陳樂仲， 田小園， 徐傳彬， 張 宇， 何思挺

(廣東省深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院泌尿外科， 廣東 深圳 518102)

COX-2和PCNA在膀胱白斑中表達(dá)的研究

陳樂仲， 田小園， 徐傳彬， 張 宇， 何思挺

(廣東省深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院泌尿外科， 廣東 深圳 518102)

目的：探討COX-2和PCNA在膀胱白斑中的表達(dá)以及臨床意義。方法：采用免疫祖化S-P法，檢測26例膀胱白斑患者以及26例正常尿路上皮以及膀胱癌組織中COX-2和PCNA的表達(dá)情況。結(jié)果：兩種蛋白在正常尿路上皮中偶見表達(dá)，在膀胱白斑中COX-2的陽性表達(dá)為46.15%，膀胱白斑中PCNA的陽性表達(dá)為53.84%。在膀胱癌中COX-2的陽性表達(dá)為76.92%，PCNA的陽性表達(dá)為69.23%。結(jié)論：COX-2和PCNA的表達(dá)與膀胱白斑的發(fā)生相關(guān)，膀胱白斑的發(fā)生以及進(jìn)展可以與膀胱癌的發(fā)生有一定的相關(guān)性。

膀胱白斑； 免疫組織化學(xué)； 環(huán)氧合酶-2； 增殖細(xì)胞核抗原

研究表明腫瘤的的發(fā)生可能與多個(gè)原癌激活與抑癌基因失活等多階段的過程。COX-2(環(huán)氧合酶2)是催化花生四烯酸氧化合成為前列腺素類過程重要的限速酶,COX-2在正常的組織中較少表達(dá)，而在各種腫瘤組織以及炎性反應(yīng)等情況中表達(dá)升高。PCNA(增殖細(xì)胞核抗原)是反應(yīng)細(xì)胞增生的指標(biāo)，在多種腫瘤組織中均有表達(dá)增高的情況。本研究通過免疫組化方法，檢測COX-2以及PCNA在膀胱白斑中的表達(dá)，以探討COX-2以及PCNA在膀胱白斑發(fā)生以及發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2013年1月至2016年8月在我院經(jīng)過膀胱鏡檢查并且經(jīng)活檢病理證實(shí)為膀胱白斑患者26例，患者均為女性，年齡39～55歲，平均年齡42.25±9.86歲。單發(fā)的16例，多發(fā)的10例患者，全部活檢組織再次經(jīng)過10%的福爾馬林固定以及石蠟包埋固定。選擇同時(shí)期在我院行膀胱鏡檢查活檢正常的尿路上皮組織以及膀胱癌患者各26例作為對(duì)照組。

1.2 免疫組化方法：將包埋的蠟塊標(biāo)本行4μm的連續(xù)切片，切片脫蠟后予以過氧化氫阻斷內(nèi)源性酶進(jìn)行抗原修復(fù)。嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行免疫組化染色試驗(yàn)操作流程，使用血清封閉液封閉，室溫下20min后移除多余血清，緩沖液清洗后加入一抗后，4℃過夜，緩沖液清洗后再加入2抗，緩沖液清洗后加入顯色劑顯色，蘇木素復(fù)染后后中性樹脂封片。

1.3 觀察指標(biāo)：根據(jù)染色的強(qiáng)度以及顯色細(xì)胞的比例將染色分為4級(jí)：按照染色深淺評(píng)分,COX-2細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)為0(-)；陽性細(xì)胞數(shù)<25%的為(+)；陽性細(xì)胞數(shù)在25～50%的為(++)；陽性細(xì)胞數(shù)>50%的為(+++)。PCNA定位于細(xì)胞核中，分級(jí)如下：細(xì)胞無著色，陽性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性(-)；細(xì)胞輕度著色至當(dāng)黃色，陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)目在11%～25%的為弱陽性(+)；細(xì)胞著色為黃色，陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)目26%～50%的為陽性(++)；細(xì)胞明顯著色，呈棕黃色，陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)目>50%的為強(qiáng)陽性(+++)。在顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)高倍視野，按照以上標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估。以已知的胃癌做陽性對(duì)照，以正常的尿路上皮組織做陰性對(duì)照。

