for 77.27% of the total， the B group； 22 cases， 3 cases of abnormal lymphocyte type， accounting for 13.63% of total number of 13，63%； C group of 10 cases， 1 cases of abnormal lymphocyte immune type， accounting for 11.11% of the total， and the A group C group the difference was statistically significant（P>0.05）； B group compared with C group， the difference was not statistically significant（P>0.05）. Conclusion Repeated wheezing infants and young children， asthma prediction index positive group lymphocyte subsets function imbalance， and asthma prediction index negative group lymphocyte subsets function is normal.

[Key words] Lymphocyte subsets； Wheezing； Infants and young children； Asthma predictive indexendprint

眾多研究證明，兒童支氣管哮喘的早期干預(yù)和規(guī)范化管理有利于控制疾病，改善預(yù)后，兒童哮喘多起始于3歲前，因此從反復(fù)喘息的嬰幼兒中把可能發(fā)展為持續(xù)性哮喘的患兒識(shí)別出來(lái)進(jìn)行有效地早期干預(yù)是必要的。但目前尚無(wú)特異性的檢測(cè)方法和指標(biāo)，可用于對(duì)反復(fù)喘息的嬰幼兒做出哮喘的確定診斷。該研究檢測(cè)南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院2013年6月—2015年1月住院反復(fù)喘息患兒54例，年齡均在3歲以下，檢測(cè)患兒血清中T淋巴細(xì)胞（CD3+）、B淋巴細(xì)胞（CD19+），T輔助性淋巴細(xì)胞（CD3+、CD4+），T抑制性淋巴細(xì)胞（CD3+、CD8+），為嬰幼兒哮喘的診斷與治療提供一定的理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)嬰幼兒反復(fù)喘息暫缺乏明確定義，該研究將其定義為1年內(nèi)喘息發(fā)作4次以上的嬰幼兒，年齡6～36個(gè)月，該研究方便選取該院住院確診為反復(fù)喘息患兒，臨床表現(xiàn)為反復(fù)咳嗽、喘息，肺部有哮嗚音。剔除標(biāo)準(zhǔn)：支氣管、肺發(fā)育不良，先天性心臟病，其他先天性畸形，免疫缺陷，曾經(jīng)或正在使用免疫抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑。健康對(duì)照組選自同期正常健康體檢患兒。

1.2 研究方法

研究按哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)共分3組，哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性組（A組）、哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陰性組（B組）、正常對(duì)照組（C組）。哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性組（A組）22例，男16例，女6例；哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陰性組（B組）22例男15例，女7例；正常對(duì)照組（C組）10例，男7例，女3例，哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)參照兒童支氣管哮喘的診斷與防治指南（2016年版）[1]。所有患兒入院當(dāng)日采集靜脈血，流式細(xì)胞儀檢測(cè)患兒血清T淋巴細(xì)胞（CD3+）、B淋巴細(xì)胞（CD19+），T輔助性淋巴細(xì)胞（CD3+、CD4+），T抑制性淋巴細(xì)胞（CD3+、CD8+）的水平。觀察不同組間淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平的差別。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)的分析結(jié)果均以[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 淋巴細(xì)胞免疫分型結(jié)果

A組共22例，淋巴細(xì)胞免疫分型異常者17例，占總數(shù)的77.27%、；B組共22例，淋巴細(xì)胞免疫分型異常者3例，占總數(shù)的13，63%；C組共10例，淋巴細(xì)胞免疫分型異常者1例，占總數(shù)的11.11%。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

A組與C組相比χ2=13.07，P<0.005，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組與C組相比χ2=0.083，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

