羅勝玉，徐冬冬，樓寶，陳睿毅，詹煒，毛國(guó)民

（1.浙江海洋大學(xué)，浙江舟山316004；2.浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山316100）

低溫脅迫對(duì)黃姑魚(yú)（Nibea albiflora）抗氧化酶、Na+/-K+-ATP酶及Hsp70蛋白含量的影響

羅勝玉1，2，徐冬冬2，樓寶2，陳睿毅2，詹煒2，毛國(guó)民2

（1.浙江海洋大學(xué)，浙江舟山316004；2.浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山316100）

為探討低溫處理對(duì)黃姑魚(yú)幼魚(yú)生理機(jī)能的影響，以18℃為對(duì)照組，設(shè)置8℃、10℃和14℃3個(gè)低溫脅迫組，測(cè)定不同溫度急性脅迫對(duì)黃姑魚(yú)幼魚(yú)（Nibea albiflora）超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、Na+/-K+-ATP酶活力以及熱休克蛋白70（Hsp70）蛋白含量的影響。研究結(jié)果表明，低溫脅迫組（8℃、10℃和14℃）的SOD和CAT酶活力隨著脅迫溫度的降低及其脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)呈先升高后降低的趨勢(shì)，在72 h時(shí)恢復(fù)到對(duì)照組水平。肌肉中的Na+/-K+-ATP酶活力則隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)，10℃和14℃組能夠在72 h時(shí)恢復(fù)到對(duì)照組水平，而8℃組則在72 h仍顯著低于對(duì)照組。低溫脅迫下黃姑魚(yú)肌肉的Hsp70含量隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)呈先升高后降低趨勢(shì)，10℃和14℃組能夠在72 h時(shí)恢復(fù)到對(duì)照組水平，而8℃組則在72 h仍顯著高于對(duì)照組。由此說(shuō)明，SOD、CAT、Na+/-K+-ATP以及Hsp70蛋白參與了黃姑魚(yú)低溫脅迫應(yīng)答過(guò)程，可以作為其低溫脅迫應(yīng)答的標(biāo)志物。

微低溫脅迫；黃姑魚(yú)；SOD酶；CAT酶；Na+/-K+-ATP酶；Hsp70

黃姑魚(yú)（Nibea albiflora）是我國(guó)重要的海水經(jīng)濟(jì)魚(yú)類，具有生長(zhǎng)快、抗逆性強(qiáng)、繁殖力強(qiáng)等特點(diǎn)，是開(kāi)展近海網(wǎng)箱和池塘養(yǎng)殖的適宜品種（雷霽霖等，1992）。隨著黃姑魚(yú)繁育技術(shù)日趨成熟，其養(yǎng)殖規(guī)模在浙江、福建沿海迅速擴(kuò)大，成為我國(guó)東南沿海重要的養(yǎng)殖魚(yú)種。但是，近年來(lái)由于全球環(huán)境破壞導(dǎo)致氣候異常變化，我國(guó)沿海地區(qū)冬季常遭寒潮侵襲，致使養(yǎng)殖的黃姑魚(yú)大量?jī)鏊?，尤以浙江沿海地區(qū)為甚，導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重制約了養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，提高養(yǎng)殖黃姑魚(yú)的耐低溫能力，培育耐寒品種具有重要意義。

魚(yú)類作為變溫動(dòng)物，其生理狀況與溫度變化密切相關(guān)，對(duì)低溫的適應(yīng)過(guò)程也是一系列細(xì)胞應(yīng)答、逐級(jí)調(diào)控全身系統(tǒng)參與抵御的復(fù)雜生理過(guò)程（Donaldson et al，2008）。低溫脅迫是研究魚(yú)類耐寒機(jī)理的重要手段，從生理、生化等角度尋找與響應(yīng)低溫適應(yīng)的標(biāo)志物是研究魚(yú)類低溫響應(yīng)過(guò)程并解析其低溫適應(yīng)機(jī)制的可行途徑。一般而言，與免疫、代謝等相關(guān)的酶在魚(yú)類低溫脅迫應(yīng)答中起到十分重要的作用，受到研究者的關(guān)注，其中，抗氧化酶、熱休克蛋白、三磷酸腺苷酶等常常作為檢測(cè)魚(yú)類低溫脅迫應(yīng)答的標(biāo)志物。Heise等（2006）研究了北海綿鳚（Zoarces viviparous）低溫脅迫后抗氧化酶活力變化；Mladineo等（2009）研究了金槍魚(yú)在低溫和高溫脅迫下的Hsp70和Na+/K+-ATPase在高溫和低溫適應(yīng)的表達(dá)模式；劉波等（2011）研究了低溫應(yīng)激對(duì)肝臟Hsp70基因表達(dá)及吉富羅非魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響。

