胡鳳明，崔 凱，司丙文，郭寶林，趙麗芳，蘇俊兵，張乃鋒，刁其玉，屠 焰*

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100081；2.北京昕大洋科技發(fā)展有限公司，北京 100081）

酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬生長性能、腸道微生物和血清指標(biāo)的影響

胡鳳明1，崔 凱1，司丙文1，郭寶林2，趙麗芳2，蘇俊兵2，張乃鋒1，刁其玉1，屠 焰1*

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100081；2.北京昕大洋科技發(fā)展有限公司，北京 100081）

本試驗(yàn)旨在研究保育料中添加酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬生長性能、腸道微生物和血清免疫指標(biāo)的影響。試驗(yàn)選擇108頭健康的33日齡杜×長×大三元雜交仔豬，隨機(jī)分為3組，每組6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)6頭仔豬（公、母各半）。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，抗生素組飼喂基礎(chǔ)飼糧＋100 mg/kg桿菌肽鋅+50 mg/kg硫酸粘桿菌素+100 mg/kg喹乙醇；酶菌復(fù)合制劑組飼喂基礎(chǔ)飼糧＋0.5 g/kg酶菌復(fù)合制劑（啤酒酵母菌、地衣芽孢桿菌、堿性蛋白酶等）。結(jié)果表明：酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬的末重、平均日增重、平均日采食量和飼料轉(zhuǎn)化率沒有顯著影響（P＞0.05）；酶菌復(fù)合制劑組與對照組相比腸道乳酸菌含量增加，大腸桿菌含量降低，但各組間差異不顯著（P＞0.05）；酶菌復(fù)合制劑組球蛋白含量顯著高于對照組（P＜0.05），白蛋白/球蛋白顯著低于對照組（P＜0.05），胰島素樣生長因子-1含量顯著高于其他組（P＜0.05），血清總蛋白和免疫球蛋白IgG有增加趨勢（0.05≤P＜0.01）。綜上所述，飼料中添酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬生長性能及腸道微生物沒有顯著影響，但能影響部分血清生化及免疫指標(biāo)，在一定程度上提高了斷奶仔豬的免疫力。

酶菌復(fù)合制劑；斷奶仔豬；生長性能；腸道微生物；血清指標(biāo)

自20世紀(jì)40年代四環(huán)素類抗生素被發(fā)現(xiàn)以來，抗生素便在抑制人和動物的病原菌感染及促進(jìn)動物生長等方面廣泛使用。但隨著抗生素的大量使用甚至濫用，抗生素耐藥菌已經(jīng)成為人類健康的最大威脅?？股乜赏ㄟ^畜禽及水產(chǎn)品中抗生素殘留損害人類健康，也可暴露到環(huán)境中污染食物或水源危及人類健康。對兒童尿液中抗生素濃度的檢測發(fā)現(xiàn)，兒童肥胖與環(huán)境中獸用抗生素的殘留顯著相關(guān)[1]。因此，在畜禽養(yǎng)殖過程中減少或避免使用抗生素可以有效減少抗生素的危害。大量研究表明，益生菌和酶制劑單獨(dú)添加或補(bǔ)充復(fù)合酶制劑對促進(jìn)仔豬生長，改善健康和降低飼養(yǎng)成本具有積極作用[2-4]。酶菌復(fù)合物中益生菌、酶制劑的種類和添加量與其作用效果密切相關(guān)。王杰等[5]對0.30%復(fù)合益生菌（植物乳桿菌、地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌）和0.08%纖維寡糖的研究表明，試驗(yàn)后期仔豬飼料轉(zhuǎn)化率顯著降低，而其他各階段仔豬平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、飼料轉(zhuǎn)化率（F/G）與對照組相比均無顯著差異。目前關(guān)于斷奶仔豬飼糧中同時(shí)添加復(fù)合益生菌和酶制劑的研究有限。本試驗(yàn)旨在研究一種新型酶菌復(fù)合制劑（啤酒酵母菌、地衣芽孢桿菌和堿性蛋白酶等）對仔豬生長性能、腸道微生物和血清免疫指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)用的酶菌復(fù)合制劑由北京昕大洋集團(tuán)提供，主要成分為釀酒酵母菌（活菌數(shù)≥1.5×1010CFU/g）、地衣芽孢桿菌（活菌數(shù)≥0.3×1010CFU/g）、堿性蛋白酶（酶活性≥1 000 U/g），以葡萄糖為載體混合制成。啤酒酵母和地衣芽孢桿菌均為選育，堿性蛋白酶由動物腸道芽孢桿菌液體深層發(fā)酵產(chǎn)生。