3 討論

支氣管哮喘是兒童期最常見(jiàn)的喘息性疾病，哮喘的定義是由多種細(xì)胞特別是肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、和T淋巴細(xì)胞參與的氣道慢性炎癥，引起氣道高反應(yīng)，導(dǎo)致可逆性氣道阻塞性疾病。由于該病喘息發(fā)作的非特異性，部分哮喘患兒易被家長(zhǎng)忽視，也易被醫(yī)生誤診，因不能明確診斷而缺乏有效抗治療是導(dǎo)致兒童因支氣管哮喘死亡的最常見(jiàn)原因之一[2]。哮喘的本質(zhì)是氣道的過(guò)敏性慢性炎癥，氣道上皮細(xì)胞因慢性炎癥而損傷、脫落和壞死，進(jìn)而可導(dǎo)致基膜下膠原沉積、杯狀細(xì)胞增生和平滑肌肥厚，并致氣道重構(gòu)，這些形態(tài)改變可能不完全可逆[3]，因此強(qiáng)調(diào)對(duì)支氣管哮喘必須早期識(shí)別、早期診斷和積極治療。兒童哮喘多起始于3歲前，具有肺功能損害的持續(xù)性哮喘患兒，其肺功能損害往往開(kāi)始于學(xué)齡前，因此從喘息的學(xué)齡前兒童中識(shí)別出可能發(fā)展為持續(xù)性哮喘患兒，并進(jìn)行有效早期干預(yù)是必要的[4]。全球哮喘防治創(chuàng)議（GINA）方案示5歲以上兒童支氣管哮喘的診斷有明確標(biāo)準(zhǔn)，但嬰幼兒哮喘的診斷，存在一定的困難[5]。我國(guó)2016年版的兒童哮喘診療指南所制定的哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)，適用于嬰幼兒，可是由于在嬰幼兒肺功能等生理學(xué)檢測(cè)難以進(jìn)行或結(jié)果不可靠等原因，加之多種疾病可引起嬰幼兒喘息，所以，對(duì)嬰幼兒哮喘確定診斷是困難的[6]。

如何從嬰幼兒喘息中作出哮喘診斷，存在一定的困難。首先不能完全根據(jù)發(fā)作次數(shù)來(lái)診斷哮喘，因?yàn)椴《菊T導(dǎo)的喘息也可以有3次以上的喘息；其次哮喘也有首次發(fā)作。為避免哮喘診斷的擴(kuò)大化，我國(guó)曾使用評(píng)分法診斷嬰幼兒哮喘，總分≥5分者診斷嬰幼兒哮喘。近年提出廢除這一診斷標(biāo)準(zhǔn)，但沒(méi)有一個(gè)合適的診斷標(biāo)準(zhǔn)可以替代?，F(xiàn)在較為公認(rèn)的確定嬰幼兒哮喘的評(píng)估指標(biāo)為全球哮喘防治創(chuàng)議（GINA）和PRACTALL 共識(shí)報(bào)告[7]。但此指標(biāo)仍不是特異性的檢測(cè)方法和指標(biāo)，并且此內(nèi)容中客觀性的觀察指標(biāo)較少。

哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)能有效地預(yù)測(cè)3歲內(nèi)喘息兒童發(fā)展為持續(xù)性哮喘的危險(xiǎn)性，也是目前臨床上對(duì)反復(fù)喘息患兒是否進(jìn)行抗哮喘治療依據(jù)。但哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)用于嬰幼兒哮喘的診斷仍缺少理論依據(jù)。哮喘的本質(zhì)是氣道的慢性過(guò)敏性炎癥，是與淋巴細(xì)胞免疫異常與功能失衡相關(guān)的慢性炎癥[8]，哮喘患兒存在淋巴細(xì)胞免疫異常與功能失衡，那么哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性的反復(fù)喘息的嬰幼兒是否也存在淋巴細(xì)胞免疫異常與功能失衡呢。