目前，關(guān)于黃姑魚(yú)的研究主要集中在苗種繁育、養(yǎng)殖技術(shù)、生態(tài)毒理、病害和雌核發(fā)育等方面（雷霽霖等，1992；徐冬冬等，2013；楊育凱等，2013），而關(guān)于黃姑魚(yú)低溫適應(yīng)方面的研究較少涉及。本文通過(guò)研究低溫脅迫下黃姑魚(yú)幼魚(yú)超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）等抗氧化酶以及Hsp70和Na+/K+-ATPase的變化，探討低溫處理對(duì)黃姑魚(yú)幼魚(yú)生理機(jī)能的影響，以期為研究黃姑魚(yú)對(duì)環(huán)境溫度的適應(yīng)機(jī)制和健康養(yǎng)殖提供必要的理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持，并為黃姑魚(yú)耐寒品種的選育奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用黃姑魚(yú)由浙江省海洋水產(chǎn)研究所西軒漁業(yè)科技島人工培育，體長(zhǎng)為（18.25±2.10）cm，體重為（120.15±2.36）g。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前于（18.0± 1.0）℃海水暫養(yǎng)2周。所用海水經(jīng)過(guò)沙濾，鹽度28，pH 8.2~8.6，溶氧≥6 mg/L，連續(xù)充氣，每日換水1次，換水量50%。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃姑魚(yú)由18℃移至6℃后短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)死亡，而移至8℃后未發(fā)現(xiàn)死亡℃，因此設(shè)置18℃、14℃、10℃、8℃4個(gè)溫度組，每組設(shè)置2個(gè)平行。每個(gè)平行組即1個(gè)桶（500 L）放置30尾魚(yú)，當(dāng)水溫降至設(shè)定溫度后迅速將魚(yú)放入實(shí)驗(yàn)桶內(nèi)，水溫由海水制冷機(jī)循環(huán)系統(tǒng)調(diào)控，溫度誤差控制±0.2℃。

在0 h、2 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h分別取樣，每個(gè)處理組隨機(jī)取3尾，解剖取其鰓絲、肌肉和肝臟，用生理鹽水洗凈，保存于RNA保護(hù)液中備用。蛋白含量以牛血清蛋白為標(biāo)準(zhǔn)，采用考馬斯亮蘭法測(cè)定。所有酶活力及Hsp70含量均采用南京建成生物公司的試劑盒測(cè)定，操作步驟參照說(shuō)明書(shū)。SOD酶活力單位定義為每毫克組織蛋白在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為一個(gè)SOD活力單位（U）。CAT活力單位定義：每毫克組織蛋白每秒鐘分解1 μmol的H2O2的量為一個(gè)活力單位（U）。Na+/-K+-ATP酶活力的單位定義：規(guī)定每小時(shí)每毫克組織蛋白的組織中ATP酶分解ATP產(chǎn)生1 μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)ATP酶活力單位（U），即微摩爾磷/毫克蛋白/小時(shí)（μmolPi/mgprot/h）。Hsp70含量單位為ng/mgprot。

1.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處

所得數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，各組數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.1中的方差分析（ANOVA）和Duncan氏檢驗(yàn)法進(jìn)行顯著性分析，顯著水平設(shè)置為P=0.05。采用EXCEL 2007軟件作圖。

