姜流+劉斌+王瑞+謝志雄

摘要：為了研究假單胞菌HYS菌株及其上清液對(duì)油菜種子發(fā)芽的作用，采用LB培養(yǎng)假單胞菌HYS菌株，分別用水（CK）、LB和HYS菌液浸種油菜種子或在油菜發(fā)芽過程中分別添加這3種液體。結(jié)果表明，HYS菌液浸種不影響油菜種子最終的露白和發(fā)芽，但顯著抑制油菜種子的露白和發(fā)芽進(jìn)程；在油菜發(fā)芽過程中添加HYS菌液也會(huì)抑制油菜種子的露白進(jìn)程，同時(shí)還抑制油菜種子的發(fā)芽和芽苗生長(zhǎng)，而LB抑制油菜根的生長(zhǎng)。油菜在發(fā)芽過程中，頭1～2 d感染HYS菌株則顯著抑制油菜種子的發(fā)芽，且感染時(shí)間越早其抑制效果越強(qiáng)，連續(xù)感染HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽和芽苗生長(zhǎng)的抑制作用更強(qiáng)，且這種抑制作用主要在發(fā)芽的頭1～3 d發(fā)揮作用。將HYS菌液離心過濾除菌，用水倍比稀釋LB和上清液后培養(yǎng)油菜種子，發(fā)現(xiàn)上清液經(jīng)100和1 000倍稀釋后促進(jìn)油菜種子的發(fā)芽。上述結(jié)果表明假單胞菌HYS菌株在油菜種子發(fā)芽和早期生長(zhǎng)過程中不適宜用其進(jìn)行生物防治，但適當(dāng)稀釋HYS上清液可促進(jìn)油菜種子發(fā)芽和生長(zhǎng)。

關(guān)鍵詞：假單胞菌（Pseudomonas sp.）；HYS菌株；油菜（Brassica napus L.）；發(fā)芽

中圖分類號(hào)：S565.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）07-1232-06

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.07.009

Effects of Pseudomonas sp. HYS on the Germination of Rapeseed

JIANG Liu1，2，LIU Bin1，WANG Rui1，XIE Zhi-xiong2

（1.No.1 Middle School Affiliated，Central China Normal University，Wuhan 430223，China；

2.College of Life Sciences，Wuhan University，Wuhan 430072，China）

Abstract： In order to study the effect of Pseudomonas sp. HYS on the germination of rapeseed，HYS bacteria were cultured in LB medium， and the rape seeds were soaked with water（control）， LB， and HYS culture liquid， respectively. The results showed that soaking seeds with HYS strain did not affect the split number and the number of shoots at last，but inhibited the splitting and shooting progress of rapeseed. HYS strain inhibited the splitting progress of rapeseed，the rape germination and the growth of rape shoot when the rapeseeds were contaminated with HYS strain during germination. LB inhibited the growth of rape root. HYS strain inhibited the rape germination when the rapeseeds were contaminated with HYS strain during germination of 1～2 d，earlier contamination enhanced the inhibition effect；continuous contamination reinforced the inhibition effect. However，the inhibition effect of HYS strain occurred only during 1～3 days of rape germination. Rape seeds were cultivated by diluted LB and supernatant of HYS bacteria liquid that was treated with centrifugal filter，the results showed that 100 times or 1 000 times diluents of HYS supernatant did not affect the split number of rapeseed，but accelerated rape germination and was beneficial to the growth of rape shoot. The results indicated that the Pseudomonas sp. HYS should not be used during the germination and early stage of growth in rape， however， diluted supernatant of HYS culture liquid could be used to accelerate the rape germination and promote the growth of rape shoot.

