廖林波+梁俊卿+農(nóng)峰+吳昭元+唐毓金+謝克恭+盧賢哲+藍(lán)常貢

【摘要】目的檢測(cè)缺血性股骨頭壞死患者骨形態(tài)形成拮抗蛋白1（GREM1）的表達(dá)水平，以研究其臨床意義。

方法選擇2016年4～10月收治的58例缺血性股骨頭壞死患者作為觀察組，同期選擇在體檢中心進(jìn)行健康體檢的76名健康者作為觀察組，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)兩組血清GREM1的表達(dá)含量，同時(shí)應(yīng)用常規(guī)方法對(duì)C反應(yīng)蛋白（CRP）進(jìn)行檢測(cè)，比較兩組間GREM1、CRP水平的表達(dá)差異，分析觀察組GREM1水平與CRP水平之間的相關(guān)性。

結(jié)果觀察組血清GREM1、CRP的表達(dá)水平均較對(duì)照組顯著增高（P<0.01）；在觀察組中，臨床Ficat Ⅲ/Ⅳ期患者血清GREM1的水平較Ficat Ⅰ/Ⅱ期患者升高（P<0.001）；經(jīng)Pearson線性相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，觀察組患者血清GREM1水平與CRP水平之間的相關(guān)性不顯著（r=-0.118，P>0.05）。

結(jié)論缺血性股骨頭壞死患者血清GREM1的水平顯著升高，提示其可能參與缺血性股骨頭壞死的發(fā)生與發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】股骨頭壞死；骨形態(tài)形成拮抗蛋白1；C反應(yīng)蛋白

中圖分類(lèi)號(hào)：R681.8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.02.005

【Abstract】ObjectiveTo detect the expression level of serum GREM1 in patients with ischemic necrosis of femoral head （INFH），so as to explore its clinical significance.

Methods58 cases of INFH admitted to hospital from April，2016 to October，2016 were selected as observation group，and 76 healthy subjects who underwent physical examination in physical examination center in the same period were chosen as control group.And then，the serum levels of GREM1 of the two groups were measured by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA），and C reactive protein（CRP） was detected by routine method.In addition，difference of the expressions of GREM1 and CRP levels between the two groups was compared，and the linear correlation between them in the observation group was analyzed.

ResultsThe levels of GREM1 and CRP in the observation group improved more significantly than those of the control group（P<0.01）.In the observation group，the level of serum GREM1 in patients with stage Ficat Ⅲ/Ⅳ was higher than that in patients with stage Ficat Ⅰ/Ⅱ（P<0.001）.Pearson linear correlation analysis showed that there was no significant correlation between serum GREM1 level and CRP level in the observation group（r=-0.118，P>0.05）.

ConclusionThe level of serum GREM1 in patients with INFH increases，which suggests that it may involve in the occurrence and development of INFH.

【Key words】INFH；GREM1；CRP

缺血性股骨頭壞死（Ischemic necrosis of the femoral head，INFH）是一種以單側(cè)或雙側(cè)髖關(guān)節(jié)疼痛伴活動(dòng)受限為主要臨床表現(xiàn)的常見(jiàn)性骨科疾病。由于其給患者帶來(lái)極大的痛苦，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，現(xiàn)已成為嚴(yán)重威脅公共健康的骨關(guān)節(jié)疾病[1]。然而目前INFH的確切發(fā)病機(jī)制尚未闡明。骨形態(tài)形成拮抗蛋白1（GREM1）是一個(gè)由184個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的分子量為27 kD的分泌型糖蛋白，屬于骨形態(tài)形成蛋白（BMP）拮抗劑家族的重要成員之一[2]。GREM1分子在細(xì)胞和組織的分化及生長(zhǎng)過(guò)程中起著重要的作用，參與多種疾病的發(fā)生[3]。最近的研究表明[4]，GREM1可調(diào)節(jié)骨組織和骨細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育，提示其可能參與骨關(guān)節(jié)疾病的發(fā)生與發(fā)展。因此，本研究通過(guò)雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對(duì)76名健康者和58例INFH患者血清GREM1的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)結(jié)合C反應(yīng)蛋白（Creactive protein，CRP）進(jìn)行線性相關(guān)分析，旨在初步探討GREM1是否參與缺血性股骨頭壞死的發(fā)生與發(fā)展。

1資料與方法

1.1臨床資料

選擇2016年4～10月在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院治療的58例缺血性股骨頭壞死患者作為觀察組，年齡在30～61歲之間，平均（46.82±9.04）歲，其中，38例為男性，20例為女性，病程9～19個(gè)月，平均（12.71±2.65）個(gè)月，左側(cè)為23例，右側(cè)為27例，雙側(cè)為8例?；颊呔胁煌潭鹊模▎蝹?cè)或雙側(cè)）髖關(guān)節(jié)疼痛伴活動(dòng)受限等臨床表現(xiàn)。缺血性股骨頭壞死的診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)Mont等[5]提出的理論，其分期參照國(guó)際骨循環(huán)學(xué)會(huì)提出的標(biāo)準(zhǔn)[6]。同時(shí)，選擇同期在本院體檢中心進(jìn)行健康體檢的76名健康者作為對(duì)照組，其中，35名為男性，41名為女性，年齡在31～65歲之間，平均（45.57±9.21）歲。入選者無(wú)家族遺傳病史，影像學(xué)檢查及臨床各項(xiàng)指標(biāo)均未見(jiàn)異常。所有受試者均無(wú)血緣關(guān)系。本研究經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的審核及批準(zhǔn)，所有受試者均知情并簽署同意書(shū)。