哮喘本質(zhì)是免疫參與的氣道慢性炎癥性疾病，已有研究表明[9]，哮喘患兒存在持續(xù)慢性的淋巴細(xì)胞亞群的紊亂和失衡，那么這種慢性持續(xù)性淋巴細(xì)胞亞群的紊亂和失衡是否發(fā)生于嬰幼兒期，是否反復(fù)喘息的嬰幼兒都會(huì)發(fā)展成哮喘患兒，目前尚無(wú)特異性的檢測(cè)方法和指標(biāo)作為嬰幼兒哮喘的診斷，目前臨床主要依據(jù)癥狀，發(fā)作次數(shù)，嚴(yán)重程度及哮喘發(fā)生的危險(xiǎn)因素評(píng)估反復(fù)喘息的嬰幼兒有無(wú)發(fā)展成持續(xù)哮喘的可能，但目前這種評(píng)估方法尚缺少理論依據(jù)[10]。國(guó)內(nèi)外[11]已有許多研究觀察到在嬰幼兒出生后早期， 喘息發(fā)生率較高，越來(lái)越多的學(xué)者開(kāi)始關(guān)注<3歲嬰幼兒反復(fù)喘息的危險(xiǎn)因素，希望以此來(lái)減少反復(fù)喘息嬰幼兒進(jìn)展為哮喘或反復(fù)喘息本身所給患兒帶來(lái)的傷害。目前公認(rèn)哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)是評(píng)估反復(fù)喘息患兒危險(xiǎn)性的主要指標(biāo)，但對(duì)預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性的患兒是否需要進(jìn)行抗哮喘治療尚未有理論依據(jù)。有研究報(bào)道哮喘易感基因與哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性嬰幼兒的喘息相關(guān)，這提示哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性嬰幼兒有發(fā)展為持續(xù)哮喘的可能，文獻(xiàn)報(bào)道哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性的反復(fù)喘息嬰幼兒外周血CD23、CD30、CD34及IL-17表達(dá)明顯增高，存在免疫功能的紊亂[12-13]，該研究收集反復(fù)喘息嬰幼兒，分哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性組，哮喘指數(shù)陰性組和正常對(duì)照組，檢測(cè)患兒血清中淋巴細(xì)胞免疫分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性組有明顯免疫細(xì)胞分型異常，主要表現(xiàn)為CD3+細(xì)胞降低，以CD4+降低為主，CD19+明顯增高，而哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陰性組患兒淋巴細(xì)胞免疫分型無(wú)明顯異常。這與文獻(xiàn)報(bào)道一致。這為哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性的反復(fù)喘息患兒抗炎治療提供科學(xué)依據(jù)，見(jiàn)附表。endprint

綜上所述，該研究提示反復(fù)喘息的嬰幼兒，哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性組存在免疫功能的紊亂，這與哮喘患兒一直，而哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陰性組免疫功能正常，推測(cè)哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)陽(yáng)性的反復(fù)喘息的嬰幼兒有發(fā)展成持續(xù)性哮喘患兒的可能，這為嬰幼兒哮喘的診斷與治療提供一定的理論依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)呼吸組.兒童支氣管哮喘的診斷與防治指南（2016年版）[J].中華兒科雜志，2016，54（3）：167-181.

[2] Anagnostou K，Harrison B，Iles R，et al.Risk factors for childhood asthma deaths from the UK Eastern Region Confidential Enquiry 2001-2006[J].Prim Care Respir，2012，21（1）：71-77.

[3] López-Pacheco C， Soldevila G. CCR9 Is a Key Regulator of Early Phases of Allergic Airway Inflammation[J].Mediators Inflamm，2016，10（4）：1-16.

[4] DucharmeFM， TseSM， ChauhanB. Diagnosis，management，and prognosis of preschool wheeze[J].Lancet，2014，383（9928）：1593-1604.

[5] The Global strategy for asthma management and prevention. Global Initiative for Asthma（GINA） 2015[EB/OL].2015.[2016-01-03].

[6] Bakirtas A. Diagnostic challenges of childhood asthma[J]. Curr Opin Pulm Med，2016，31（10）：1-10.

[7] Bacharier LB，Boner A， Carlsen KH，et al.Diagnosis and treatment of asthma in childhood：a PRACTALL consensus report. [J].Allergy，2008，63（1）：5-34.

[8] Schrder PC， Casaca VI， Illi S，et al. IL-33 polymorphisms are associated with increased risk of hay fever and reduced regulatory T cells in a birth cohort[J]. Pediatr Allergy Immunol，2016，27（7）：687-695.

[9] Moriyama M， Nakamura S. Th1/Th2 Immune Balance and Other T Helper Subsets in IgG4-Related Disease[J].Curr Top Microbiol Immunol，2016，16（10）：1-9.

[10] Pescatore AM， Dogaru CM， Duembgen L，et al. A simple asthma prediction tool for preschool children with wheeze or cough[J].J Allergy Clin Immunol，2014，133（1）：111-118.

[11] Cano-Garcinuo A1， Mora-Gandarillas I， SLAM Study Group. Wheezing phenotypes in young children： an historical cohort study[J]. Prim Care Respir J，2014，23（1）：60-66.

[12] 卞芳芳，張沖林，甄清，等.瘦素、IL-17水平與嬰幼兒喘息患兒哮喘預(yù)測(cè)指數(shù)相關(guān)[J].臨床肺科雜志，2016，21（10）：1853-1855.

[13] 周智源，孟媛媛.外周血CD23、CD30、CD34在嬰幼兒喘息中早期預(yù)測(cè)作用[J].廣東醫(yī)學(xué)，2012，33（17）：2590-2591.

（收稿日期：2016-09-15）endprint