2 結(jié) 果

2.1 三組患者的一般資料比較：由表1可知，三組患者在性別、年齡方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

表1 三組患者的一般資料對(duì)比

2.2 COX-2與PCNA在正常尿路上皮，膀胱白斑以及膀胱癌組織中的表達(dá)：COX-2是以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃-棕色顆粒為陽性反應(yīng)，正常的尿路上皮中少見陽性表達(dá)，而膀胱白斑中的COX-2表達(dá)明顯增多，在膀胱癌的大部分病例中均見COX-2的表達(dá)。PCNA定位于細(xì)胞核中，正常的尿路上皮中偶見陽性表達(dá)，而膀胱白斑中的PCNA表達(dá)明顯增多，在膀胱癌的大部分病例中均見PCNA的表達(dá)(見圖1)。

圖1 A～E為正常尿路上皮，膀胱白斑以及膀胱癌中COX-2表達(dá)情況(其中圖A、圖B為正常尿路上皮；圖C、圖D為膀胱白斑；圖E、圖F為膀胱癌)。圖G～M為PACA E為正常尿路上皮、膀胱白斑以及膀胱癌中COX-2表達(dá)情況(其中圖G、圖H為正常尿路上皮；圖I、圖D為膀胱白斑；圖K、圖M為膀胱癌)。

2.3 COX-2在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌組織的表達(dá)情況：正常尿路上皮中，有1例呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，1例呈現(xiàn)中等強(qiáng)度陽性反應(yīng)；而在膀胱白斑中COX-2有46.15%(12/26)呈陽性表達(dá)，其中8例呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，4例呈現(xiàn)中等強(qiáng)度陽性反應(yīng)，未發(fā)現(xiàn)強(qiáng)陽性表達(dá)；在膀胱癌的76.92%(20/26)病例中均見COX-2的陽性表達(dá)，但三組組間比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(見表2)。

表2 COX-2在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌的表達(dá)

2.4 PCNA在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌組織的表達(dá)情況：正常尿路上皮中，僅有1例呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，而在膀胱白斑中的PCNA有53.84%(14/26)的病例呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，其中弱陽性10例，中等強(qiáng)度陽性3例，1例強(qiáng)陽性表達(dá)。膀胱癌中有69.23%(18/26)的病例陽性表達(dá)，其中弱陽性3例，中等強(qiáng)度陽性14例，1例強(qiáng)陽性表達(dá)。但三組組間比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(見表3)。

表3 PCNA在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌的表達(dá)

3 討 論

膀胱白斑的形成目前主要認(rèn)為是由于膀胱移行上皮化生為鱗狀上皮，胞核較幼稚，且胞漿內(nèi)可見較豐富的張力原纖維，在連接部位可見豐富的橋粒結(jié)構(gòu)，表層細(xì)胞有明顯的角質(zhì)化，形成角質(zhì)蛋白[1]，隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步以及認(rèn)識(shí)的擴(kuò)展，近年來的報(bào)道逐漸增多，因其與慢性膀胱炎在臨床癥狀與體征上無顯著的差異，且尿常規(guī)以及尿培養(yǎng)也常表現(xiàn)為陰性，因此，常易漏診以及誤診。膀胱白斑發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，認(rèn)為可能與長期的膀胱慢性刺激，下尿路感染，梗阻以及增生性病變有關(guān)，其診斷主要依靠膀胱鏡檢、在膀胱鏡下主要表現(xiàn)為多見于膀胱三角區(qū)的膀胱粘膜白色斑塊狀隆起，在病理檢查上可分為增生型，疣狀型以及萎縮型[2,3]。