1.2 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn) 試驗(yàn)于2015年7月10日—8月15日在北京大興區(qū)龐各莊南小營豬場開展。

1.3 試驗(yàn)動物及試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，選擇108頭體重相近，體況健康的33日齡（28日齡斷奶）杜×長×大三元雜交仔豬，隨機(jī)分為3個(gè)處理組，分別為對照組（CON）、抗生素組（PC）和酶菌復(fù)合制劑組（PT），每處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)一欄，6頭豬（公、母各半）。對照組飼喂不添加任何抗生素的基礎(chǔ)飼糧；抗生素組飼糧為基礎(chǔ)飼糧+100 mg/kg桿菌肽鋅+50 mg/kg硫酸粘桿菌素+100 mg/kg喹乙醇；酶菌復(fù)合制劑組飼糧為基礎(chǔ)飼糧+0.5 g/kg酶菌復(fù)合制劑（啤酒酵母菌、地衣芽孢桿菌、堿性蛋白酶等）。試驗(yàn)期35 d。

1.4 試驗(yàn)飼糧及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分見表1。仔豬分欄飼喂，采用漏縫地板式飼喂欄，欄內(nèi)設(shè)有食槽和乳頭式飲水器，自由采食和飲水。試驗(yàn)過程中按豬場常規(guī)程序進(jìn)行免疫和管理。每天07:00飼喂一次，記錄每天投料量和剩料量，計(jì)算采食量。投料過程中觀察試驗(yàn)豬有無不正常行為，如精神不振、食欲不佳、腹瀉等。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營養(yǎng)成分

1.5 檢測指標(biāo)與方法

1.5.1 生長性能 在試驗(yàn)第1天和第35天晨飼前，以欄為單位稱重，計(jì)算ADG、ADFI和F/G。

1.5.2 糞便微生物測定 在試驗(yàn)第35天早上稱重之前，從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1頭豬，使用滅菌紗布和醫(yī)用酒精對仔豬肛門及尾根進(jìn)行清洗消毒后，用小勺插入直腸內(nèi)采集糞便樣，并迅速置于10 mL離心管，冷藏并立即帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。紗布、小勺和離心管使用前滅菌。用平板計(jì)數(shù)法檢測直腸糞便微生物菌群數(shù)量，具體步驟參考董曉麗等[6]測定方法。

1.5.3 血清指標(biāo)檢測 試驗(yàn)第35天，每重復(fù)隨機(jī)選擇1頭豬，在晨飼前前腔靜脈采血6 mL，立即離心（3 000 r/min，10 min），取上清液，-20℃保存，待測。測定血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、葡萄糖（GLU）、總膽固醇（TC）、生長激素（GH）、胰島素樣生長因子- I（IGF-I）及免疫球蛋白IgA、IgG、IgM等。TP采用雙縮脲法測定，ALB采用溴甲酚綠法測定，GLB為 TP與ALB之差；GLU采用葡萄糖氧化酶生化分析儀法測定，TC和IGF-I按試劑盒（華英生物技術(shù)研究所）說明書提供的方法測定；IgA、IgG、IgM采用酶聯(lián)免疫吸附法測定。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)軟件的One-Way ANOVA進(jìn)行分析，差異顯著則用Duncan's法進(jìn)行多重比較。P＜0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬生長性能的影響 由表2可知，末重、ADG、ADFI和F/G在CON組、PC組和PT組3組間差異均不顯著（P＞0.05）。但與PC組相比，PT組ADG和ADFI分別提高8.5%和4.0%；與CON組相比，PT組ADG和ADFI分別提高6.7%和5.0%。