Key words： Pseudomonas sp.； HYS strain； rapeseed （Brassica napus L.）； germination

假單胞菌HYS是由武漢大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室從東湖水域中篩選出的一株高產(chǎn)鐵載體菌[1-3]，在相同培養(yǎng)條件下，其鐵載體產(chǎn)量是其他假單胞菌的5倍[1，4，5]。鐵是微生物所必需的元素，在環(huán)境中的溶解度低，假單胞菌的鐵載體可結(jié)合環(huán)境中微量的游離鐵離子，通過膜轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞，滿足其對(duì)鐵的需求[5]，假單胞菌的此生理過程可抑制不分泌或分泌低親和性鐵載體菌的生長(zhǎng)[6，7]，因此HYS菌株的鐵載體使其具備生物防治的前景。

HYS菌株的基因組測(cè)序結(jié)果表明該菌株不存在對(duì)植物致病的分泌系統(tǒng)，其基因組與假單胞菌P. putida KT2440基因組相近[8]，而后者可以適應(yīng)土壤、水和植物相關(guān)環(huán)境[9]，因此HYS菌株具有適應(yīng)植物相關(guān)環(huán)境的能力。HYS菌株的基因組還含編碼氫氰酸和胞外蛋白酶AprA的基因，這兩段序列的蛋白產(chǎn)物在假單胞菌CHA0中發(fā)揮殺死秀麗隱桿線蟲和根結(jié)線蟲的作用[8]。用假單胞菌HYS菌株喂養(yǎng)秀麗隱桿線蟲，發(fā)現(xiàn)該菌株可以殺死秀麗隱桿線蟲的胚胎和成蟲[8]。

總之，菌株HYS具高效吸收鐵元素的體系，具有殺死線蟲的基因簇，能殺死秀麗隱桿線蟲，具有適應(yīng)植物相關(guān)環(huán)境的能力，因此具有對(duì)植物寄生性線蟲進(jìn)行生物防治的潛能。本研究以油菜為研究對(duì)象，研究HYS菌株是否影響油菜的發(fā)芽、生長(zhǎng)，為利用HYS菌株進(jìn)行植物的生物防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用試劑購(gòu)自武漢迪躍創(chuàng)新生物科技有限公司，假單胞菌HYS菌株由武漢大學(xué)微生物學(xué)系保存，華油雜62油菜種子由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)油菜工程中心惠贈(zèng)。

1.2 HYS菌株上清液

將HYS菌液按1∶100（V/V）加入LB培養(yǎng)液，在30 ℃、220 r/min的條件下培養(yǎng)14 h，菌液內(nèi)HYS菌的濃度約為5.0×109 CFU/mL；菌液在4 ℃、12 000 r/min離心5 min，上清液用0.22 μm濾膜過濾除菌。

1.3 假單胞菌HYS菌株浸種對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響

按水（CK）浸種、LB浸種、菌液浸種分組，每組3個(gè)重復(fù)；用培養(yǎng)皿濾紙法[10]進(jìn)行油菜種子的發(fā)芽試驗(yàn)。具體過程如下：選擇0.005 g且子粒飽滿的油菜種子[11，12]，每20粒種子放入1.5 mL離心管，標(biāo)記離心管，分別加入300 μL水、LB或菌液浸種12 h，去除浸種液，用蒸餾水沖洗3遍。取直徑9 cm培養(yǎng)皿，內(nèi)墊4層濾紙，加4 mL滅菌水，按標(biāo)記播20粒種子，再?gòu)呐囵B(yǎng)皿邊緣加1 mL水。室內(nèi)空調(diào)設(shè)置27 ℃發(fā)芽，每天補(bǔ)充相同體積的水，記錄露白數(shù)和發(fā)芽數(shù)，104 h后測(cè)定芽高和根長(zhǎng)。

1.4 假單胞菌HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響

按水（CK）、LB和HYS菌液分組，每組3個(gè)重復(fù)。每培養(yǎng)皿播20粒種子，并在培養(yǎng)皿內(nèi)均勻加入1 mL水、LB或HYS菌液，之后每天早上分別在各組加入1 mL水、LB或HYS菌液，補(bǔ)充相同體積的水。記錄露白數(shù)和發(fā)芽數(shù)，104 h后測(cè)定芽高和根長(zhǎng)。

