孟婷婷，陳 星，慕甜甜，李倩楠

（西安培華學(xué)院醫(yī)學(xué)院，陜西 西安 710065）

?實驗研究?

大黃對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抗感染能力的研究

孟婷婷，陳 星，慕甜甜，李倩楠

（西安培華學(xué)院醫(yī)學(xué)院，陜西 西安 710065）

本研究通過圓紙片擴散法來檢測不同濃度大黃對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌效果，對比高、中、低三濃度梯度大黃的抑菌效果。結(jié)果顯示：大黃對兩種菌種均有一定的抑制作用，其抑菌效果順序為高濃度＞中濃度＞低濃度，且大黃對金黃色葡萄球菌的抑制作用為高敏，對大腸桿菌的抑菌作用次之。

大黃；抑菌效果；金黃色葡萄球菌；大腸桿菌

葡萄球菌屬于革蘭氏陽性菌，由此引起的食物中毒占整個細(xì)菌性食物中毒的33%。大腸桿菌則是革蘭氏陰性菌的代表，其致病性的大腸桿菌可以通過污染飲水以及食品等引起疾病的暴發(fā)流行，嚴(yán)重者可能會危及到生命。

中國用大黃醫(yī)藥有很悠久的歷史，它屬于蓼科，大黃屬，多年草本，根狀莖及根可藥用。研究表明大黃具有較強的抗感染、抗衰老、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等作用、同時抗炎、解熱、抗病原微生物、具利膽、保肝、瀉下等多項功能。它對多種革蘭氏陽性以及陰性的細(xì)菌都有一定的抑制作用，其中最為敏感的是葡萄球菌及鏈球菌兩種。對致病性的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抗菌研究就顯得尤為重要。金黃色葡萄球菌和大腸桿菌對臨床上很多藥物已經(jīng)產(chǎn)生了一定的耐藥性，新型藥物正在研究。研究發(fā)現(xiàn)大黃對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌有一定抗感染的能力，而大黃作為一種中藥材其抗菌作用還沒有投入臨床。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 大黃

2015年5月購買于老百姓大藥房（西安市科技路西口店），經(jīng)物化分析鑒定為蓼科植物大黃的干燥根和根莖，是屬于藥典正品大黃。

1.1.2 菌種

金黃色葡萄球菌以及大腸桿菌是由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物的實驗室所提供。

1.1.3 培養(yǎng)基

細(xì)菌培養(yǎng)基包含：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，瓊脂520 g，Nacl5 g以及蒸餾水1000 mL，PH7.0-7.1。

1.2 實驗儀器

VD-650凈化工作臺（石家莊泰斯特儀器設(shè)備有限公司）；BCD-1667T ADZ冰箱（青島海爾股份有限公司），201-1型電熱恒溫干燥箱；M215597高壓蒸汽滅菌鍋（上海中西化玻儀器試劑有限公司）。電爐、酒精燈、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、打孔器以及紗布等微生物常規(guī)實驗器械設(shè)備。

1.3 實驗方法

1.3.1 大黃水提物的制備

將大黃的根或者是根莖，加入10倍量的水浸泡0.5小時后，煮沸后再進(jìn)行煎煮30分鐘，使用5層蒸餾水浸潤的紗布來進(jìn)行過濾，獲得濾液，藥渣按前法得到的藥液與上一次合并，靜置2小時。重復(fù)以上步驟再2次，獲得3份藥液。三份藥液減壓濃縮分別獲得25%、55%、95%的濃縮液，高壓滅菌30分鐘，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 制作藥敏片

在三個干燥的培養(yǎng)皿中分別倒入25%、55%以及95%的大黃濃縮液20 mL，然后采用鑷子將其濾紙置于其中4小時，取出置于干燥器皿中，放入電熱恒溫的干燥箱，溫度調(diào)至60℃，待其完全干燥后，連同器皿一塊取出，并放置無菌箱中備用。

