禹小芳，郝知友，鄒玖零，屈蓓蓓，李英明，尹秋元

（湖南省永州市畜牧水產局，湖南永州425000）

畜產品安全

2016年度湖南省永州市活禽市場H7N9流感監(jiān)測分析與防控措施研究

禹小芳，郝知友，鄒玖零，屈蓓蓓，李英明，尹秋元※

（湖南省永州市畜牧水產局，湖南永州425000）

［目的］監(jiān)測湖南省永州市城鄉(xiāng)活禽市場中禽流感病毒的分布狀況，為H7H9流感防控措施的落實提供理論參考依據。［方法］2016年11～12月，從各縣區(qū)監(jiān)測點采集880份外環(huán)境拭子樣品(禽類糞便、籠具表面擦拭、禽類飲水、清洗禽類的污水等標本)，以實時熒光定量RT-PCR方法檢測H5、H7、H9亞型禽流感病毒核酸，并對結果數據統(tǒng)計分析。［結果］H5、H7、H9亞型核酸均有檢出率，H9亞型核酸總體檢出率最高；多發(fā)于濕冷季節(jié)；城區(qū)活禽交易市場的流感病毒陽性檢出率要高于郊區(qū)活禽農貿市場；在外環(huán)境標本中，沖洗禽類的污水為禽流感病毒核酸檢出率最高。［結論］落實“一日一消毒、一日一清洗，一月一休市”措施，提高整潔度，有利于控制清洗禽類的污水里禽流感病毒的傳播，加強執(zhí)行的同時，還應從禽流感亞型、季節(jié)、區(qū)域環(huán)境等因素綜合考量，突出重點，統(tǒng)籌兼顧，全方位對禽流感進行防控。

H7N9；禽流感；實時熒光定量PCR；活禽市場；禽流感防控

禽流感是由禽流感病毒 (Avian influenza virus，AIV)引起的一種禽類傳染病，雞、火雞、鴨和鵪鶉等家禽均可感染，發(fā)病情況差別較大，有的出現急性死亡，有的無癥狀帶毒[1]。水禽是AIV的自然宿主，也是流感病毒的天然基因庫，幾乎所有亞型的流感病毒都可以在水禽中分離到[2]。在世界范圍內，家禽中流行的主要有H5、H6、H7、H9等亞型。H5和H7亞型的某些毒株可以造成禽類很高的發(fā)病率和死亡率，被稱為高致病性禽流感(HPAI)病毒。OIE將高致病性禽流感列為A類動物疫病，我國也將其列為一類動物疫病[3]。2017年1月，全國(不含港澳臺)共報告法定傳染病482 019例，死亡1 121人。其中，人感染H7N9流感發(fā)病數192例，死亡數79人。與2016年12月份數據相比，2017年1月的H7N9疫情明顯上升。截至到2月20日，湖南省2017年報告24例人感染H7N9流感病例，5例死亡。另外，湖南家禽養(yǎng)殖業(yè)因遭受禽流感影響，造成直接經濟損失超過10億。因此，流感不僅給人類健康和公共安全帶來嚴重威脅，還制約著經濟的健康發(fā)展。所以，在嚴峻的流感防控形勢下，加強對H7N9流感監(jiān)測分析與防控措施的研究是十分有必要的。

1 材料與方法

1.1 標本樣品的采集

采集時間和地點：本次采集樣品按時間可分為2016年11月上半月、下半月，12月上半月、下半月四個階段，前三個階段主要針對部分縣區(qū)的城區(qū)活禽交易市場進行隨機采樣。最后一個階段是針對全市城區(qū)活禽交易以及鄉(xiāng)鎮(zhèn)農貿市場進行隨機采樣。

采集樣本：采集外環(huán)境拭子樣品，如糞便標本、籠具表面擦拭標本、禽類飲水、清洗禽類的污水標本等。11月上半月，永州市動物疫病防控中心在11個縣區(qū)城區(qū)活禽交易市場，共隨機采集糞便標本、籠具表面擦拭標本、禽類飲水、清洗禽類的污水標本，共計53份。11月下半月，在11個縣區(qū)的城區(qū)活禽交易市場共隨機采集113份標本。12月上半月在6個縣區(qū)城區(qū)活禽交易，共采集32份標本。12月下半月在全市13個縣區(qū)城鄉(xiāng)活禽交易市場隨機采取監(jiān)測樣品，每個縣區(qū)的禽拭子對樣品與環(huán)境樣品各不低于20份，共采集了686份外環(huán)境樣品進行實驗室檢測。

