王向前

（廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣東 廣州 510800）

NF-κB和TLR4在慢性萎縮性胃炎中的表達及意義

王向前

（廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣東 廣州 510800）

目的 探討NF－κB和TLR4在慢性萎縮性胃炎中的表達及意義。方法 選取我院2015年3月至2016年3月期間收治的慢性胃炎和胃癌患者192例，分為A組 （69例，慢性非萎縮性胃炎）、B組 （65例，慢性萎縮性胃炎）和C組 （58例，胃癌）。采用免疫組化SP法分別檢測三組患者胃黏膜中NF－κB和TLR4的表達水平。結(jié)果 A組和B組的NF－κB和TLR4陽性率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05），而C組的NF－κB和TLR4陽性率顯著高于A組和B組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）。結(jié)論 慢性萎縮性胃炎患者NF－κB和TLR4表達水平的提高與胃癌的發(fā)生和發(fā)展有顯著相關(guān)性，在慢性萎縮性胃炎患者中定期檢查NF－κB和TLR4表達水平對胃癌的早期發(fā)現(xiàn)具有重要臨床意義。

NF－κB；TLR4；慢性萎縮性胃炎；胃癌

0 前言

慢性萎縮性胃炎 （chronic atrophic gastritis，CAG）又稱萎縮性胃炎，是一種慢性消化系統(tǒng)疾?。?］。慢性萎縮性胃炎不僅是臨床常見的消化系統(tǒng)難治性疾病，還是胃癌的癌前病變之一。細(xì)胞核因子-B （nuclear factor kappa B，NF-κB）是一組普遍存在的多功能核轉(zhuǎn)錄因子［2］。TLR4（Toll-like receptor 4，TLR4）是一種Toll樣受體，是近年研究的熱點之一。研究［3］表明，TLR4可以通過各種信號通路促進炎癥和腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究通過檢測NF-κB和TLR4在慢性萎縮性胃炎患者中的表達，探討其在CAG預(yù)防和治療中的意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取我院2015年3月至2016年3月期間收治的慢性胃炎及胃癌患者192例，所有患者均符合我院關(guān)于慢性胃炎 （包括慢性非萎縮性胃炎和慢性萎縮性胃炎）及胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。A組 （69例，慢性非萎縮性胃炎）中，男38例，女31例；年齡38～73歲，平均年齡（43.5±10.6）歲。B組 （65例，慢性萎縮性胃炎）中，男36例，女29例；年齡41～75歲，平均年齡（45.2±11.3）歲。C組 （58例，胃癌）中，男32例，女26例；年齡45～81歲，平均年齡（48.8±13.7）歲。三組患者的一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法所有患者在做胃鏡時，用活檢鉗鉗取胃黏膜組織，制成組織切片，分別檢測NF-κB和TLR4。檢測所用SP試劑盒由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，NF-κB和TLR4單克隆抗體均由上海鈺博生物科技有限公司生產(chǎn)。所有胃黏膜組織切片在68℃下進行烤片，持續(xù)20 min，然后進行常規(guī)脫臘脫水，將內(nèi)源性過氧化物酶滅活，在緩沖液中煮沸修復(fù)抗原。先用羊血清封閉非特異性抗原，添加McAb NF-κB和McAb TLR4，在4℃下孵化12 h，加入生物素對二抗進行標(biāo)記，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育0.5 h，用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）進行沖洗，用二氨基聯(lián)苯胺 （DAB）染色并進行復(fù)染，接著進行透明、脫水和干燥，最后封片并在光學(xué)顯微鏡下進行觀察。

