段樹卿+劉微+尹占芳

[摘要]目的 建立胃痛平膠囊中白屈菜紅堿的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法測定胃痛平膠囊中白屈菜紅堿的含量，色譜柱為Agilent XDB-C18（4.6 mm×150 mm，2.5 μm），流動相為乙腈-1%三乙胺溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）（26∶74），檢測波長為269 nm，柱溫為25℃，流速為1.0 ml/min，進樣體積為10 μl。結果 白屈菜紅堿的線性范圍：2.62～43.67 μg/ml（r=0.9999），平均加樣回收率為98.88%，RSD為1.91%（n=9）。結論 所建立的方法準確、靈敏、簡便，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好，專屬性強，可較好地控制胃痛平膠囊的質(zhì)量。

[關鍵詞]胃痛平膠囊；白屈菜紅堿；高效液相色譜法

[中圖分類號] R927.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）12（c）-0129-04

Determination method of content of chelerythrine in Weitongping Capsules

DUAN Shu-qing1，2 LIU Wei1 YIN Zhan-fang1

1.Jingfukang Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Chengde 067000，China；2.New Excipients of Traditional Chinese Medicine Engineering Research Center of Hebei Province，Chengde 067000，China

[Abstract]Objective To establish a method for the determination of chelerythrine in Weitongping Capsules.Methods The content of chelerythrine in Weitongping Capsules was determined by high performance liquid chromatography （HPLC）.The chromatographic column was Agilent XDB-C18 （4.6 mm×150 mm，2.5 μm）.The mobile phase was acetonitrile-1% triethylamine solution （26∶74；pH value re-adjusted to 3.0）.The detection wavelength was 269 nm，the column temperature was 25℃，the flow rate was 1.0 ml/min，and the injection volume was 10 μl.Results Linear range of chelerythrine was 2.62-43.67 μg/ml （r=0.9999）.The average recovery was 98.88% and RSD was 1.91% （n=9）.Conclusion The established method is accurate，sensitive and simple，in good stability and reproducibility，and specificity，which can control the quality of Weitongping Capsule in a better way.

[Key words]Weitongping Capsules；Chelerythrine；High performance liquid chromatography

胃痛平膠囊是由白屈菜經(jīng)適宜加工制成的膠囊劑，收載于原衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第二十冊，具有緩急止痛的功效，用于慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍及腸胃痙攣引起的疼痛等。

白屈菜為罌粟科白屈菜屬植物，含有白屈菜堿、白屈菜紅堿、血根堿等生物堿類成分，其中白屈菜紅堿的含量較高，并且是一種生理活性物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抑制蛋白激酶C、抗微管聚合抑制細胞有絲分裂等作用[2]。

胃痛平膠囊現(xiàn)行標準除膠囊劑的常規(guī)檢驗外，只有一項薄層鑒別項。目前，未查到國內(nèi)外文獻對胃痛平膠囊中白屈菜紅堿的含量測定的相關報道，為此，筆者參考相關文獻[3-15]，采用高效液相色譜法（HPLC）測定胃痛寧膠囊中白屈菜紅堿的含量，為胃痛平膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

1儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀，VWD檢測器（美國Agilent公司）；KQ-500DE醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AE 240 十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒）。

白屈菜紅堿對照品（批號111718-201402），購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈（美國Fisher）為色譜純；甲醇（天津佳興化工玻璃儀器工貿(mào)有限公司）為分析純，水（三級反滲法制得純化水）。胃痛平膠囊、陰性樣品及陰性樣品制備所用原料均由頸復康藥業(yè)集團有限公司提供。

2方法與結果

2.1色譜條件

采用Agilent XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，2.5 μm）；以乙腈-1%三乙胺溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）（26∶74）為流動相；檢測波長為269 nm；柱溫：25℃；流速：1.0 ml/min；進樣體積：10 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取白屈菜紅堿對照品適量，加甲醇制成含白屈菜紅堿8 μg/ml對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取胃痛平膠囊內(nèi)容物，研細，取約0.8 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加鹽酸-甲醇（0.5∶100）混合溶液25 ml，稱定重量，水浴加熱回流90 min，放冷；再稱定重量，用鹽酸-甲醇（0.5∶100）混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液15 ml，蒸干，殘渣加50%甲醇使溶解；轉移至10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備 按處方中的藥味配制不含白屈菜的陰性樣品，依“2.3”項下方法制備陰性對照液。