1.5 不同時(shí)間感染HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響

按照加菌液的時(shí)間分為10組，分別為對(duì)照（CK，加水）、第四天加菌液（B1）、第三天加菌液（B2）、第二天加菌液（B3）、第一天加菌液（B4）、頭1～4 d加菌液（B5）、頭1～3 d加菌液（B6）、頭1～2 d加菌液（B7）、2～4 d加菌液（B8）和3～4 d加菌液（B9）組，除加菌液時(shí)間外，其余時(shí)間加水，每組3個(gè)重復(fù)。每培養(yǎng)皿播20粒種子，在培養(yǎng)皿內(nèi)均勻加入1 mL水或菌液，之后每天試驗(yàn)組分別在各組中加入1 mL水或菌液，水較少時(shí)補(bǔ)充相同體積的水。記錄露白數(shù)和發(fā)芽數(shù)，104 h后測(cè)定芽高和根長(zhǎng)。

1.6 菌液上清對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響

在上述油菜種子發(fā)芽過程中，發(fā)現(xiàn)用含HYS的菌液處理影響油菜種子發(fā)芽，菌液含HYS、LB和HYS分泌物，為區(qū)分這3種成分對(duì)油菜種子發(fā)芽的作用，設(shè)計(jì)試驗(yàn)檢測(cè)HYS分泌物的作用效果。用LB培養(yǎng)HYS菌株，12 000 r/min離心，上清液過濾除菌，用水按10、100、1 000和10 000倍稀釋LB和上清液，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。每培養(yǎng)皿播20粒種子，在培養(yǎng)皿內(nèi)均勻加入1 mL水（CK）、LB、上清液、倍比稀釋的LB和上清液，之后每天在各組加入1 mL相同液體，補(bǔ)充相同體積的水。記錄露白數(shù)和發(fā)芽數(shù)，104 h后測(cè)定芽高和根長(zhǎng)。

1.7 性狀測(cè)定

在發(fā)芽8 h后每2 h記錄每個(gè)培養(yǎng)皿的露白數(shù)， 油菜種皮裂開露出白色內(nèi)容物即判定為露白。待發(fā)芽后每4 h記錄每個(gè)培養(yǎng)皿的發(fā)芽數(shù)，油菜兩片子葉展開即判定為發(fā)芽。

1.8 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)用Excel 2007、SAS 8.1軟件進(jìn)行分析，差異顯著性水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 假單胞菌HYS菌液浸種對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響

2.1.1 假單胞菌HYS菌液浸種對(duì)油菜種子露白的影響 從表1可以看出，水、LB和HYS菌液浸種處理組最后的露白數(shù)沒有差異，但發(fā)芽16 h和20 h時(shí)，水、LB浸種組露白數(shù)顯著高于HYS菌液浸種組，說(shuō)明HYS菌液浸種不影響油菜種子最后的露白數(shù)，但HYS菌株產(chǎn)生的某種物質(zhì)會(huì)在發(fā)芽過程的特定時(shí)期顯著抑制油菜種子的露白，即浸種液中的HYS菌株顯著抑制油菜種子的露白進(jìn)程。

2.1.2 假單胞菌HYS菌液浸種對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響 從表2可以看出，水、LB和HYS菌液浸種處理組最后的發(fā)芽數(shù)沒有顯著差異，但在發(fā)芽88 h時(shí)，HYS菌液浸種組的發(fā)芽數(shù)顯著低于水、LB浸種組，說(shuō)明HYS菌液浸種不影響油菜種子最終的發(fā)芽數(shù)，但在發(fā)芽過程的特定時(shí)期顯著抑制油菜種子的發(fā)芽，即浸種液中的HYS菌株顯著抑制油菜種子的發(fā)芽進(jìn)程。

2.1.3 假單胞菌HYS菌液浸種對(duì)油菜幼苗生長(zhǎng)的影響 水、LB和HYS菌液浸種組的油菜芽高和根長(zhǎng)沒有顯著差異，說(shuō)明浸種液中的HYS菌株不影響油菜種子發(fā)芽的芽高和根長(zhǎng)。