1.3 評價指標(biāo)NF-κB陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：胞質(zhì)和 （或）胞核呈棕黃色顆粒。TLR4陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞漿或細(xì)胞膜呈棕黃色顆粒。每張切片均在光學(xué)顯微鏡下選取多個 （通常為≥5個）高倍視野進行觀察計數(shù)，計數(shù)的細(xì)胞宜＞500個，根據(jù)細(xì)胞的染色度以及陽性細(xì)胞的比例計算SP評分。染色度評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：細(xì)胞沒有被染色；1分：輕微染色；2分：中度染色；3分：深度染色。著色細(xì)胞比例評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：著色細(xì)胞比例＜5%；1分：著色細(xì)胞比例為5%～25%；2分：著色細(xì)胞比例為25%～30%；3分：著色細(xì)胞比例＞30%。SP評分 =染色度評分 ×著色細(xì)胞比例評分。根據(jù)SP評分判斷患者 NF-κB和TLR4的陽性率，評價標(biāo)準(zhǔn)為：陰性 （-）：SP評分為0～1分；弱陽性（＋）：SP評分為2～3分； 中度陽性（＋＋）：SP評分為 4～6分；強陽性（＋＋＋）：SP評分為7～9分。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理，計數(shù)資料用百分比表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

A組和B組患者NF-κB和TLR4陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05），而C組患者NF-κB和TLR4陽性率高于A組和B組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）。見表1、2。

表1 三組患者的NF－κB陽性率比較 ［n，n（%）］

表2 三組患者的TLR4陽性率比較 ［n，n（%）］

3 討論

研究［4］表明，慢性萎縮性胃炎的發(fā)病率和嚴(yán)重程度與患者的年齡呈正相關(guān)，因此認(rèn)為慢性萎縮性胃炎實質(zhì)上是胃黏膜的一種退行性改變，屬于 “半生理”現(xiàn)象。臨床上根據(jù)病變部位的不同和自身血清免疫學(xué)檢查的差異可將慢性萎縮性胃炎分成兩種，一種是自身免疫性慢性萎縮性胃炎 （A型），發(fā)病部位多為胃體部；另一種是多灶慢性萎縮性胃炎 （B型），發(fā)病部位多為胃竇部，B型慢性萎縮性胃炎在我國較為常見［5］。慢性萎縮性胃炎的發(fā)病原因十分復(fù)雜，隨著近年來研究的不斷深入，有數(shù)據(jù)顯示慢性萎縮性胃炎的發(fā)病與遺傳因素、免疫因素、理化因素刺激、慢性疾病、幽門螺旋桿菌感染、神經(jīng)因素等有關(guān)，但慢性萎縮性胃炎的具體發(fā)病機制目前尚未完全明確。

NF-κB在機體的炎性反應(yīng)和免疫應(yīng)答等多種病理和生理過程中都發(fā)揮著非常重要的作用。NF-κB與慢性萎縮性胃炎的發(fā)生和發(fā)展過程密切相關(guān)，且炎癥信號的下游級聯(lián)式反應(yīng)還可能使疾病朝著不良的方向發(fā)展，最終發(fā)展成腫瘤，目前已有臨床研究［6］表明，NF-κB信號通路與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有相關(guān)性。Toll樣受體 （Toll-like receptor，TLR）屬于一種蛋白質(zhì)分子，是非特異性免疫的受體，此外也是特異性免疫和非特異性免疫的連接橋梁，TLR能夠識別細(xì)菌或病毒的保守結(jié)構(gòu)分子，當(dāng)其突破機體的皮膚和黏膜等物理屏障時，它能識別并激活機體產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答。最早發(fā)現(xiàn)TLR與果蠅胚胎的背、腹側(cè)發(fā)育相關(guān)，而隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)在哺乳動物體內(nèi)也有類似受體存在，并統(tǒng)稱為TLR家族。TLR4是人類最先發(fā)現(xiàn)且研究得最多、最為透徹的TLR蛋白，TLR4幾乎分布在所有的細(xì)胞系中，主要在粒細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、骨髓單核細(xì)胞等參與宿主防御功能的細(xì)胞中表達。TLR4不僅可以識別LPS（革蘭氏陰性菌脂多糖）和HSP（熱休克蛋白）等外源性病原體，還可識別透明質(zhì)酸鹽和肝素硫酸鹽降解的多糖部分以及局部內(nèi)源性酶的級聯(lián)活化反應(yīng)。目前有研究［7］表明，經(jīng)TLR4介導(dǎo)的信號通路可能與癌癥的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)。

