張郴+賓婕

摘 要：目的：比較兩種處理方法對脂溶性樣品中正二氫愈瘡酸的萃取和純化效果的影響。方法：選擇了三種脂溶性樣品采用加標(biāo)回收試驗的方式，比較了甲醇和水混合萃取溶劑，甲醇：水=8：2（體積比）方法與正己烷一乙腈分配方法對正二氫愈瘡酸（NGDA）純化效果的影響，用高效液相色譜法（HPLC）進行分析。結(jié)果：用甲醇和水混合萃取法對正二氫愈瘡酸的萃取效率高，純化效果好。結(jié)論：該方法操作簡便、快速，適合于正二氫愈瘡酸（NGDA）抗氧化劑的提取，從而能夠快速、準(zhǔn)確地獲得樣品信息。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；脂溶性樣品；抗氧化劑正二氫愈瘡酸；純化效果

中圖分類號：TS207.3 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1671-2064（2017）04-0193-03

1 正二氫愈瘡酸簡介

正二氫愈瘡酸是一種主要的木脂素，在美國西南和墨西哥生長的一種Larrea tridentate Coville灌木中被發(fā)現(xiàn)。然而，在飲用了含有正二氫愈瘡酸的茶葉或是食用了含有5～10%干重的正二氫愈瘡酸膠囊后[1]，出現(xiàn)了非感染性肝炎的病例[2]，同時研究報告結(jié)論表明過量攝入正二氫愈瘡酸會導(dǎo)致腎損傷。然而，其他一些報告顯示了一些抗氧化劑潛在的毒性、致癌性和致突變性[3]。

對于油脂類樣品的溶劑提取方法，李秀勇等[4]往油脂樣品中加入飽和NaCl溶液，用正己烷飽和乙腈提取，萃取后再用氮氣吹干定溶。鄭毅等[5]用正已烷飽和的乙腈直接提取。Mitsuo OISHI等[6]用乙酸乙酯，并且配合減壓濃縮手段來進行樣品前處理。但大多數(shù)報道的前處理方法比較復(fù)雜。

國內(nèi)外關(guān)于正二氫愈瘡酸的檢測報道較少，方法主要有HPLC—DAD[7-8]、HPLC-FLD[9]、Lc-Ms[10]和毛細管電泳法[11]，但大多數(shù)操作繁瑣。

本文考查兩種不同處理方法對脂溶性樣品中的正二氫愈瘡酸的分離、純化效果，用高效液相色譜法快速測定，該方法簡單、穩(wěn)定，以為正二氫愈瘡酸的檢測提供依據(jù)。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 儀器

高效液相色譜儀：美國安捷倫1200，配置柱溫箱、梯度洗脫功能和熒光檢測器），色譜柱CAPCELL PAK CR（3.5um，250×4.6 mm），分析天平（德國賽多利斯）（精確至0.1mg），超聲發(fā)生器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司，KQ-50DA），離心機（天津市離心儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器（江蘇常州市澳華達儀器廠）。

2.1.2 試藥

正二氫愈瘡酸（純度大于97%；Newjersey，USA；A0196169），表香、秘魯、吐嚕樣品購于市場，乙腈（色譜純， 美國TEDIA天地試劑公司，1008916），甲醇（色譜純，美國TEDIA天地試劑公司，1007901），抗壞血酸（天津市化學(xué)試劑三廠），水（自制超純水），正己烷（分析純，天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心，20050708）。