2 結(jié)果

2.1不同溫度處理的黃姑魚(yú)組織的SOD酶活力比較

脅迫溫度和脅迫持續(xù)時(shí)間顯著影響肝臟、鰓和肌肉組織中的SOD酶活力（Two-way ANOVA，P<0.01）（如圖1）。8℃處理組中肝臟組織的SOD酶活力在2 h時(shí)急劇升高，之后隨脅迫時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降，在72 h時(shí)與對(duì)照組無(wú)顯著性差異（P> 0.05）；鰓和肌肉中的SOD酶活力則在6 h時(shí)達(dá)到最高，隨后逐漸降低，在72 h恢復(fù)到對(duì)照組水平。10℃處理組中，肝臟和肌肉SOD酶活力在6 h最高，鰓中SOD酶活力則在12 h最高，隨后逐漸降低至對(duì)照組水平。14℃處理組中，肝臟SOD酶活力在6 h最高，而鰓和肌肉SOD酶活力則在12 h最高。3種組織中SOD酶活力均呈先升高后下降的趨勢(shì)，在72 h與正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異（ANOVA，P>0.05）。

2.2不同溫度處理的黃姑魚(yú)組織中CAT酶活力比較

不同低溫脅迫處理組黃姑魚(yú)幼魚(yú)組織中CAT酶活力的比較（如圖2）。脅迫溫度和脅迫持續(xù)時(shí)間顯著影響3種組織中的CAT酶活力（Two-way ANOVA，P<0.05）。3種組織的CAT酶活力隨脅迫時(shí)間延長(zhǎng)呈先升高后下降的趨勢(shì)，在72 h恢復(fù)至正常對(duì)照組水平。8℃、10℃和14℃處理組的肝臟和肌肉組織的CAT活力在脅迫6 h后達(dá)到最高，其后逐漸下降，在72 h時(shí)與正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異。在鰓組織中，8℃和10℃處理組的CAT酶活力在脅迫2 h后達(dá)最高，其后下降至對(duì)照組水平。

2.3不同溫度處理黃姑魚(yú)的肌肉中Na+/-K+-ATP酶活力比較

不同低溫處理組的黃姑魚(yú)幼魚(yú)肌肉中Na+/-K+-ATP酶活力比較（如圖3）。8℃組的肌肉組織中Na+/-K+-ATP酶活力隨時(shí)間呈先下降后上升的趨勢(shì)，Na+/-K+-ATP酶活力在脅迫12 h達(dá)到最低，其后酶活力有所升高，但在72 h仍顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。10℃和14℃組的Na+/-K+-ATP酶活力隨脅迫時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)先降低后上升的趨勢(shì)，10℃和14℃分別在脅迫后12 h和6 h最低，在72 h時(shí)與對(duì)照組的Na+/-K+-ATP酶活力無(wú)顯著性差異（P> 0.05）。

圖1 低溫脅迫下黃姑魚(yú)肝臟、鰓和肌肉等組織SOD酶活力

2.4不同溫度處理的黃姑魚(yú)肌肉中Hsp70含量比較

脅迫溫度和脅迫時(shí)間顯著影響黃姑魚(yú)肌肉中的Hsp70含量（Two-way ANOVA，P<0.05）。8℃組肌肉中Hsp70含量在6 h內(nèi)急劇升高，其后隨脅迫時(shí)間延長(zhǎng)而降低，在72 h時(shí)仍顯著高于對(duì)照組（P>0.05）。10℃組和14℃組隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，10℃組Hsp70含量在6 h時(shí)最高，14℃組在Hsp70含量在12 h時(shí)最高，在72 h時(shí)，兩組的Hsp70含量與對(duì)照組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

