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        CD173在急性白血病中的表達(dá)及臨床意義

        2017-05-19 02:59:52饒若姚紅霞符生苗林麗娥王谷云王述文吳莉芳黃莉海南省人民醫(yī)院血液病研究室海南???/span>570133
        海南醫(yī)學(xué) 2017年9期
        關(guān)鍵詞:白血病干細(xì)胞陽性率

        饒若,姚紅霞,符生苗,林麗娥,王谷云,王述文,吳莉芳,黃莉(海南省人民醫(yī)院血液病研究室,海南 ???570133)

        CD173在急性白血病中的表達(dá)及臨床意義

        饒若,姚紅霞,符生苗,林麗娥,王谷云,王述文,吳莉芳,黃莉(海南省人民醫(yī)院血液病研究室,海南 ???570133)

        目的 探討CD173在急性白血病中表達(dá)及其臨床意義。方法應(yīng)用直接熒光標(biāo)記法,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)我院血液內(nèi)科2016年6~11月收治的42例急性白血病和15例對(duì)照組(非白血病患者)骨髓細(xì)胞進(jìn)行CD173和CD34的檢測。結(jié)果對(duì)照組患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞均未見CD173陽性表達(dá),42例急性白血病患者中陽性率為4.8%,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);CD173在對(duì)照組有核紅細(xì)胞中的陽性率為53.3%,陽性細(xì)胞表達(dá)水平為(23.0±16.4)%,而急性白血病組有核紅細(xì)胞的陽性率為50.0%,陽性細(xì)胞表達(dá)水平(21.3±13.0)%,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);對(duì)照組患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞未見CD34陽性表達(dá),急性白血病組患者陽性率為61.9%,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);26例CD34+急性白血病患者中2例表達(dá)CD173陽性,16例CD34-急性白血病患者中未見CD173陽性表達(dá),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論CD173在急性白血病和非白血病中的表達(dá)無差異。

        CD173;急性白血病;流式細(xì)胞術(shù)

        糖鏈?zhǔn)抢^核酸、蛋白質(zhì)后的重要的生命大分子鏈。大多數(shù)糖鏈位于細(xì)胞核分泌的大分子的外周表面,它們處在調(diào)控和介導(dǎo)多種細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)相互作用的位置,參與細(xì)胞識(shí)別、分化、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫應(yīng)答等重要活動(dòng)[1]。已知的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物大多為蛋白分子,近來研究發(fā)現(xiàn)一些糖鏈分子也可作為腫瘤干細(xì)胞的特異性標(biāo)志物[2-3]。細(xì)胞表面糖分子CD173(H2,F(xiàn)ucal-2Gal-β1-4GlcNAcβ1-)為末端巖藻化的糖分子。國外有文獻(xiàn)報(bào)道CD173在惡性腫瘤中異常表達(dá),還特意表達(dá)于CD34+的正常造血干細(xì)胞和CD34+的白血病細(xì)胞系。國內(nèi)還未見相關(guān)研究報(bào)道。本研究旨在探討CD173在急性白血病(AL)中表達(dá)及其臨床意義,現(xiàn)報(bào)道如下:

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 AL患者42例(急性白血病組),年齡18~83歲,男性18例,女性24例。其中急性髓細(xì)胞白血病(AML)29例,急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)13例。對(duì)照組15例,為血小板減少、骨髓無明顯異常的非白血病患者。均為本院血液內(nèi)科2016年6~11月住院患者,所有患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)均根據(jù)張之南主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[4]進(jìn)行。

        1.2 試劑和儀器 鼠抗人CD173 AF488單克隆抗體(克隆號(hào)BRIC231,IgG1)及其同型對(duì)照均購自Novus公司,鼠抗人CD34(克隆號(hào)8G12,IgG1)及其同型對(duì)照購自BD公司,檢測儀器為BD AriaⅡ流式細(xì)胞儀。

