程 思， 邵天波， 郭曉靜

(1.武警云南省總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科， 云南 昆明 6501112.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科， 云南 昆明 650032)

哮喘患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th1/Th2的變化及與病情的相關(guān)性分析

程 思1， 邵天波2， 郭曉靜1

(1.武警云南省總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科， 云南 昆明 6501112.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科， 云南 昆明 650032)

目的：：研究并分析哮喘患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th1/Th2的變化及與病情的相關(guān)性。方法：選取2013年1月至2016年6月我院收治的哮喘患者100例記為觀察組。另取同期100例健康體檢者為對(duì)照組。分別比較兩組人員的外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th1/Th2水平。此外，根據(jù)病情嚴(yán)重程度的不同，將哮喘患者分為急性期組(57例)與緩解期組(43例)，對(duì)比兩組患者的外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th1/Th2水平。并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：觀察組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.6±0.6)%、(6.3±1.1)%，均低于對(duì)照組的(2.3±0.7)%、(11.5±0.9)%，具有顯著性差異(P<0.05)。急性期組外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.2±0.5)%、(4.5±1.0)%，均低于對(duì)照組的(1.9±0.6)%、(9.0±1.2)%，具有顯著性差異(P<0.05)。經(jīng)Spearman相關(guān)分析可得，哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情均呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.583，P<0.001；r=-0.632，P<0.001)。結(jié)論：臨床上通過檢測(cè)哮喘患者的外周血Treg水平與Th1/Th2水平可有效評(píng)估病情嚴(yán)重程度。

哮 喘； 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞； 輔助性T細(xì)胞

本文通過研究哮喘患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th1/Th2的變化及與病情的相關(guān)性并進(jìn)行分析，目的在于為臨床哮喘患者的診斷、治療及預(yù)后評(píng)估提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取2013年1月至2016年6月我院收治的哮喘患者100例記為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)[1]：診斷標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合2003年中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)制定的哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)。②不伴有感染性疾?。虎廴朐?d前未接受免疫抑制劑治療；④無慢性病史。其中男58例，女42例，年齡35～62歲，平均年齡41.4±3.5歲。另取同期100例健康體檢者為對(duì)照組。其中男56例，女44例，年齡33～60歲，平均年齡41.2±3.4歲。兩組人員的年齡、性別等資料比較無顯著性差異(P>0.05)，存在可比性。本研究所有患者均簽署了知情同意書，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

在下一代交換組網(wǎng)中，軟交換和IMS技術(shù)是兩個(gè)重要的階段，但是在實(shí)現(xiàn)目標(biāo)方面卻表現(xiàn)出明顯的一致性，都是通過構(gòu)建下一代交換組網(wǎng)，并且下一代交換組網(wǎng)要體現(xiàn)出分組、層次分明的特征，能實(shí)現(xiàn)對(duì)控制和承載的分離。

1.2 研究方法：①Treg檢測(cè)：所有患者均抽取清晨空腹靜脈血3mL，并取全血100μL，分別加入CD25-PE cocktail以及CD4-FITC各10μL，放置于4℃條件下進(jìn)行孵育30min。加入1mL紅細(xì)胞裂解置10min，同時(shí)采用生理鹽水進(jìn)行反復(fù)沖洗3次。隨后加入Fixation/Perm緩沖液1mL進(jìn)行破膜固定45min，利用洗滌緩沖液反復(fù)洗滌2次。然后取10mL鼠抗人Foxp3-PC單克隆抗體(購自美國貝克曼公司)加入其中，并于4℃條件下孵育30min，再次洗滌緩沖液反復(fù)洗滌2次。最后用flow cytimetry staining buffer重懸，并利用流式細(xì)胞儀(購自美國BD公司)進(jìn)行檢測(cè)。②Th1/Th2檢測(cè)：取所有患者全血100μL，加入RPMI 1640中稀釋，稀釋比為1∶1。隨后在各管中加入10μL的刺激劑(購自美國BD PharMingen公司)，在室溫條件下，放置于5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5h，混勻。加入CD3-PC5以及CD8-PC7各10μL，在室溫、避光條件下孵育15min。各管加入固定液100μL，繼續(xù)在室溫、避光條件下孵育15min。各管分別加入PBS 3mL，以1200r/min，離心5min，去除上清液。然后取100μL的破膜與溶血液加入其中，同時(shí)加入10μL的IFN-γ、IL-4-PE，在室溫、避光條件下孵育15min。各管分別加入PBS 3mL，以1200r/min，離心5min，去除上清液，以0.5mL PBS重懸，上機(jī)檢測(cè)。

綜上,采用復(fù)方丹參滴丸聯(lián)合阿司匹林治療老年不穩(wěn)定型心絞痛相比阿司匹林單獨(dú)用藥,可有效提升治療效果,可考慮作為此類患者的備選方案之一。

2.2 急性期組與緩解期組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平對(duì)比：急性期組外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.2±0.5)%、(4.5±1.0)%，均低于對(duì)照組的(1.9±0.6)%、(9.0±1.2)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3 哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情的相關(guān)性分析：經(jīng)Spearman相關(guān)分析可得，哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情均呈負(fù)相關(guān)。見表3。