2.3專屬性試驗

按“2.1”項下色譜條件，將對照品溶液、供試品溶液及各陰性對照液分別注入液相色譜儀測定，結果顯示，在該色譜條件下，陰性無干擾（圖1）。

2.4 定量限的確定

取標準曲線工作液中最低濃度的對照品溶液稀釋，按“2.1”項下的色譜條件進行檢測，進樣量為10 μl，然后不斷按倍數(shù)稀釋，測出白屈菜紅堿濃度為0.5240 μg/ml的溶液信噪比為10∶1，確定定量限為5.2400 ng。

2.5 檢測限的確定

取標準曲線工作液中最低濃度的對照品溶液稀釋，按“2.1”項下的色譜條件進行檢測，進樣量為10 μl，然后不斷按倍數(shù)稀釋，測出白屈菜紅堿濃度為0.1747 mg/ml的溶液信噪比為3∶1，確定檢測限為1.747 ng。

2.6線性關系考察

精密稱取白屈菜紅堿對照品適量，加甲醇分別制成含白屈菜紅堿43.670、21.840、8.734、4.367、2.620 μg/ml，按照“2.1”項下色譜條件進行HPLC分析。以白屈菜紅堿的峰面積（Y）對白屈菜紅堿的濃度（X）繪制標準曲線，得回歸方程Y= 7683X-15.669 ，r=0.9999（n=5）。結果表明，白屈菜紅堿在2.62～43.67 μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好。

2.7精密度試驗

取白屈菜紅堿（濃度為8.732 μg/ml）對照品溶液，按照“2.1”項下的色譜條件，各重復進樣6次，記錄每次的色譜峰面積，計算RSD值，結果顯示白屈菜紅堿RSD為0.28%，表明儀器精密度良好。

2.8重復性試驗

精密稱取同一批已知濃度胃痛平膠囊內(nèi)容物9份，1～3份每份0.4 g，4～6份每份0.8 g，7～9份每份1.2 g，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄白屈菜紅堿峰面積，計算含量。結果見表1，白屈菜紅堿的平均含量為111.416 μg/g，RSD為1.30%（n=9）。表明該樣品處理方法重現(xiàn)性好。

2.9穩(wěn)定性試驗

取按照“2.3”項下方法制備的供試品溶液，分別在制備后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h進樣10 μl，記錄色譜峰面積，結果顯示白屈菜紅堿色譜峰面積RSD為0.19%。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.10加樣回收率試驗

精密量取已測定白屈菜紅堿含量的樣品（含量為123.47 μg/g）9份，精密稱定0.4 g，分別加入一定量對照品，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，以供試品溶液中絕對質(zhì)量分數(shù)計算加樣回收率，結果白屈菜紅堿平均回收率為98.88%，RSD為1.91%（表2） 。

2.11 樣品含量測定

按“2.1”項下色譜條件測定頸復康藥業(yè)集團有限公司胃痛平膠囊（批號491133，491134，520331，520032， 620225，620226，620091，620092）中白屈菜紅堿的含量（表3） 。

3討論

3.1待測成分的選擇

目前，國內(nèi)外文獻有對胃痛平膠囊的研究報道[6]，但對胃痛平膠囊中有關白屈菜紅堿含量測定的報道較少。本實驗對胃痛平膠囊中白屈菜的主要成分白屈菜紅堿進行分析，建立其含量測定方法。

3.2檢測波長的選擇及色譜柱、儀器的耐用性

以二級陣列檢測器對白屈菜紅堿進行全波長掃描，在269 nm處均有比較大吸收，故選用269 nm作為檢測波長；選用了兩種色譜柱（Agilent XDB- C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，2.5 μm），YMC-Pack ODS-A色譜柱（4.6 mm×250 mm，2.5 μm），分離效果均較好，且分離時間適中；考察了Agilent 1100和Agilent 1260兩種型號的高效液相色譜儀對胃痛平膠囊進行測定，均可用于樣品測定。

3.3提取溶劑及提取時間的選擇

選用了2種提取方法（水浴加熱回流，直接超聲），均對被測成分無干擾且可較好地分離，水浴加熱回流含量較高，選擇水浴加熱回流的方法；考察了不同溶劑（甲醇、70%甲醇、50%甲醇、不同比例鹽酸-甲醇），結果用鹽酸-甲醇（0.5∶100）作為提取溶劑，所提白屈菜紅堿含量較好，最終確定選用鹽酸-甲醇（0.5∶100）作為提取溶劑；考察了回流時間45、60、90、120 min，結果顯示回流90 min 即可提取完全。

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