2.2 方法與結(jié)果

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品的配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。準(zhǔn)確稱取約5mg（精確至0.1mg）正二氫愈瘡酸標(biāo)品，置于100mL容量瓶中用0.1%AsA甲醇定容至刻度，搖勻。（2）樣品的配制。①甲醇和水混合萃取法。分別準(zhǔn)確稱取約2.5g表香、秘魯、吐嚕樣品于100mL具磨口玻璃塞的錐形瓶中，準(zhǔn)確加入30mL甲醇-水組成的混合萃取溶劑，超聲萃取10min；將超聲萃取液移入50mL具塞容量瓶中，分別用5mL上述混合萃取溶劑三次清洗錐形瓶，將清洗溶液注入至容量瓶中，并用混合萃取溶劑定容至刻度后，充分搖勻定容后的萃取溶液；將3mL定容后的萃取液置于10mL帶塞的離心試管中，在5000r/min轉(zhuǎn)速條件下離心分離10min；取1mL上清液過0.45μm濾膜后，進行液相色譜分析，外標(biāo)法定量。②正己烷一乙腈分配法。稱取約1.2g表香、秘魯、吐嚕樣品于離心管中，加人5mL乙睛飽和的正己烷，在液體混勻器上快速混勻以充分溶解樣，加人10mL正己烷飽和的乙睛，于液體混勻器上快速混勻1min，靜置分層，用膠頭吸管將乙睛層轉(zhuǎn)人濃縮瓶內(nèi)。如上操作再用乙睛提取兩次，合并乙睛于濃縮瓶內(nèi)。乙腈提取液在40℃下，用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器濃縮至約1mL，將濃縮液轉(zhuǎn)至5mL刻度管中，用異丙醇定容至2mL，經(jīng)0.45um濾膜過濾，供分析。

2.2.2 結(jié)果

（1）HPLC色譜條件。高效液相色譜儀：美國安捷倫1200，色譜柱：CAPCELL PAK CR（3.5um，250×4.6mm），流動相A：乙腈，流動相B：水；0～5minA相30%，5～20min，A相30～35%。柱溫：40℃；流速：1mL/min；進樣體積：10μL；檢測器檢測波長，λex/λem=280/306nm；對照品及樣品的色譜圖如圖1所示。

（2）線性關(guān)系考察。分別準(zhǔn)確移取0.1、0.3、0.5、1.0、2.0mL正二氫愈瘡酸對照品溶液2.2.1（1）至50mL容量瓶中，采用含0.1%AsA的甲醇溶液定容至刻度。高效液相色譜儀分析，測定其峰面積，以濃度X（ug/mL）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

Y=12.86 X+0.0151，r=1

結(jié)果表明正二氫愈瘡酸標(biāo)品濃度在0.1008～2.016 ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

（3）精密度試驗。分別精密吸取2.2.1（1）項下的正二氫愈瘡酸對照品溶液10μL，連續(xù)進樣5次，記錄色譜圖，計算正二氫愈瘡酸的峰面積和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果RSD為0.30%。

（4）穩(wěn)定性試驗。精密吸取甲醇和水混合萃取法制備的同一表香加標(biāo)樣品溶液10μL，分別于0，2，4，8，12h進樣，記錄色譜圖，計算正二氫愈瘡酸的峰面積和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果RSD為1.06%。

（5）重復(fù)性試驗。取同一表香樣品5份，精密稱定，按2.2.1（2）①項下方法制備，進樣測定，計算正二氫愈瘡酸的峰面積和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果RSD為0.32%。

（6）加標(biāo)回收率試驗。對表香樣品進行不同濃度水平的加標(biāo)后，按照2.2.1（2）①項下方法制備，計算其加標(biāo)回收率，結(jié)果正二氫愈瘡酸的平均加樣回收率為99.30%（RSD= 1.51%）。

（7）樣品含量測定。取表香樣品，分別按2.2.1（2）項下方法制備供試品溶液，進樣6μL，記錄正二氫愈瘡酸的峰面積，由線性方程計算各自含量，測定結(jié)果見表1所示。

3 結(jié)語

實驗結(jié)果表明：甲醇和水混合萃取法操作簡便、快速、萃取效率高，純化結(jié)果好，適合于藥用正二氫愈瘡酸（NGDA）抗氧化劑的提取，從而能夠快速、準(zhǔn)確地獲得樣品信息。相對而言，正己烷一乙腈分配法操作復(fù)雜、繁瑣、萃取效率低，并且峰型不易分開，純化效果差。由此得出：用甲醇和水混合萃取法可以得到更好的萃取效果。

參考文獻

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