2 結(jié) 果

2.1 觀察組及對(duì)照組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平對(duì)比：觀察組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.6±0.6)%、(6.3±1.1)%，均低于對(duì)照組的(2.3±0.7)%、(11.5±0.9)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組及對(duì)照組的外周血調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞和Th1/Th2水平對(duì)比

1.3 觀察指標(biāo)：分別比較不同組別的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平。

表2 急性期組與緩解期組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平對(duì)比

表3 哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情的相關(guān)性分析

3 討 論

支氣管哮喘主要是發(fā)生于兒童時(shí)期的一種慢性疾病，其主要病理學(xué)特征是氣道重塑以及呼吸道炎性反應(yīng)[2]。有研究報(bào)道顯示，哮喘的發(fā)生于機(jī)體免疫功能紊亂存在密切相關(guān)[3]。而T淋巴細(xì)胞及其分泌的多種細(xì)胞因子均在哮喘的氣道慢性變應(yīng)性炎癥中發(fā)揮著重要作用[4]。其中Treg屬于一種免疫調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，與Th1及Th2細(xì)胞存在本質(zhì)的區(qū)別。其主要是通過分泌THF-β、IL-10，從而對(duì)Th2細(xì)胞分泌IL4，IL-5產(chǎn)生抑制作用，進(jìn)一步組織了IgE的生成及分泌，最終對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞以及肥大細(xì)胞所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)產(chǎn)生抑制作用，直接抑制了變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生。隨著近年來相關(guān)研究的不斷深入，輔助性T細(xì)胞在哮喘中的作用也日益受到重視，已成為臨床上研究哮喘發(fā)病機(jī)制的熱點(diǎn)。

建立完善的食品安全監(jiān)督管理體系。建立健全食品安全監(jiān)測(cè)制度是提升食品安全檢測(cè)水平的關(guān)鍵所在，政府部門必須要設(shè)立從食品原材料到最后食品上市的全過程監(jiān)督管理機(jī)制，利用法律來規(guī)范各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量審查，以此來降低食品安全問題出現(xiàn)的概率，進(jìn)而提升我國食品的安全性。

本文研究發(fā)現(xiàn)：觀察組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平均顯著低于對(duì)照組。這提示了哮喘患者體內(nèi)存在Treg細(xì)胞免疫功能障礙，且Th亞群之間的平衡發(fā)生了失衡。而Treg與Th1/Th2水平的變化可能直接參與了哮喘的發(fā)生、發(fā)展過程，并在其中具有極其重要的作用。孫德彬等的研究報(bào)道顯示[5]，Th1所分泌的IFN-γ以及Th2所分泌的IL-4等細(xì)胞因子均在哮喘中起著至關(guān)重要作用。Treg水平的變化則會(huì)對(duì)Th1/Th2細(xì)胞因子水平造成影響。與此同時(shí)，急性期組外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.2±0.5)%、(4.5±1.0)%，均顯著低于對(duì)照組的(1.9±0.6)%、(9.0±1.2)%。這表明可隨著患者病情的不斷加重，其外周血的Treg水平以及Th1/Th2水平均顯著下降，且在此過程中具有較強(qiáng)的一致性。由此我們可初步判斷，哮喘的發(fā)病機(jī)制可能是伴隨著病情的不斷加重，機(jī)體遭受的過敏原刺激程度增加，從而使得患者的外周血中Treg水平下降，免疫調(diào)節(jié)功能出現(xiàn)障礙。同時(shí)，Th2細(xì)胞的活性增強(qiáng)，Th1細(xì)胞活性則遭受抑制，進(jìn)一步導(dǎo)致了Th1/Th2失衡，從而使得大量的抑炎因子生成，最終導(dǎo)致了哮喘的發(fā)生。其中袁穎志等通過研究也證實(shí)了上述觀點(diǎn)[6]：CD4+CD5+Foxp3+Treg細(xì)胞在小鼠哮喘模型的脾臟中表達(dá)低于正常術(shù)，且抑制功能存在明顯的下降，由此認(rèn)為Treg數(shù)量以及抑制功能的降低可能是哮喘發(fā)病的主要機(jī)制。另有研究報(bào)道顯示[7]，Treg細(xì)胞可能會(huì)對(duì)Th2細(xì)胞所分泌的一系列細(xì)胞因子產(chǎn)生抑制作用，進(jìn)一步有效降低了多種致炎因子的活性，從而達(dá)到降低變態(tài)反應(yīng)性疾病發(fā)生的目的。此外，經(jīng)Spearman相關(guān)分析可得，哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情均呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。這提示了我們?cè)谂R床上對(duì)外周血Treg以及Th細(xì)胞亞群進(jìn)行研究，有利于臨床上對(duì)哮喘患者進(jìn)行診斷以及預(yù)后評(píng)估，同時(shí)也可為臨床治療提供指導(dǎo)作用。

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1006-6233(2017)04-0699-04

云南省衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目，(編號(hào)：2015NS32954)

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.04.050