表2 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬生長性能的影響

2.2 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬腸道微生物的影響由表3可知，大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量在3組間差異不顯著（P＞0.05）。但與CON組相比，PT組大腸桿菌數(shù)量減少了12.6%，乳酸菌數(shù)量提高了7.1%；與PC組相比，PT組大腸桿菌數(shù)量減少了9.9%，乳酸菌數(shù)量提高了6.7%。

表3 復(fù)合生物質(zhì)制劑對斷奶仔豬腸道微生物的影響 lg（CFU/g）

2.3 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響由表4可知，與CON組相比，PT組顯著提高了GLB和IGF-I的含量（P＜0.05），ALB/GLB顯著降低（P＜0.05）；與PC組相比，PT組IGF-I的含量顯著提高（P＜0.05）；TP含量在2組間差異趨于顯著（0.05≤P＜0.1），ALB、GH、TC和GLU含量在2組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響由表5可知，免疫球蛋白IgG在3組間差異趨于顯著（0.05≤P＜0.1）；IgA和IgM在3組間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

表5 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響 g/L

3 討 論

3.1 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬生長性能的影響 本試驗(yàn)中添加的酶菌復(fù)合制劑是枯草芽孢桿菌、啤酒酵母菌和堿性蛋白酶的復(fù)合物。前人研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌進(jìn)入動物腸道內(nèi)可以生長繁殖，能合成并釋放多種酶和維生素，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收[7]；布拉酵母能抑制動物體多種致病菌并能激發(fā)多種酶發(fā)揮活性，改善腸道菌群平衡[8]；功能性蛋白酶能夠彌補(bǔ)仔豬內(nèi)源酶的不足，抑制某些抗?fàn)I養(yǎng)因子的作用，提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率，改善仔豬生長性能[9]。劉曉琳等[10]研究發(fā)現(xiàn)，地衣芽孢桿菌能顯著提高斷奶仔豬ADG。Collier等[11]研究表明，飼糧中添加啤酒酵母顯著增加了斷奶仔豬ADG。姜建陽等[12]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加復(fù)合蛋白酶顯著提高了魯煙白豬氨基酸回腸表觀消化率。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)合添加地衣芽孢桿菌、啤酒酵母和堿性蛋白酶對仔豬生長性能和飼料轉(zhuǎn)化率并沒有顯著性影響，這與王杰等[6]、董曉麗[7]相關(guān)研究一致。然而，張乃鋒等[13]、楊久仙等[14]、郭雁君等[15]分別對植物乳酸桿菌、角蛋白和活性酵母的研究表明，益生菌和酶制劑可以促進(jìn)仔豬生長，提高飼料轉(zhuǎn)化率。由此可見，目前有關(guān)益生菌、酶制劑及其復(fù)合物等對斷奶仔生長性能的研究結(jié)果并不一致。這可能與試驗(yàn)過程中菌種和酶的類型、活性、添加量及它們之間的互作效應(yīng)有關(guān)。本試驗(yàn)中酶菌復(fù)合制劑組與抗生素組相比對仔豬生長性能的改變并沒有顯著差異，這可能與動物個(gè)體所處的生理狀況有關(guān)，當(dāng)機(jī)體處于應(yīng)激或疾病狀態(tài)時(shí)，能發(fā)揮良好的作用效果，而對于健康生長良好的個(gè)體只能起到保健作用。