1.3.3 抑菌實驗

實驗全程在無菌操作工作臺上進(jìn)行，將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌分別劃線接種于培養(yǎng)皿培養(yǎng)基上，且每種細(xì)菌接種4個培養(yǎng)基。接種環(huán)在酒精燈上滅菌再適量的細(xì)菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細(xì)菌涂于培養(yǎng)皿上。具體步驟如下：接種環(huán)分別取適量細(xì)菌分別在培養(yǎng)皿邊緣相對4點涂布，每點開始劃線至培養(yǎng)皿1/2后找到第二點繼續(xù)直至細(xì)菌均勻涂布于培養(yǎng)皿。可以使用小鑷子對其輕按，讓藥敏片及培養(yǎng)基進(jìn)行緊密的接觸，將培養(yǎng)皿倒置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24小時，觀察效果。具體藥敏片的貼法詳見圖示。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

通過SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計數(shù)資料以例數(shù)（n）、百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗，計量資料以“s”表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

大黃在培養(yǎng)基內(nèi)隨大黃濃度的增減，開始向四周進(jìn)行擴散，然而在圓紙片周圍一定的距離內(nèi)，細(xì)菌的生長受到了一定抑制。培養(yǎng)24小時后會形成抑菌環(huán)，抑菌環(huán)大小的不同表明該菌種對藥物的敏感性不同，且抑菌環(huán)越大，敏感性越強，說明抑菌效果越好等。見表1。

表1 大黃對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抑菌實驗的結(jié)果

高、中、低三種濃度梯度大黃的水浸物對金黃色葡萄球菌以及大腸桿菌都是有一定的抑制作用的。而其中高濃度大黃液抑菌作用最強（平均抑菌環(huán)在14～19 mm），根據(jù)藥敏實驗判定為高敏；中等濃度大黃次之（平均抑菌環(huán)在5～14 mm），根據(jù)藥敏實驗判定為中敏；低等濃度大黃抑菌效果最差（平均抑菌環(huán)在8～11 mm），根據(jù)藥敏實驗判定為低敏。通過大黃對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抑菌實驗結(jié)果對比可知，大黃對金黃色葡萄球菌的抑菌效果（抑菌環(huán)平均為15 mm）優(yōu)于大腸桿菌（抑菌環(huán)平均為11 mm）。結(jié)果證明了大黃具有一定的抗菌作用，且對金黃色葡萄球菌為高敏，這有利于大黃藥物在臨床上推廣和應(yīng)用，并且，其為臨床上關(guān)于疾病的治療研究也是提供了一定的理論依據(jù)。

3 討 論

實驗通過圓紙片的擴散法，檢測得出不同濃度梯度的大黃對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌作用。實驗結(jié)果證實了大黃具有一定的抗菌效果，且濃度越高，其抑菌的效果就越好，這與文獻(xiàn)的報道大體是一致的。而中藥的成分是比較復(fù)雜的，抑菌的效果可能是幾種成分共同作用的結(jié)果，同時抑菌效果與劃線細(xì)菌的濃度以及抑菌圈的大小都會有關(guān)系，這給實驗在客觀上，會造成一定的影響作用。

目前我國抗生素的使用方面還十分的不規(guī)范，缺乏耐藥性，以至于其藥品的生產(chǎn)跟不上細(xì)菌耐藥性的變化，金黃色葡萄球菌尤為嚴(yán)重。大黃含有很多的有效成分，且在我國分布廣泛，資源豐富，而且目前研究大黃沒有副作用，這在臨床上有很大的價值，該實驗積極探討大黃的抑菌抗炎作用，為臨床上大黃藥物的使用和新藥開發(fā)提供一定的支持。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2011.(8):102-104.

[2] 劉飛祥,樊巧琳.大黃治療積證[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2016,(9):1078-1080.

[3] 李鳳娥,包青春,曹銀芳.金黃色葡萄球菌的臨床分布及耐藥性分析[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志,2016,(4):493-494.

[4] 李國旺,苗志國,趙恒章.大黃的體外抑菌實驗[J].光普實驗室,2011,(1):66-68.

[5] 杜小明.醫(yī)院金黃色葡萄球菌感染的耐藥性[J].醫(yī)療裝備,2016,(11):159-160.

本文編輯：王雨辰

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ISSN.2095-8242.2017.009.1601.02

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