2.2 假單胞菌HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響

2.2.1 假單胞菌HYS菌株對(duì)油菜種子露白的影響 從表3可以看出，水、LB和HYS菌液處理組最后的露白數(shù)都沒有差異，但在發(fā)芽12～16 h，LB處理組露白數(shù)較水處理組顯著降低，在發(fā)芽12～18 h，HYS菌液組露白數(shù)顯著低于水處理組，說(shuō)明LB和假單胞菌HYS菌株會(huì)在油菜種子發(fā)芽的特定時(shí)期抑制油菜種子的露白。在發(fā)芽16 h時(shí)，水處理組露白數(shù)最高，顯著高于LB處理組，而LB處理組的露白數(shù)又顯著高于HYS菌液組，說(shuō)明在油菜種子發(fā)芽的特定時(shí)期，含假單胞菌HYS菌株的菌液抑制油菜種子的露白，且這種抑制作用不完全是LB的作用造成的，假單胞菌HYS菌株也發(fā)揮了重要作用，即假單胞菌HYS菌株顯著抑制油菜種子的露白進(jìn)程。

2.2.2 假單胞菌HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響 從圖1可以看出，在整個(gè)發(fā)芽期間，水處理組發(fā)芽數(shù)顯著高于LB和HYS菌液處理組，說(shuō)明LB抑制油菜種子的發(fā)芽。在油菜種子發(fā)芽80 h時(shí)，水處理組發(fā)芽數(shù)最高，顯著高于LB處理組，而LB處理組的發(fā)芽數(shù)又顯著高于HYS菌液組，說(shuō)明在油菜種子發(fā)芽的特定時(shí)期，含HYS菌株的菌液抑制油菜種子的發(fā)芽，且這種抑制作用不完全是LB的作用造成的，HYS菌株也發(fā)揮了重要作用。這些結(jié)果說(shuō)明HYS菌株抑制油菜種子的發(fā)芽，且這種抑制作用可能是HYS菌株增殖過程中產(chǎn)生的某種物質(zhì)發(fā)揮了重要作用。

2.2.3 假單胞菌HYS菌株對(duì)油菜幼苗生長(zhǎng)的影響 從圖2可以看出，油菜發(fā)芽后的芽高由高到低依次為水處理組、LB處理組和HYS菌液組，說(shuō)明HYS菌液抑制油菜芽的生長(zhǎng)，且這種抑制作用不完全是LB造成的，HYS菌株在此過程中發(fā)揮了重要的抑制作用。水處理組的根長(zhǎng)顯著高于LB處理組和HYS菌液組，且后兩組的根長(zhǎng)差異不明顯，說(shuō)明LB抑制油菜根的生長(zhǎng)，假單胞菌HYS菌株可能對(duì)油菜的根沒有明顯作用。

2.3 不同時(shí)間感染假單胞菌HYS菌株對(duì)油菜發(fā)芽的影響

由于HYS菌株抑制油菜種子的露白進(jìn)程，也抑制油菜種子的發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)，因此以水處理為對(duì)照，在油菜種子發(fā)芽過程的不同時(shí)期感染假單胞菌HYS菌株，觀察HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響，希望能找出HYS菌株最易影響油菜種子發(fā)芽的時(shí)間點(diǎn)。在本研究發(fā)芽環(huán)境溫度條件下，油菜種子露白只需24 h，因此，本部分試驗(yàn)的水處理組與HYS菌液處理組油菜種子露白結(jié)果與“2.2”節(jié)假單胞菌HYS菌液對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響相同，故此處不再比較HYS菌液組與對(duì)照組的露白數(shù)。