環(huán)氧化酶是催化花生四烯酸氧化合成為前列腺素類過程重要的限速酶,目前發(fā)現(xiàn)有兩種亞型，COX-1(環(huán)氧合酶1)與COX-2(環(huán)氧合酶2)，COX-2在人體正常的組織中較少表達(dá)或者無表達(dá)，而在各種腫瘤組織以及炎性反應(yīng)等情況中表達(dá)升高，如胃癌[4-6]、食管癌[7,8]、前列腺癌、肺腺癌以及乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等均發(fā)現(xiàn)高表達(dá)情況，可能與該基因能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，激活癌基因，抑制抑癌基因、腫瘤細(xì)胞凋亡以及機(jī)體抗腫瘤免疫相關(guān)；研究表明COX-2尚能參與實(shí)體腫瘤的血管新生，在膀胱癌中，研究發(fā)現(xiàn)COX-2呈現(xiàn)高表達(dá)的情況，且與腫瘤的分級(jí)以及分期呈正相關(guān)。PCNA(增殖細(xì)胞核抗原)是DNA聚酶的輔酶，能直接參與細(xì)胞內(nèi)DNA的合成，反應(yīng)細(xì)胞增生的情況，且在增殖的細(xì)胞中表達(dá)，而腫瘤細(xì)胞中均有顯著增殖的情況發(fā)生，因此PCNA在多種腫瘤組織中均有表達(dá)增高的情況。研究表明，在泌尿系統(tǒng)膀胱癌中PCNA的增殖隨著分級(jí)的逐漸增高而增加，且浸潤性的高于淺表性腫瘤，復(fù)發(fā)性腫瘤高于未復(fù)發(fā)性腫瘤。

本研究通過免疫組化SP法，以檢測COX-2和PCNA在正常尿路上皮、膀胱白斑以及膀胱癌組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)COX-2是以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃-棕色顆粒為陽性反應(yīng)，正常的尿路上皮中少見陽性表達(dá)，而膀胱白斑中的COX-2表達(dá)明顯增多，其陽性表達(dá)可達(dá)46.15%，但低于膀胱癌中76.92%的陽性表達(dá)。而PCNA定位于細(xì)胞核中，正常的尿路上皮中偶見陽性表達(dá)，而膀胱白斑中的PCNA表達(dá)明顯增多，為53.84%，而在膀胱癌的PCNA的陽性表達(dá)為69.23%，但兩種蛋白的表達(dá)差異情況在三組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明膀胱白斑不是慢性炎性反應(yīng)而造成的，而是一種病理性改變，是可能向著膀胱癌發(fā)展的癌前病變，在臨床發(fā)現(xiàn)診斷后均應(yīng)該積極的及時(shí)的治療。

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Expression of Cyclooxygenase-2 and Proliferating Cell Nuclear Antigen in Bladder Leukoplakia

CHENLezhong,TIANXiaoyuan,etal

(TheCentralHospitalinBaoanDistrictofShenzhen,GuangdongShenzhen518102,China)

Objective:To explore the expression and clinical significance of cyclooxygenase-2 and proliferating cell nuclear antigen in bladder leukoplakia.Methods: The expressions of cyclooxygenase-2 and proliferating cell nuclear antigen in 26 cases of bladder leukoplakia and 26 cases of normal urothelium and 26 cases of bladder carcinoma were detected by immunohistochemistry S-P method. Results: Two kinds of protein expression in normal urothelial were occasional, the expression of cyclooxygenase-2 in bladder leukoplakia was 46.15% and bladder cancer was 76.92%, the expression of proliferating cell nuclear antigen in bladder leukoplakia was 53.84% and bladder cancer was 69.23%. Conclusion: The expression of cyclooxygenase-2 and proliferating cell nuclear antigen is correlated with the occurrence of bladder leukoplakia, and the occurrence and progression of bladder leukoplakia may be related to the occurrence of bladder cancer.

Bladder leukoplakia; Immunohistochemistry; Cyclooxygenase-2; Proliferating cell nuclear antigen

1006-6233(2017)04-0659-04

廣東省深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目，(編號(hào)：JCYJ20150403150555637)

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.04.037