        1.3 方法 治療前采集患者經(jīng)EDTA抗凝的骨髓1~2 mL,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/mL。骨髓標(biāo)記抗體后室溫下避光反應(yīng)15 min,溶血后用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測。上機(jī)前均使用質(zhì)控?zé)晒馕⑶蛐?zhǔn)儀器,用CD45/SSC設(shè)門,根據(jù)CD45表達(dá)程度和SSC顆粒度大小將細(xì)胞分為粒細(xì)胞群、單核細(xì)胞群、淋巴細(xì)胞群、有核紅細(xì)胞群及原始幼稚細(xì)胞群,通過二維表型圖譜,分析各群細(xì)胞CD173和CD34抗原表達(dá)情況。根據(jù)AL免疫學(xué)特征歐洲協(xié)作組標(biāo)準(zhǔn),≥20%細(xì)胞表達(dá)為陽性,<20%為陰性。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn),計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組患者的CD173表達(dá)比較 對(duì)照組骨髓單個(gè)核細(xì)胞均未見CD173陽性表達(dá),AL中有2例陽性表達(dá),陽性率為4.8%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 0.740,P>0.05),見圖1。

        圖1 AL中CD173陽性表達(dá)

        2.2 兩組患者骨髓中有核紅細(xì)胞CD173的表達(dá)比較 CD173在急性白血病有核紅細(xì)胞中的表達(dá)陽性率為50.0%,陽性細(xì)胞表達(dá)水平為(21.3±13.0)%,對(duì)照組有核紅細(xì)胞中的表達(dá)陽性率為53.3%,陽性細(xì)胞表達(dá)水平為(23.0±16.40)%,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 0.049,t=0.397,P>0.05)。

        2.3 兩組患者的CD34表達(dá)比較 15例對(duì)照組骨髓單個(gè)核細(xì)胞均未見CD34陽性表達(dá),42例AL中有26例陽性表達(dá),陽性率為61.9%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.074,P<0.01),見圖2。

        圖2 AL中CD34陽性表達(dá)

        2.4 AL患者的CD173與CD34的共表達(dá) 26例CD34+AL中2例表達(dá)CD173陽性,16例CD34-AL中無CD173陽性表達(dá),但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 1.292,P>0.05)。

        3 討 論

        細(xì)胞表面糖分子CD173(也稱組織血型H2抗原),是由FUT1基因編碼的末端巖藻酸化的糖分子,是CD174(LeY,F(xiàn)ucal-2Gal-β1-4[Fucal-3]GlcNAcβ1-)的前體分子,均由相同的前體糖鏈衍生而成。在人類,H抗原活性物質(zhì)不僅僅表達(dá)在紅細(xì)胞表面,還表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞和組織。

        研究表明,白血病患者體內(nèi)存在0.1%~1%微量的細(xì)胞群,它們無論在體外長期的細(xì)胞培養(yǎng)中還是動(dòng)物模型體內(nèi)都能引起并維持白血病,被稱為白血病干細(xì)胞(LSC)。LSC通常對(duì)化療不敏感,是導(dǎo)致白血病復(fù)發(fā)的根源[5]。因此對(duì)LSC特異標(biāo)志物的研究可以作為白血病治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)。CD34是目前公認(rèn)的最主要的造血干/祖細(xì)胞表面標(biāo)志物[6]。Cao等[7]報(bào)道CD173特異表達(dá)于CD34+的正常造血干細(xì)胞和多種CD34+的白血病細(xì)胞系,認(rèn)為CD173可能也是造血干細(xì)胞的表面標(biāo)志分子。Lin等[8]研究還發(fā)現(xiàn)CD173表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞,特別是導(dǎo)管原位癌的基底細(xì)胞,提示CD173可能也是乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)志分子。

        本研究檢測了42例急性白血病患者及15例對(duì)照組骨髓細(xì)胞CD173的表達(dá),結(jié)果顯示對(duì)照組骨髓單個(gè)核細(xì)胞均未見CD173陽性表達(dá),AL中白血病細(xì)胞陽性率為4.8%,但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。CD173在急性白血病和對(duì)照組有核紅細(xì)胞中均有表達(dá),但差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。雖然2例CD173陽性患者均同時(shí)表達(dá)CD34,但是CD173的表達(dá)在CD34+AL組和CD34-AL組中的差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。因此本組研究結(jié)果尚不能表明CD173可以作為干細(xì)胞的表面標(biāo)志分子。