1.2 檢測試劑

禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原（Re-6株）（哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司出品，批號：2013001、2013005、2014005、2015015），禽流感病毒H5/H7/H9型實時熒光RT-PCR檢測試劑盒（分別為中山大學達安基因股份有限公司、深圳科生源生物科技有限公司產品）。

1.3 檢測方法

禽流感病原檢測按禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法（GB/T19438.1-2004）。從環(huán)境標本中提取病毒RNA后，以實時熒光定量反轉錄－聚合酶鏈反應法(real-time RT-PCR)檢測H5、H7、H9亞型核酸，并記錄相關數據。

1.4 數據處理

將有關數據錄入Excel 2003軟件進行整理，通過SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，并使用GraphPad Prism5軟件制圖。

2 結果與分析

2.1 亞型分布

在永州市城鄉(xiāng)活禽市場外環(huán)境監(jiān)測中，四個時間段的樣品標本檢測實驗結果分別見表1～表4。

表1 2016年11月(上半月)外環(huán)境中各亞型監(jiān)測數據/%

表2 2016年11月(下半月)外環(huán)境中各亞型監(jiān)測數據/%

表3 2016年12月（上半月）外環(huán)境中各亞型監(jiān)測數據/%

表4 2016年12月（下半月）外環(huán)境中各亞型監(jiān)測數據/%

結合表1～表4可以發(fā)現，H5、H7、H9亞型流感病毒在外環(huán)境樣本中均有檢出，且H5、H7、H9亞型核酸陽性平均檢出率分別為2.39%、1.25%和10.8%。結果表明，H5、H7、H9亞型流感病毒在湖南永州均有存在，且H9亞型流感病毒的檢出陽性率總體水平要遠高于其他亞型，在防控H7N9流感病毒的同時，也要警惕其它亞型的發(fā)生。

2.2 季節(jié)分布

表5為2016年4月永州市活禽交易市場禽流感監(jiān)測數據表，對比表4與表5的數據，發(fā)現表4內的H5、H7、H9亞型核酸的平均檢出率均高于表5，表明2016年12月在活禽交易市場潛伏的流感病毒比4月份要高，也驗證了禽流感多發(fā)于濕冷季節(jié)。

表5 2016年4月活禽交易市場外環(huán)境中各亞型監(jiān)測數據/%

2.3 區(qū)域分布

把第四時間段的樣品標按照城郊區(qū)域劃分，城郊區(qū)按相同的標本類型比例（禽類糞便、籠具表面擦拭標本、禽類飲水、清洗禽類污水）在城區(qū)活禽交易市場采集了462份樣品，在郊區(qū)農貿市場采集了224份樣品，檢測結果如表6。城區(qū)活禽交易市場H5、H7、H9亞型核酸的平均陽性檢出率均高于郊區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的農貿市場，而且城區(qū)H7亞型核酸陽性檢出率與郊區(qū)具有顯著差異（P＜0.05），城區(qū)H9亞型核酸陽性檢出率與郊區(qū)具有極顯著差異（P＜0.01）的統(tǒng)計學意義。

表6 2016年12月（下半月）外環(huán)境中各亞型監(jiān)測數據

2.4 標本類型分布

在表1～表4中，H5亞型核酸檢出率最高的為清洗禽類污水(23.53%)，平均檢出率為2.39%。H7亞型流感病毒只在12月清洗禽類污水里有檢出，檢出率為11.76%，平均檢出率為1.25%。H9檢出率最高的為清洗禽類污水（71.05%），平均檢出率為14.09%。

圖1 2016年11～12月永州市禽流感外環(huán)境監(jiān)測數據

如圖1所示，H5、H7、H9亞型流感病毒在清洗禽類污水的檢測率均高于其他類型的標本，H5亞型流感病毒檢出最高的為禽類污水標本，最低為禽類糞便。H7亞型流感病毒只在糞便標本與禽類污水標本有檢出，H9在清洗禽類污水標本的檢出率顯著高于籠具表面擦拭標本（P＜0.05），驗證了濕潤的環(huán)境更適合流感病毒生存。