2.3.1 不同時(shí)間感染假單胞菌HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響 不同時(shí)間感染HYS菌株的油菜種子發(fā)芽數(shù)見表4。從表4可以看出，如果在整個(gè)發(fā)芽的4 d時(shí)間內(nèi)僅1 d時(shí)間感染假單胞菌HYS菌株，則在發(fā)芽的88～96 h期間，各處理組的發(fā)芽數(shù)沒有顯著差異，但第二天加菌液組發(fā)芽數(shù)有降低的趨勢(shì)，第一天加菌液組發(fā)芽數(shù)則更低。在發(fā)芽80 h時(shí)，水處理組、第四天加菌液組和第三天加菌液組發(fā)芽數(shù)沒有差異，而這3組發(fā)芽數(shù)顯著高于第二天加菌液組，第二天加菌液組的發(fā)芽數(shù)又顯著高于第一天加菌液組，這說(shuō)明在油菜種子的發(fā)芽過程中，頭1～2 d感染HYS菌株都會(huì)顯著抑制油菜種子的發(fā)芽，而且感染時(shí)間越早對(duì)油菜種子發(fā)芽的抑制效果越強(qiáng)。

如果在整個(gè)發(fā)芽的4 d時(shí)間內(nèi)連續(xù)數(shù)天感染假單胞菌HYS菌株，則油菜種子發(fā)芽數(shù)由低到高依次為頭1～4 d加菌液組、頭1～3 d加菌液組、頭1～2 d加菌液組、2～4 d加菌液組、3～4 d加菌液組，且在發(fā)芽80 h時(shí)，除頭1～3 d加菌液組和頭1～2 d加菌液組間外，其他組連續(xù)感染HYS菌株的油菜種子發(fā)芽數(shù)的差異都達(dá)顯著水平，但2～4 d加菌液組和3～4 d加菌液組最終的發(fā)芽數(shù)與水處理組沒有明顯差異，這也說(shuō)明第一天感染HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽的抑制作用最強(qiáng)。在發(fā)芽的80～96 h，頭1～2 d加菌液組、頭1～3 d加菌液組和頭1～4 d加菌液組的發(fā)芽數(shù)都顯著低于僅第一天加菌液組，說(shuō)明連續(xù)感染HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽的抑制作用更強(qiáng)。

2.3.2 不同時(shí)間感染假單胞菌HYS菌株對(duì)油菜幼苗生長(zhǎng)的影響 從表5可以看出，全部加HYS菌組的油菜根長(zhǎng)都顯著短于水處理對(duì)照組，這進(jìn)一步說(shuō)明LB抑制油菜根的生長(zhǎng)。從B1組到B4組的根長(zhǎng)數(shù)據(jù)可以看出，如果在整個(gè)發(fā)芽的4 d時(shí)間內(nèi)僅1 d時(shí)間接觸LB，則油菜根長(zhǎng)由長(zhǎng)到短依次為水處理組、第四天加菌液組、第三天加菌液組、第二天和第一天加菌液組，且各組間差異顯著，說(shuō)明LB抑制油菜根的生長(zhǎng)，且在油菜發(fā)芽的早期這種抑制作用更強(qiáng)。從B5組到B9組的根長(zhǎng)數(shù)據(jù)可以看出，如果在整個(gè)發(fā)芽的4 d時(shí)間內(nèi)連續(xù)數(shù)天添加假胞菌HYS菌液，則油菜根長(zhǎng)比僅1 d添加菌液組更短，說(shuō)明油菜連續(xù)接觸LB更不利于油菜根的生長(zhǎng)，且連續(xù)接觸LB的時(shí)間越長(zhǎng)對(duì)油菜根生長(zhǎng)的抑制作用越強(qiáng)。

從B0到B4組的芽高數(shù)據(jù)可以看出，第一天加菌液組與水處理對(duì)照組的芽高相同，但第二天加菌液組、第三天加菌液組、第四天加菌液組和3～4 d加菌液組芽高顯著高于水處理對(duì)照組，說(shuō)明僅1 d接觸HYS菌株不會(huì)影響油菜芽的生長(zhǎng)，相反，由于菌液含LB，LB的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可能還可促進(jìn)油菜芽的生長(zhǎng)。從B5到B8的芽高數(shù)據(jù)可以看出，頭1～4 d加菌液組、頭1～2 d加菌液組、頭1～3 d加菌液組的芽高都顯著低于水處理對(duì)照組，說(shuō)明連續(xù)添加假單胞菌HYS菌株抑制油菜芽的生長(zhǎng)，且這種抑制作用主要在發(fā)芽的頭1～3 d發(fā)揮作用。