3.2 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬腸道微生物的影響 乳酸菌和大腸桿菌是指示腸道菌群健康的主要菌群，通過測定糞便中乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量在一定程度上可以反映腸道菌群變化。斷奶仔豬腸道菌群平衡是其維持健康、提高生長性能的重要保證。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加酶菌復(fù)合制劑增加了糞便中乳酸菌含量，降低了大腸桿菌含量，與對照組和抗生素組差異不顯著。研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌可以降低腸道pH，提高腸道絨毛高度，降低隱窩深度[16]，抑制有害細(xì)菌生長，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收；布拉酵母同樣可以抑制大腸桿菌等致病菌的危害[17]，增加仔豬腸道黏膜層厚度、腸道上皮細(xì)胞數(shù)量及黏膜層內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量[18]，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收。酶制劑對腸道菌群的改變原因可能與其促進(jìn)內(nèi)源酶的分泌，增加營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而促進(jìn)腸道有益菌的生長繁殖有關(guān)。由此可見，本試驗(yàn)中添加的益生菌與蛋白酶的混合生物制劑在一定程度上可以改善斷奶仔豬腸道微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)乳酸菌等有益菌生長繁殖，并對大腸桿菌等致病菌產(chǎn)生抑制作用。

3.3 酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬血清指標(biāo)的影響 血液是動物機(jī)體各種生理活動的參與者，在維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)上起著重要的作用，血液生化及免疫指標(biāo)可以反映機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)代謝、組織器官機(jī)能及機(jī)體免疫防御機(jī)能的變化。血清蛋白含量不僅與機(jī)體蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝狀況密切相關(guān)，在一定程度上還可以反映機(jī)體的免疫水平及生理狀態(tài)。TP和ALB含量升高表明機(jī)體氨基酸及蛋白質(zhì)代謝旺盛，肝臟蛋白質(zhì)代謝及機(jī)體蛋白質(zhì)沉積增加，GLB可與外來的特異性抗原發(fā)生免疫反應(yīng)，用于指示體循環(huán)抗體水平變化。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，仔豬飼糧中添加酶菌復(fù)合制劑可顯著增加血清GLB含量，顯著降低ALB/GLB，TP含量有增加趨勢，表明酶菌復(fù)合制劑有利于機(jī)體蛋白質(zhì)代謝合成和增強(qiáng)機(jī)體免疫力。董曉麗等[6]在斷奶仔豬飼糧中添加含地衣芽孢桿菌的復(fù)合菌制劑發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)14 d時(shí)血清GLB含量顯著升高，ALB/GLB顯著降低；劉輝等[19]研究證明，生長豬飼糧中添加含有酵母的復(fù)合菌顯著增加了血清TP和GLB含量，與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌、酵母菌等益生菌菌體成分中含有可作為抗原及免疫佐劑的成分，如肽聚糖、多肽等，可以刺激動物免疫器官發(fā)育，提高動物體液及細(xì)胞免疫。胡友軍等[20]報(bào)道，在斷奶豬飼料中添加耐高溫活性酵母顯著提高了CD4+/CD8+值及T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，說明活性酵母可以提高仔豬的細(xì)胞免疫水平。芽孢桿菌還可以通過提高抗氧化酶活性和抗氧化陰離子含量并降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量，從而保護(hù)動物免受氧化應(yīng)激，提高抗病力。陳家祥等[21]報(bào)道，在肉雞飼糧中添加50 mg/kg地衣芽孢桿菌與對照組相比，提高了SOD和GSH-Px活性，并降低了MDA含量。

GH和IGF-I是調(diào)控機(jī)體生長發(fā)育的重要激素，與蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂肪代謝密切相關(guān)。Brameld等[22]研究報(bào)道，仔豬生長與血清GH和IGF-I含量呈正相關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組間GH含量差異不顯著，而PT組IGF-I含量顯著高于CON組，這與仔豬生長性能組間差異并不顯著相符，而與酶菌復(fù)合制劑組生長性能高于對照組基本一致。結(jié)果表明以血清生長激素為判斷標(biāo)準(zhǔn)，酶菌復(fù)合制劑對仔豬生長性能有一定的促進(jìn)作用，但差異并不顯著?？赡苁怯捎诿妇鷱?fù)合制劑中益生菌和蛋白酶在動物體內(nèi)代謝產(chǎn)生豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸，進(jìn)而影響GH/IGF-I系統(tǒng)相關(guān)激素的表達(dá)。