3 討論

通過本實驗，禽流感H5、H7及H9亞型禽流感病毒在永州均有分布，2016年12月各亞型禽流感陽性檢出率均高于4月份，驗證了禽流感病毒多發(fā)于濕冷氣候。防控禽流感應該納入重大動物疫病防控的常態(tài)工作中來。在區(qū)域分布上看，城區(qū)的活禽交易市場禽流感陽性檢出率要高于郊區(qū)，禽流感防控工作需要突出區(qū)域重點。從標本類型來看，永州市活禽市場環(huán)境標本H5亞型禽流感病毒檢出率最高的是清洗禽類污水標本，最低的是禽類糞便標本，籠具表面擦拭標本與飲水標本的陽性檢出率高低不具備統(tǒng)計學意義?？赡芤环矫?，禽流感病毒在水中有較高的存活率，在同等的條件下水比籠具更適合禽流感病毒的生存，另一方面飲水樣本的來源較復雜，且水具有流動性，即檢出結果跟水源有直接關系。所以，清洗消毒能很大程度限制禽流感病毒的傳播。

2013年危害我國的H7N9亞型流感病毒的6個內部基因全部來源于近年在我國流行的H9N2亞型禽流，感病毒凸顯了不同亞型禽流感病毒基因重配的潛在威脅性和公共衛(wèi)生學意義[5]。本次檢測結果顯示，H9亞型禽流感病毒有較高的陽性檢出率，混合陽性在上述各類環(huán)境標本中也有存在，為流感病毒發(fā)生基因重配提供了可能。我們在防控H7N9型禽流感的同時，也應該加強其他亞型的禽流感病毒的檢測與防控[4]。

4 結論

禽流感是由流感病毒引起禽類的一種從呼吸系統(tǒng)到嚴重全身敗血癥等多種癥狀的傳染病，多發(fā)生冬春季節(jié)。主要經呼吸道傳播，通過密切接觸感染的禽類及其分泌物、排泄物，受病毒污染的水等，以及直接接觸病毒毒株被感染。禽流感病毒對熱比較敏感，65℃加熱30min或煮沸（100℃）2min以上可滅活。病毒在糞便中可存活1周，在水中可存活1個月，在pH＜4.1的條件下也具有存活能力。病毒對低抗溫抵力較強，在有甘油保護的情況下可保持活力1年以上。病毒在直射陽光下40～48h即可滅活，如果用紫外線直接照射，可迅速破壞其傳染性。

綜上所述，我們應該貫徹《湖南省防治重大動物疫病指揮部關于進一步做好H7N9禽流感防控工作的緊急通知》，提高對禽流感的認識，進一步加大活禽交易市場監(jiān)管力度，進一步加大病毒監(jiān)測力度，進一步落實養(yǎng)禽場綜合防控措施。執(zhí)行湘防重病指〔2014〕1號提出的“一日一清洗，一周一消毒，一月一休市”措施，嚴把活禽市場清洗消毒關，收窄禽流感病毒傳播途徑。此外，面對亞型多變的禽流感病毒，我們還可以借鑒國外對禽流感的防控經驗以及創(chuàng)新有力的禽流感防控措施[5]。 □

[1]Simo n M.Global.advances in poultry disease research[J].World Poultry,2003，(7):6.

[2]Webster RG,Bean WJ,Gorman OT,et al.Evolution and ecology of influenza A viruses[J].Microbiological Reviews,1992,56(1):152-179.

[3]甘孟侯.禽流感[M].北京:北京農業(yè)大學出版社,1995.

[4]Jiang W，Liu S，Hou G，et al.Chinese and global distribution of H9 subtype avian influenza viruses[J].PLoS One,2012,7（12）:e52671.

[5]陳繼明.我國禽流感等禽病防控六大新策略 [J].中國動物檢疫, 2014,31（2）:82-85.

S851.3

A

1006-4907（2017）02-0002-03

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.02.002

2017-03-21

禹小芳（1988～），男，漢族，碩士，研究方向為動物疫病預防與控制，yuxiaofangsy@126.com。

尹秋元（1970～），男，漢族，高級獸醫(yī)師，大學本科，研究方向為動物疫病預防與控制。