圖2 低溫脅迫下黃姑魚(yú)肝臟、鰓和肌肉等組織CAT酶活力

圖3 低溫脅迫下黃姑魚(yú)肌肉Na+/-K+-ATP酶活力

圖4 低溫脅迫下黃姑魚(yú)肌肉Hsp70含量

3 討論

3.1低溫脅迫對(duì)黃姑魚(yú)抗氧化酶活性的影響

低溫脅迫可造成自由基在體內(nèi)快速大量積累，導(dǎo)致正常細(xì)胞和組織的損壞，引發(fā)膜脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，從而引起疾?。ˋdams et al，1985；Pascual et al，2003；Morales et al，2004；Martínez-álvarez et al，2005；謝妙，2012）。超氧化物歧化化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）是自由基清除體系中的兩種關(guān)鍵酶類，其動(dòng)態(tài)變化可以準(zhǔn)確地反映機(jī)體內(nèi)自由基的代謝及組織的氧化損傷情況，對(duì)判斷機(jī)體的健康狀況及免疫防御能力具有重要的參考價(jià)值（嚴(yán)建偉，1998；洪美玲等，2007；謝妙，2012）。本研究中，低溫脅迫對(duì)黃姑魚(yú)肝臟、鰓和肌肉組織的SOD和CAT氧化酶活力具有顯著影響，在脅迫初期兩種氧化酶活力顯著升高，表明黃姑魚(yú)在受到溫度脅迫后，其體內(nèi)的抗氧化還原酶活力會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的響應(yīng)變化，其他研究中也表明了這點(diǎn)。如卵形鯧鲹（Trachinotusovatus）受到低溫脅迫后，其體內(nèi)的SOD和CAT等抗氧化還原酶活性在24 h內(nèi)顯著升高（劉汝建等，2013）；對(duì)北海綿鳚（Zoarcesviviparous）進(jìn)行急性冷刺激也發(fā)現(xiàn)其肝臟SOD活性顯著增加（Heise et al，2006）。SOD、CAT等酶活力的升高的原因可能是低溫引起體內(nèi)活性氧自由基（ROS）急劇升高有關(guān)，由此誘導(dǎo)機(jī)體內(nèi)抗氧化酶活力逐漸升高以清除體內(nèi)多余ROS。隨著低溫脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，各溫度組的SOD和CAT酶活力恢復(fù)到對(duì)照組水平，表明隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，黃姑魚(yú)幼魚(yú)體內(nèi)的抗氧化酶能夠消除體內(nèi)自由基的累積，建立新的適應(yīng)機(jī)制，從而SOD和CAT酶活力恢復(fù)到到正常水平（Martínez-álvarez et al，2005）。就肝臟、鰓和腎臟三種組織而言，SOD和CAT酶活力受低溫影響的程度在不同組織存在差異，但低溫脅迫后SOD和CAT酶活力均呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)。

3.2低溫脅迫對(duì)黃姑魚(yú)肌肉中Na+/-K+-ATPase活力的影響

Na+/-K+-ATPase屬于膜束縛酶，低溫能夠引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的變化從而引起膜的半透性和膜束縛酶的活性等一系列生理過(guò)程的改變（徐德立，2002）。Na+/-K+-ATPase酶（又稱Na-K泵）是細(xì)胞膜固有的一種蛋白脂質(zhì)復(fù)合體，其主要生理功能是維持生物體正常的生理代謝和能量代謝。許多研究表明，低溫能夠改變Na+/-K+-ATPase酶活力（Haque et al，2011；Galarza-Mu?oz et al，2011；Kang et al，2015），因此，Na+/-K+-ATPase酶常作為評(píng)價(jià)環(huán)境壓力的指標(biāo)。本研究中，低溫脅迫組的Na+/-K+-ATPase酶活力顯著低于對(duì)照組，表明低溫能夠顯著影響黃姑魚(yú)Na+/-K+-ATPase酶活力，這與其他水產(chǎn)動(dòng)物如克氏原螯蝦、吉富羅非魚(yú)等的研究結(jié)果一致（郭春雨等，2007；王海貞等，2012）。在低溫脅迫的12h內(nèi)，黃姑魚(yú)肌肉的Na+/-K+-ATPase酶活力顯著降低，此后隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)各低溫脅迫組的酶活力逐漸升高，10℃和14℃組在72 h達(dá)到對(duì)照組水平。黃姑魚(yú)體內(nèi)Na+/-K+-ATPase的酶活力變化與抗氧化酶活力變化呈現(xiàn)不同趨勢(shì)。Na+/-K+-ATPase酶活力變化一方面可能是由于在低溫脅迫的最初階段，黃姑魚(yú)受到冷刺激后生物膜流動(dòng)性降低，引起膜束縛酶活性降低，從而導(dǎo)致Na+/-K+-ATPase酶活力降低，另一方面可能是由于低溫刺激本身也可使ATPase構(gòu)象發(fā)生改變，進(jìn)而使其活力下降；其后，隨著脅迫時(shí)間延長(zhǎng)，魚(yú)體逐漸適應(yīng)周?chē)h(huán)境，調(diào)節(jié)體內(nèi)的適應(yīng)機(jī)制達(dá)到新的平衡，故Na+/-K+-ATPase酶活性升高（Kang et al，2015）。然而，8℃組Na+/-K+-ATPase酶活力在急劇升高后有所降低，但在脅迫過(guò)程中顯著高于18℃組，該組黃姑魚(yú)表現(xiàn)出游動(dòng)減少、行動(dòng)緩慢，推測(cè)可能是過(guò)低的溫度破壞了細(xì)胞膜流動(dòng)性，無(wú)法在魚(yú)體內(nèi)建立新的平衡，導(dǎo)致Na+/-K+-ATPase酶活力降低。