膽固醇是血脂的主要成分之一，血清TC可以反映動物機(jī)體脂肪代謝情況。血糖是機(jī)體蛋白質(zhì)合成的基本底物，血清GLU水平變化可以反映碳水化合物的代謝和機(jī)體生理狀態(tài)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，血清TC和GLU含量在3組間差異不顯著，這與血清GH含量差異不顯著相符，在本試驗(yàn)條件下酶菌復(fù)合制劑對斷奶仔豬生長性能的發(fā)揮并沒有明顯的促進(jìn)效果。

血清免疫球蛋白能有效反映機(jī)體體液免疫系統(tǒng)的狀況。血清IgG是體液免疫的主要抗體，在抵御細(xì)菌、病毒入侵機(jī)制中起主要作用。研究表明，飼糧中添加益生菌及蛋白酶可以提高仔豬免疫球蛋白含量。劉虎傳等[23]研究發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬飼糧中添加復(fù)合益生菌顯著提高了斷奶后21 d血清IgG含量。陳生龍等[24]研究發(fā)現(xiàn)，隨著斷奶仔豬飼糧中酵母均含量的增加，血清IgG含量有升高趨勢。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，酶菌復(fù)合制劑組有增加IgG含量的趨勢，這與上述研究結(jié)果相近。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，日糧中添加酵母菌、芽孢桿菌和蛋白酶復(fù)合劑對斷奶仔豬生長性能及腸道微生物沒有顯著影響，而血清GLB、IgG和IGF-I含量顯著增加，ALB/GLB水平顯著降低，在一定程度上增加了斷奶仔豬的免疫力。

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Effect of Compound Preparations of Protease and Probiotics on Growth Performance,Intestinal Microflora and Serum Parameters of Weaned Piglets

HU Feng-ming1, CUI Kai1, SI Bing-wen2, GUO Bao-lin2, ZHAO Li-fang2, SU Jun-bing2, ZHANG Nai-feng1, DIAO Qi-yu1, TU Yan1*
(1.Key Open Laboratory of Feed Biotechnology of the Ministry of Agriculture, Feed Research Institution, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China; 2. Beijing Style Sci.&Tech.Development Co., Ltd., Beijing 100081, China)

The present study was conducted to determine the effects of compound preparations of protease and probiotics on growth performance, intestinal microflora and serum parameters on weaned piglets.One hundred and eight 33 day Duroc×Landrance×Large weaned piglets, were randomly assigned into 3 groups with 6 replicates of 6 piglets per replicate. Control group(CON) were fed a basal diet, antibiotics group(PC) were fed a diet containing bacitracin, colistinsulphate prime and olaquindox, composite biological preparation group(PT) fed diets containing premix of beer yeast, bacillus licheniformis and alkali protease. The results showed that no significant effect on the final body weight, average daily gain, average daily feed intake and F/G of the compound preparations of protease and probiotics to the weaned piglets (P＞0.05). Compared with CON and PC, the number of fecal lactobacilli of PT were improved and the number of fecalE.coilwere reduced, but all groups were not significant (P＞0.05). PT group significantly increased the globulin levels than CON group (P＜0.05), and albumin/globulin decreased significantly (P＜0.05); the content of insulin-like growth factor I (IGF-I) of PT were significantly increased compared to CON and PC (P＜0.05); the total protein(TP) and immunoglobulin G(IgG) levels of serum in PT group were higher than other group (0.05≤P＜0.01). In conclusion, dietary compound preparations of protease and probiotics have no significant effect on growth performance and gut microflora of weaned piglets, however change some serum biochemical and immune parameters, increase the immunity of weaned piglets to a certain extent.

Compound preparations of protease and probiotics; Weaned piglets; Growth performance; Intestinal microflora; Serum parameters

S828.5

A

10.19556/j.0258-7033.2017-05-103

2016-09-14；

2016-12-04

生豬產(chǎn)業(yè)體系北京創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)專項(xiàng)（BAIC02-2016）

胡鳳明（1991-），男，河南新鄉(xiāng)人，碩士，從事動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)研究，E-mail: zgdxsjyzd@163.com

* 通訊作者：屠焰，研究員，博士生導(dǎo)師，E-mail: tuyan@caas.cn