2.4 假單胞菌HYS菌液上清液對(duì)油菜發(fā)芽的影響

2.4.1 假單胞菌HYS菌液上清液100倍稀釋液對(duì)油菜發(fā)芽的影響 由表6可知，試驗(yàn)開始后12～18 h時(shí)，上清液100倍稀釋組露白數(shù)與水處理組間無(wú)顯著差異，兩者都顯著高于LB 100倍稀釋液處理組，20 h時(shí)，3組處理的露白數(shù)沒有顯著差異，說(shuō)明HYS菌液上清液經(jīng)100倍稀釋處理不影響油菜種子的露白，但LB經(jīng)100倍稀釋后卻抑制油菜種子的露白進(jìn)程。

由表7可知，發(fā)芽64～82 h，上清液100倍稀釋組的發(fā)芽數(shù)高于水處理組，在發(fā)芽72 h，上清液100倍稀釋液組的發(fā)芽數(shù)顯著高于LB 100倍稀釋液組，后者的發(fā)芽數(shù)又顯著高于水處理組，在發(fā)芽的86 h之后，3組的發(fā)芽數(shù)沒有顯著差異，說(shuō)明HYS菌株的上清液經(jīng)100倍稀釋可促進(jìn)油菜種子的發(fā)芽進(jìn)程。

經(jīng)100倍稀釋處理的LB組和上清液組芽苗長(zhǎng)度大于水處理組，說(shuō)明100倍稀釋的LB有助于油菜苗生長(zhǎng)。

2.4.2 假單胞菌HYS菌液上清液1 000倍稀釋液對(duì)油菜發(fā)芽的影響 由表8可以看出，12～16 h時(shí)，上清液1 000倍稀釋液組露白數(shù)與水處理組差異不顯著，兩組露白數(shù)顯著高于LB 1 000倍稀釋液組；16 h后，3組的露白數(shù)沒有差異，這說(shuō)明HYS菌液上清液經(jīng)1 000倍稀釋處理不影響油菜種子的露白，但稀釋1 000倍的LB卻抑制油菜種子的露白進(jìn)程。

由表9可以看出，在發(fā)芽60～72 h，上清液1 000倍稀釋液組發(fā)芽數(shù)高于LB 1 000倍稀釋液組，后者發(fā)芽數(shù)又高于水處理組，72 h后各處理組發(fā)芽數(shù)沒有顯著差異，這說(shuō)明HYS的上清液經(jīng)1 000倍稀釋可促進(jìn)油菜種子的發(fā)芽進(jìn)程。

3 討論

3.1 假單胞菌HYS菌株浸種對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響

浸種指用清水或各種溶液浸泡植物種子，可以促進(jìn)種子早發(fā)芽，若使用化學(xué)藥劑或生物菌劑還可抑制或殺死種子的有害寄生菌，從而達(dá)到生物防治的目的。種子的萌發(fā)是一個(gè)從吸水膨脹到萌動(dòng)，再到發(fā)芽的呼吸代謝過程[13]。本研究發(fā)現(xiàn)油菜種子浸種后有明顯的吸脹現(xiàn)象，所以用HYS菌株對(duì)油菜種子進(jìn)行浸種處理，則水分和菌株代謝產(chǎn)物可能透過種皮作用于油菜種子而影響其發(fā)芽。本研究結(jié)果表明HYS菌株浸種不影響油菜種子最后的露白和發(fā)芽，也不影響油菜的芽和根的生長(zhǎng)，但顯著抑制油菜種子的露白和發(fā)芽進(jìn)程。說(shuō)明HYS菌株的代謝產(chǎn)物可能通過浸種方式透過種皮，從而影響油菜種子的露白和發(fā)芽進(jìn)程。

