趙斌

摘 要：本實(shí)驗(yàn)建立反相高效液相色譜法測(cè)定舒筋外洗顆粒中虎杖苷的含量并對(duì)其質(zhì)量穩(wěn)定性進(jìn)行考察。方法：固定相為奧泰公司C18色譜柱（220 mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-水（5：25：70）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為303nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。本文對(duì)舒筋外洗顆粒中的虎杖苷進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明該法不受其它成分的干擾，分離度好，精密度、重現(xiàn)性佳，可用于舒筋外洗顆粒中虎杖苷的含量測(cè)定；舒筋外洗顆粒質(zhì)量穩(wěn)定，可存放36月。

關(guān)鍵詞：舒筋外洗顆粒；質(zhì)量；穩(wěn)定

舒筋外洗顆粒具有溫經(jīng)通絡(luò)，消腫止痛的功效?；⒄葹槭娼钔庀搭w粒主要成分之一?；⒄葎e名為花斑竹、酸筒桿、川筋龍、斑莊、斑杖根等，具有清熱解毒、散瘀定痛、利膽退黃、祛風(fēng)利濕、止咳化痰等功效。虎杖常用于關(guān)節(jié)痹痛、濕熱黃疸、咳嗽痰多、跌撲損傷、癓瘕、癰腫瘡毒等?！兜崮媳静荨酚涊d：“攻諸腫毒，止咽喉疼痛，利小便，走經(jīng)絡(luò)。治五淋白濁，痔漏，瘡癰，婦人赤白帶下?！被⒄染哂锌剐募∪毖?再灌注損傷、保護(hù)心肌、抗腫瘤、抗腦出血、改善學(xué)習(xí)記憶力等作用[1-5]。本實(shí)驗(yàn)建立反相高效液相色譜法測(cè)定舒筋外洗顆粒中虎杖苷的含量并對(duì)其質(zhì)量穩(wěn)定性進(jìn)行考察。

1 儀器與試藥

Aurora-F1實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)洗瓶機(jī)（杭州喜瓶者生物技術(shù)有限公司）、TH-W50GC多功能全自動(dòng)純水機(jī)（武漢市天虹儀表有限責(zé)任公司）、P230高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）、超聲波清洗器US-3M（中科儀（北京）儀器有限公司）、HH.S11-1電熱恒溫水浴鍋（上海昨非實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）、FA1204CFAC型全自動(dòng)內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）、YOKO-2005雙波長(zhǎng)薄層色譜掃儀（武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司）?；⒄溶諏?duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（上海金錦樂實(shí)業(yè)有限公司）、冰醋酸（上海拜力生物科技有限公司）、磷酸二氫鉀（上海拜力生物科技有限公司）、三乙胺（湖北巨龍?zhí)冕t(yī)藥化工有限公司）、甲醇（上海金錦樂實(shí)業(yè)有限公司）、磷酸（湖北巨龍?zhí)冕t(yī)藥化工有限公司）、醋酸鈉（湖北巨龍?zhí)冕t(yī)藥化工有限公司）、磷酸二氫銨（湖北巨龍?zhí)冕t(yī)藥化工有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[6-9]。色譜柱為奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）；甲醇-乙腈-水（5：25：70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為303nm。理論板數(shù)按虎杖苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取舒筋外洗顆粒，精密稱定，置10毫升容量瓶?jī)?nèi)中，加入適量流動(dòng)相，超聲處理10分鐘，放冷至室溫，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取虎杖苷對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋成每1ml中含10μg的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

取除虎杖以外的原輔料，按照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在虎杖苷出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取虎杖苷對(duì)照品10.0mg，置25ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，虎杖苷在8～80μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取虎杖苷對(duì)照品溶液20μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.79%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批舒筋外洗顆粒樣品6份，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.69%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品虎杖苷峰面積積分值的RSD為0.71%。結(jié)果表明虎杖苷至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對(duì)照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入虎杖苷對(duì)照品，按項(xiàng)下方法制備成120%、140%、160%。取模擬樣品照“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.2%，RSD為0.95%。

3 穩(wěn)定性考察方法

將本品置于30℃的恒溫箱內(nèi)，分別于第1、2、3、12、24、36個(gè)月末取樣并測(cè)定，考察外觀、重量差異、微生物限度、含量的測(cè)定結(jié)果做比較。放置36個(gè)月后，舒筋外洗顆粒未發(fā)生明顯變化。經(jīng)測(cè)定發(fā)現(xiàn)，外觀、重量差異、微生物限度、含量均穩(wěn)定，表明舒筋外洗顆?？梢源娣?6個(gè)月。

4 討論

分別考察含1%醋酸0.025mol.L-1醋酸銨溶液-乙腈（75∶25），乙腈-水-三乙胺（30：70：0.1），甲醇-水（35：65），甲醇-水（40：60），甲醇：2%冰醋酸水溶液（20∶80），甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.3），甲醇-乙腈-水（5：25：70），水-乙腈-三乙胺（80∶20：0.01）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-乙腈-水（5：25：70）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-水（5：25：70）為流動(dòng)相。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于舒筋外洗顆粒中虎杖苷的含量測(cè)定。舒筋外洗顆粒質(zhì)量穩(wěn)定，可存放36月。

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