3.3低溫脅迫對(duì)黃姑魚(yú)Hsp70的影響

熱休克蛋白Hsp70在機(jī)體內(nèi)作為一種分子伴侶而對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用，可調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理功能，提高細(xì)胞對(duì)應(yīng)激反應(yīng)的耐受性（謝妙，2012），因此，Hsp70常作為機(jī)體受到應(yīng)激刺激時(shí)反映其細(xì)胞功能狀態(tài)和抗應(yīng)激能力的指標(biāo)之一。Hsp70根據(jù)其表達(dá)情況可以分為組成型和誘導(dǎo)型，前者存在于非應(yīng)激狀態(tài)的正常細(xì)胞中，在正常情況下即表達(dá)，應(yīng)激后不變或稍有增加；后者在正常細(xì)胞中，表達(dá)水平較低甚至無(wú)法檢測(cè)到，而在應(yīng)激后則明顯升高（王美垚，2009）。本研究測(cè)定了黃姑魚(yú)細(xì)胞內(nèi)總的Hsp70蛋白表達(dá)量，Hsp70蛋白含量隨脅迫溫度和脅迫時(shí)間表現(xiàn)顯著差異，表明低溫誘導(dǎo)了黃姑魚(yú)Hsp70蛋白的表達(dá)。在實(shí)驗(yàn)中，黃姑魚(yú)受到低溫脅迫后肌肉中Hsp70含量在6 h內(nèi)迅速升高，其他魚(yú)類如金槍魚(yú)、羅非魚(yú)、大西洋鮭（Salmo salar）等在受到冷刺激后其體內(nèi)Hsp70蛋白表達(dá)量有所升高（Takle et al，2005；Mladineo et al，2009；王美垚，2009），這可能與魚(yú)體受到刺激后產(chǎn)生誘導(dǎo)Hsp70蛋白合成以提高機(jī)體耐受性有關(guān)，是魚(yú)體對(duì)外界環(huán)境進(jìn)行自主適應(yīng)的生理表現(xiàn)。隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，14℃組和10℃組能夠降至18℃組水平，表明在魚(yú)體內(nèi)受到低溫刺激后建立新的平衡；但是8℃組卻沒(méi)能恢復(fù)到18℃組水平，這可能是由于黃姑魚(yú)無(wú)法建立適應(yīng)低溫環(huán)境的生理平衡，無(wú)法應(yīng)對(duì)過(guò)冷的刺激。熱休克蛋白合成的調(diào)節(jié)包括轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的調(diào)節(jié)。本研究?jī)H從蛋白水平研究Hsp70低溫應(yīng)答的表達(dá)模式，對(duì)其低溫脅迫后的基因表達(dá)模式及其調(diào)節(jié)機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究。