        本研究結(jié)果與國外研究報(bào)道的結(jié)果存在差異,原因可能有以下幾點(diǎn):(1)抗體標(biāo)記方法不同。在流式檢測的抗體標(biāo)記方法有直接熒光標(biāo)記法和間接熒光標(biāo)記法。直標(biāo)法操作簡便,結(jié)果準(zhǔn)確,減少了間標(biāo)法中較強(qiáng)的非特異熒光的干擾,一般都盡量選擇直標(biāo)抗體。尤其在流式多熒光測定中,需要多重染色,這時(shí)必需使用直接標(biāo)記法,間接標(biāo)記法增加了染色之間的干擾[9]。本研究使用的直接標(biāo)記法優(yōu)于國外文獻(xiàn)報(bào)道使用的間接標(biāo)記法。(2)抗體克隆號(hào)不同。在抗體選擇時(shí)克隆號(hào)一般不需要特別關(guān)注,同一抗體有多個(gè)克隆號(hào)的情況下,可以選擇熒光標(biāo)記種類最多的那個(gè)克隆。也有報(bào)道指出,不同克隆號(hào)的抗體測定的結(jié)果有差異[10-11]。(3)檢測的樣本不同。

        目前對(duì)于CD173的研究報(bào)道還較少,對(duì)于其在急性白血病骨髓細(xì)胞中的表達(dá)、CD34+白血病細(xì)胞中的表達(dá)及作用尚不明確,還有待于進(jìn)一步研究。

        [1]林煒明,曹毅.細(xì)胞表面糖鏈與腫瘤干細(xì)胞[J].中華病理學(xué)雜志, 2013,42(9):641-643.

        [2]Zhan XX,Zhao B,Diao C,et al.Expression of MUC1 and CD176 (Thomsen-Frieenreich antigen)in papillary thyroid carcinomas[J]. Endocrine Pathology,2015,26(1):21-26.

        [3]Shaikh A,Nagvenkar P,Pethe P,et al.Maolecular and phenotypic characterization of CD133 and SSEA4 enriched very small embryonic-like stem cells in human cord blood[J].Leukemia,2015,29(9): 1909-1917.

        [4]張之南,沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M].3版.北京:科學(xué)出版社,2008:144.

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        [8]Lin WM,Karsten U,Goletz S,et al.Co-expression of CDl73(H2) and CDl74(Lewis Y)with CD44 suggests that fucosylated histo-bloodgroup antigens are markers of breast cancer-initiatingcells [J].Virchows Arch,2010,456(4):403-409.

        [9]溫厚津,陶家平.流式細(xì)胞術(shù)免疫熒光測量中的直標(biāo)及間標(biāo)[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,1995,22(2):159-162.

        [10]嚴(yán)茹紅,張萍,朱雪明.CD4單抗選擇對(duì)于流式細(xì)胞術(shù)分析Th1/Th2極化的有效性評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代免疫學(xué),2007,27(5):368-372.

        [11]劉延方,李國玲,王錦繡.急性白血病患者骨髓細(xì)胞CD44的表達(dá)[J].河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,36(5):593-595.

        Expression of CD173 in acute leukemia and its clinical significance.

        RAO Ruo,YAO Hong-xia,FU Sheng-miao,LIN Li-e,WANG Gu-yun,WANG Shu-wen,WU Li-fang,HUANG Li.Laboratory of Hematology,Hainan Provincial People's Hospital,Haikou 570133,Hainan,CHINA

        ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of CD173 in acute leukemia (AL).MethodsWe used flow cytometry(FCM)and direct immunofluorescence staining to detect CD173 and CD34 of bone marrow cells in 42 AL patients and 15 non-leukemia patients(control group)in Department of Hematology in our hospitalfrom June to November in 2016.ResultsBone marrow mononuclear cells in controlgroup showed no positive expression of CD173,and the positive expression rate of 42 AL patients was 4.8%,with no statistically significantdifference(P>0.05).The CD173 positive rate and positive cell expression levelin nucleated erythrocytosis showed no significant differences between AL patients[50.0%,(21.3±13.0)%]and controlgroup patients[53.3%,(23.0±16.4)%],P>0.05. Bone marrow mononuclear cells in control group showed no positive expression of CD34,and the positive expression rate in AL patients was 61.9%,with statistically significant difference(P<0.01).Two cases showed CD173 positive expression in 26 cases with CD34+AL patients,and CD173 positive expression was not detected in 16 patients with CD34-acute leukemia,with no statistically significant difference(P>0.05).ConclusionCD173 expression in acute leukemia and the non-leukemia group has no significantdifference.

        CD173;Acute leukemia(AL);Flow cytometry(FCM)

        R733.71

        A

        1003—6350(2017)09—1387—03

        10.3969/j.issn.1003-6350.2017.09.004

        2016-12-01)

        海南省衛(wèi)生廳課題(編號(hào):14A210201)

        姚紅霞。E-mail:yaohongxia768@163.com

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