3.2 假單胞菌HYS菌株對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響

假單胞菌廣泛存在于土壤、水、動(dòng)植物和人體內(nèi)，在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域內(nèi)，有的假單胞菌是植物病原菌[14]，有的則有益于植物生長(zhǎng)[15]，也有的通過拮抗或殺死病原菌發(fā)揮對(duì)植物疾病進(jìn)行生物防治的作用[16]。本試驗(yàn)用LB培養(yǎng)HYS菌株，在油菜發(fā)芽過程中添加菌液，發(fā)現(xiàn)菌液嚴(yán)重抑制油菜根的生長(zhǎng)，且這種抑制作用是由LB引起的。

本試驗(yàn)在油菜種子發(fā)芽過程中用HYS菌株連續(xù)處理，發(fā)現(xiàn)油菜種子最后都會(huì)全部露白，但HYS菌株顯著抑制油菜種子的露白進(jìn)程，也顯著抑制油菜種子的發(fā)芽和發(fā)芽后的芽高，說(shuō)明油菜種子在發(fā)芽過程中可能受HYS菌株代謝產(chǎn)物的影響，且其對(duì)發(fā)芽的影響作用比用HYS菌株浸種處理的效果更明顯。

本試驗(yàn)在油菜種子發(fā)芽過程中，在不同時(shí)間點(diǎn)用HYS菌株進(jìn)行處理，發(fā)現(xiàn)在發(fā)芽的頭1～2 d用HYS菌株處理則顯著抑制油菜種子的露白和發(fā)芽，而且處理時(shí)間越早，對(duì)油菜種子發(fā)芽的抑制效果越嚴(yán)重，若連續(xù)用HYS菌株處理則抑制效果還要更強(qiáng)。若在發(fā)芽過程中只在某一天接觸HYS菌株，則HYS菌株不影響油菜芽的生長(zhǎng)，但2 d及以上接觸HYS菌株，則會(huì)影響油菜芽的生長(zhǎng)，而且處理時(shí)間越早越容易抑制油菜芽的生長(zhǎng)。

這些結(jié)果說(shuō)明油菜種子在發(fā)芽過程中如直接接觸HYS菌株，則HYS菌株直接或通過其代謝產(chǎn)物抑制油菜種子的露白進(jìn)程，但若僅接觸1 d，則不影響油菜芽的生長(zhǎng)。HYS菌株也抑制油菜種子的發(fā)芽、發(fā)芽后的芽高，且接觸時(shí)間越早或接觸的時(shí)間越長(zhǎng)，對(duì)油菜芽生長(zhǎng)的抑制作用越強(qiáng)烈。

3.3 假單胞菌HYS菌液上清稀釋液對(duì)油菜種子發(fā)芽的影響

在油菜種子發(fā)芽過程中，發(fā)現(xiàn)用含HYS的菌液處理影響油菜種子發(fā)芽，菌液含HYS菌株、LB和HYS分泌物，且LB嚴(yán)重影響油菜根的生長(zhǎng)，推測(cè)LB的滲透壓太大灼傷油菜根，但LB的營(yíng)養(yǎng)應(yīng)該可以為油菜生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，故分離HYS上清液，上清液內(nèi)含LB和HYS分泌的成分，為了排除LB對(duì)油菜發(fā)芽的影響，采用相同倍比稀釋的LB為對(duì)照，即將LB和上清液稀釋10～10 000倍，進(jìn)而獲得HYS分泌物對(duì)油菜發(fā)芽的直接作用。結(jié)果表明，在排除LB灼傷油菜根和為油菜發(fā)芽提供營(yíng)養(yǎng)的作用后，100倍和1 000倍稀釋上清液不影響油菜種子的露白，且促進(jìn)油菜種子的發(fā)芽進(jìn)程，說(shuō)明上清液內(nèi)HYS的分泌物能促進(jìn)油菜種子的發(fā)芽進(jìn)程。

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