齊鶴

摘 要：本實(shí)驗(yàn)以5-O-甲基維斯阿米醇苷為指標(biāo)對(duì)防風(fēng)提取工藝進(jìn)行研究。5-O-甲基維斯阿米醇苷最佳提取工藝為加入10倍量70%乙醇，超聲提取35分鐘，連續(xù)提取2次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高。

關(guān)鍵詞：防風(fēng)；提??；工藝

防風(fēng)是中藥材，是傘形科多年生草本植物防風(fēng)的根。防風(fēng)主要用于外感風(fēng)寒、頭痛、骨節(jié)酸痛、四肢攣急、目眩、風(fēng)寒濕痹、破傷風(fēng)等?！度杖A子本草》記載：“治三十六般風(fēng)，男子一切勞劣，補(bǔ)中益神，風(fēng)赤眼，止淚及癱緩，通利五臟關(guān)脈，五勞七傷，羸損盜汗，心煩體重，能安神定志，勻氣脈。”防風(fēng)具有解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗菌、抗炎作用等藥理作用[1-4]。本實(shí)驗(yàn)以5-O-甲基維斯阿米醇苷為指標(biāo)對(duì)防風(fēng)提取工藝進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

KQ250DE超聲波清洗器超聲波檢測(cè)儀器（煙臺(tái)鑫康商貿(mào)有限公司）；EX1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設(shè)備有限公司）；FA1204CFAC型全自動(dòng)內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；PHS-550智能型臺(tái)式酸度計(jì)（杭州陸恒生物科技有限公司）；實(shí)驗(yàn)室用高純水制備器（北京科譽(yù)興業(yè)科技發(fā)展有限公司）；TMSH-6050B超級(jí)恒溫水槽（上海添時(shí)科學(xué)儀器有限公司）；UV1600紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（西安華辰樂(lè)天實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）。5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）。乙腈（廣州市西隴化工有限公司）；甲醇（北京亞太龍興化工有限公司）；乙醇（北京亞太龍興化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素考察

2.1.1 提取次數(shù)

分別取藥材，粉碎為20目，精密稱定，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別提取四次，第一次加10倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，過(guò)濾，減壓濃縮；第二次加10倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)提取兩次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮；第三次加10倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)提取三次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。第四次加10倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)提取四次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中5-O-甲基維斯阿米醇苷含量并計(jì)算5-O-甲基維斯阿米醇苷收率。

2.1.2 藥材粉碎目數(shù)

分別取藥材，分別粉碎為10目、20目、40目，精密稱定，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，加10倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)煎煮三次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中5-O-甲基維斯阿米醇苷含量并計(jì)算5-O-甲基維斯阿米醇苷收率。

2.1.3 加醇倍數(shù)

分別取藥材，粉碎為20目，精密稱定，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別提取四次，第一次加14倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第二次加12倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第四次加8倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，分別過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中5-O-甲基維斯阿米醇苷含量并計(jì)算5-O-甲基維斯阿米醇苷收率。

2.1.4 提取時(shí)間

分別取藥材，粉碎為20目，精密稱定，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別提取三次，第一次加10倍70%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第二次加10倍70%乙醇，超聲提取30分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍70%乙醇，超聲提取35分鐘，連續(xù)四次，分別過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中5-O-甲基維斯阿米醇苷含量并計(jì)算5-O-甲基維斯阿米醇苷收率。

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，粉碎目數(shù)對(duì)5-O-甲基維斯阿米醇苷收率影響不大，提取次數(shù)、加醇倍數(shù)和提取時(shí)間對(duì)5-O-甲基維斯阿米醇苷收率影響較大。選擇提取次數(shù)、加醇倍數(shù)和提取時(shí)間作為考察因素，采用正交試驗(yàn)法對(duì)影響提取效率的其它工藝條件進(jìn)行優(yōu)選。采用3個(gè)考察水平，用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平表見(jiàn)表1。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果 ，確定色譜條件如下[5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相以甲醇：水（4：6）；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：35℃。理論板數(shù)按5-O-甲基維斯阿米醇苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

3.2 供試品溶液的制備

取提取膏適量，精密量取，置50mL量瓶中，加50%乙醇適量，超聲處理十分鐘，放置至室溫，加50%乙醇稀釋至刻度，過(guò)濾，精密吸取25mL續(xù)濾液，蒸干，殘?jiān)铀?0mL分次充分溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的氨試液洗滌3次，每次10mL。分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)?0%甲醇分次溶解，轉(zhuǎn)移到10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得。

3.3 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品5mg，置250mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

將濃度為5μg/ml，10μg/ml，15μg/ml，20μg/ml，25μg/ml，30μg/ml，35μg/ml的對(duì)照品溶液分別吸取20μL注入HPLC，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗(yàn)表明，5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品在5～35μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 回收率試驗(yàn)

取已知含量的同一批供試品各6份，分別精密添加一定量的5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。平均回收率為96.3%，RSD為0.89%。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

按照L9（34）正交設(shè)計(jì)表?xiàng)l件進(jìn)行試驗(yàn)，得到最佳提取工藝為加入10倍量70%乙醇，超聲提取35分鐘，連續(xù)提取2次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高。

參考文獻(xiàn)

[1]李莉，周勇，張麗，陸蘊(yùn)如，王旭丹，葛東宇，鄧巧虹.防風(fēng)多糖增強(qiáng)巨噬細(xì)胞抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1999（03）.

[2]朱惠京，張紅英，吳光，劉艷奎，吳禎久，金光洙，鄭云花.防風(fēng)正丁醇萃取物對(duì)大鼠血液流變學(xué)的影響[J].中草藥，1998（12）.

[3]周勇，馬學(xué)清，嚴(yán)宣佐，張麗，牛建昭，趙離原，陸蘊(yùn)如，葛東宇.防風(fēng)多糖JBO-6體內(nèi)對(duì)小鼠兔疫功能的影響及抗腫瘤作用[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1996（04）.

[4]于斐，賈秋樺.防風(fēng)水煎劑對(duì)肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌生長(zhǎng)的影響[A].中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C].2008.

[5]黃月純；尹雪；魏剛.玉屏風(fēng)煎劑不同配伍對(duì)毛蕊異黃酮苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量的影響[J].2010年廣東省藥師周大會(huì)論文集.