為了探討慢性萎縮性胃炎向胃癌的發(fā)展機制，為胃癌的早期發(fā)現(xiàn)提供參考，本研究選取我院2015年3月至2016年3月間收治的慢性胃炎及胃癌患者192例，根據(jù)其疾病類型不同分別分為A組 （慢性非萎縮性胃炎）、B組（慢性萎縮性胃炎）和C組 （胃癌），比較三組患者胃黏膜組織NF-κB和TLR4的表達水平，結(jié)果表明A組和B組患者NF-κB和TLR4陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05），而C組患者NF-κB和TLR4陽性率高于A組和B組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），由此可見，NF-κB和TLR4的表達水平與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

綜上所述，NF-κB和TLR4在慢性萎縮性胃炎患者中表達水平的增加與胃癌的發(fā)生和發(fā)展顯著相關(guān)，因此慢性萎縮性胃炎患者定期檢查NF-κB和TLR4表達水平對胃癌的早期發(fā)現(xiàn)具有重要的臨床意義。

[1]李瓊,劉晏,吳堅炯.慢性萎縮性胃炎的治療進展 [J].中醫(yī)學(xué)報, 2013,28(1):114-116.

[2]石建玲,段戀,程波,等.胃幽門螺桿菌感染與慢性胃炎病理變化的相關(guān)性分析 [J].中國實驗診斷學(xué),2015,19(12):2069-2072.

[3]王小娟,羅燕,喻斌,等.滅幽湯對幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎脾胃濕熱證模型小鼠TLRs/NF-κB65信號通路的影響 [J].世界華人消化雜志,2014,22(23):3371-3379.

[4]陳凝.NF-κB信號通路在幽門螺桿菌致病機制中的作用的研究[D].福州:福建醫(yī)科大學(xué),2008.

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[6]鐘國新.針刺對慢性萎縮性胃炎模型大鼠NF-κB轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)影響的研究 [D].廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué),2014.

[7]沙偉.升陽益胃湯阻斷萎縮性胃炎大鼠細(xì)胞TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究 [D].蘭州:甘肅中醫(yī)藥大學(xué),2015.

（責(zé)任編輯：何華）

Expression and Significance of NF-κB and TLR4 in Chronic Atrophic Gastritis

WANG Xiangqian
(Guangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Guangzhou 510800,China)

Objective To explore the expression and significance of NF-κB and TLR4 in chronic atrophic gastritis.Methods 192 cases of patients with chronic gastritis or gastric cancer admitted to our hospital from March 2015 to March 2016 were selected and divided into group A(69 cases,chronic non-atrophic gastritis),group B(65 cases,chronic atrophic gastritis)and group C(58 cases,gastric cancer). Immunohistochemical SP method was used to test the expression levels of NF-κB and TLR4 in gastric mucous membrane of patients in these groups.Results No statistical difference was found in the positive rates of NF-κB and TLR4 between group A and group B(P＞0.05),but the positive rates of NF-κB and TLR4 of group C were significantly higher than those of group A and group B,with statistical differences(all P＜0.05).Conclusions The increased expression levels of NF-κB and TLR4 of patients with chronic atrophic gastritis are significantly related to the occurrence and development of gastric cancer.For patients with chronic atrophic gastritis,the regular examination of expression levels of NF-κB and TLR4 is of great clinical significance to the early discovery of gastric cancer.

NF-κB;TLR4;Chronic atrophic gastritis;Gastric cancer

R573.3

：A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.03.0363

2016-12-14

王向前 （1978-），男，河南周口人，碩士研究生學(xué)歷，主治醫(yī)師，研究方向：消化內(nèi)科。