綜上，低溫脅迫下黃姑魚(yú)體內(nèi)SOD、CAT、Na+/-K+-ATPase的酶活力以及Hsp70含量呈現(xiàn)規(guī)律性的變化趨勢(shì)，表明上述幾種酶參與了黃姑魚(yú)低溫脅迫應(yīng)答過(guò)程，可以作為檢測(cè)其應(yīng)答低溫脅迫的標(biāo)志物。隨著低溫脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，黃姑魚(yú)體內(nèi)能夠建立適應(yīng)低溫的生理平衡，其體內(nèi)的抗氧化酶以及Na+/-K+-ATPase的酶活力和Hsp70含量能夠恢復(fù)；但在極端溫度下如8℃，由于低溫造成的損傷嚴(yán)重，Na+/-K+-ATPase的酶活力和Hsp70含量無(wú)法恢復(fù)導(dǎo)致其正常的生理活動(dòng)無(wú)法維持。

致謝：浙江海洋學(xué)院孫連蓮、平洪領(lǐng)以及浙江省海洋水產(chǎn)研究所試驗(yàn)場(chǎng)徐麒祥、馬濤等多人參與實(shí)驗(yàn)與取樣工作，在此一并致謝。

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（本文編輯：袁澤軼）

Effects of low temperature stress on activities of antioxidant enzymes，Na+/-K+-ATP enzyme and Hsp70 content of Nibea albiflora

LUO Sheng-yu1,XU Dong-dong2,LOU Bao2,CHEN Rui-yi2,ZHAN Wei2,MAO Guo-ming2
（1.ZhejiangOcean University,Zhoushan 316004,China；2.Zhejiang Province Key Lab of MaricultureandEnhancement, Marine Fishery Institute of Zhejiang Province,Zhoushan 316021,China）

In order to investigate the effects of low temperature treatment on the physiological function of juvenile Nibea albiflora,we investigated the effect of cold stress on activities of antioxidant enzymes,Na+/-K+-ATP enzyme and Hsp70 content in juvenile Nibeaalbiflora.Four treatments were set up,and 18℃was as the control and 8℃,10℃and 14℃groups were as experimental groups.We measured the activities of antioxidant enzymes,Na+K+-ATP enzymes and Hsp70 content of N.albiflora at different temperatures.The results showed that the temperature significantly influenced the SOD and CAT enzyme activities,and Na+/-K+-ATP enzyme activities and Hsp70 content of N.albiflora.The results showed that antioxidant enzyme activities increased in the beginning and then decreased under the low temperature stress,and at 72 h post-stress, antioxidant enzyme activities in low temperature treatments were at the same level as the control（P>0.05）.Na+/-K+-ATP enzyme activities in the muscles of low temperature treatments showed the trend of decreasing firstly and then rising during the process of cold temperature stress.The Na+/-K+-ATP enzyme activities of 10℃and 14℃treatments could recover and have no significant differences at 72 h post-stress compared with the 18℃treatment,but the activities of Na+/-K+-ATP enzyme in 8℃treatment remained lower at 72 h post-stress.The Hsp70 contents in different treatments were also impacted by the low temperature,and showed the trend of increasing firstly and then decreasing during the process of cold temperaturestress.Compared with the control,the Hsp70 contents of 10℃and 14℃treatments recovered and showed insignificant differences at 72 h post-stress.However，the Hsp70 contents remained higher than that of control at 72 h post-stress. Therefore，SOD，CAT，Na+/-K+-ATPase and Hsp70 were involved in the process when N.albiflora was responding to low temperature stress，and they could be the markers corresponding to cold stress in N.albiflora.

low temperature stress；Nibea albiflora；superoxide dismutase enzyme；catalase enzyme；Na+/-K+-ATP enzyme；heat shock protein 70

P735

A

1001-6932（2017）02-0189-06

10.11840/j.issn.1001-6392.2017.02.010

2015-12-31；

2016-04-06

國(guó)家自然科學(xué)基金（41476127）；浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012C12907-8；2015F10001）。

羅勝玉（1990-），男，碩士研究生，主要從事水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種研究。電子郵箱：548559704@qq.com。

徐冬冬，教授級(jí)高工。電子郵箱：xudong0580@163.com；樓寶，研究員。電子郵箱：loubao6577@163.com。