1.2病例的排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）合并有惡性腫瘤疾?。ㄈ绶伟?、前列腺癌及甲狀腺癌）；（2）由骨腫瘤或炎癥性病變（如強(qiáng)直性脊柱炎和骨性關(guān)節(jié)炎）等原因?qū)е碌墓晒穷^壞死；（3）合并有遺傳性疾?。ㄈ绲刂泻Ｘ氀┗騻魅拘约膊。ㄈ缃Y(jié)核病和艾滋病）；（4）合并有影響機(jī)體免疫狀態(tài)的疾病（如創(chuàng)傷或糖尿病）；（5）診斷不明確。

1.3研究方法

1.3.1標(biāo)本收集

于清晨用抗凝管抽取受試者空腹肘正中靜脈血3 ml，靜置30 min之后，2000 r/min離心1 min，血清分離之后，分裝置于-80℃冰箱待檢測(cè)GREM1水平和CRP水平。

1.3.2血清GREM1水平的檢測(cè)

人骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白1（GREM1）ELISA試劑盒由上海希美化學(xué)有限公司提供。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.3CRP水平的檢測(cè)

由本院檢驗(yàn)科的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員使用日本7600全自動(dòng)生化分析儀對(duì)CRP進(jìn)行檢測(cè)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（〖AKx-D〗±s）表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性運(yùn)用Pearson相關(guān)分析法， 檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1兩組血清GREM1、CRP的表達(dá)水平

觀察組血清GREM1、CRP的表達(dá)水平均較對(duì)照組顯著增高（P<0.01）。見(jiàn)表1。

2.2觀察組不同分期患者血清GREM1的表達(dá)水平

在觀察組中，臨床Ficat Ⅲ/Ⅳ期患者血清GREM1的水平較Ficat Ⅰ/Ⅱ期患者升高（P<0.01）。見(jiàn)表2。

2.3觀察組患者血清GREM1水平與CRP水平的相關(guān)性

經(jīng)Pearson線性相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，觀察組患者血清GREM1水平與CRP水平之間的相關(guān)性不顯著（r=-0.118，P>0.05）。

3討論

INFH是一種常見(jiàn)的骨關(guān)節(jié)疾病，其發(fā)病機(jī)制受多種因素的共同調(diào)節(jié)，過(guò)程復(fù)雜。在INFH的早期階段，患者髖關(guān)節(jié)會(huì)出現(xiàn)不同程度的疼痛，隨著病情的進(jìn)一步發(fā)展，骨組織和骨細(xì)胞發(fā)生壞死更加嚴(yán)重，進(jìn)而導(dǎo)致股骨頭塌陷，使髖關(guān)節(jié)的主被動(dòng)活動(dòng)明顯受限。因此，在晚期階段，INFH患者髖關(guān)節(jié)的功能活動(dòng)逐漸喪失，使得大部分患者不得不接受人工全髖關(guān)節(jié)置換手術(shù)，這給患者帶來(lái)極大的痛苦和創(chuàng)傷，亟待解決。

雖然INFH的致病因素眾多，且尚未發(fā)現(xiàn)有效的預(yù)防措施，但學(xué)者們已開(kāi)展一系列的相關(guān)研究，均是致力于該疾病的預(yù)防、臨床診斷及病情監(jiān)測(cè)。魯會(huì)田等[7]在研究中發(fā)現(xiàn)，與健康對(duì)照組比較，股骨頭壞死患者血清中瘦素、膽固醇及甘油三酯等因子均呈不同程度的升高，而脂聯(lián)素水平卻降低，因而認(rèn)為瘦素、血脂及脂聯(lián)素水平與股骨頭壞死存在一定的相關(guān)性，其中血脂異?？赡苁枪晒穷^壞死的發(fā)病機(jī)制之一。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)[8]，血清PPARγ水平在股骨頭壞死患者中升高，且隨著病情程度的加重，其升高越明顯，從而初步提示其可能參與股骨頭壞死的發(fā)生。國(guó)外學(xué)者Ko等[9]在股骨頭壞死的相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)，DKK1的高表達(dá)可加速骨細(xì)胞的凋亡，提示其可能參與股骨頭壞死的演變過(guò)程，從而認(rèn)為以DKK1有望成為研究及治療INFH的新指標(biāo)。以上研究的相關(guān)因子提示其可能參與INFH的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程，至于其他因子是否也參與該疾病的調(diào)節(jié)過(guò)程還需進(jìn)一步探討。

作為骨組織代謝過(guò)程中的重要因子，GREM1在多種骨科疾病中呈異常表達(dá)狀態(tài)[10]。有研究發(fā)現(xiàn)[11]，GREM1可通過(guò)SHH/FGF-4信號(hào)通路來(lái)參與骨細(xì)胞的分化，提示其可能參與骨關(guān)節(jié)疾病的發(fā)生過(guò)程。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于血清GREM1水平在缺血性股骨頭壞死疾病中的研究甚少見(jiàn)。為此，本研究采用ELISA技術(shù)對(duì)76名健康者和58例INFH患者血清中GREM1水平進(jìn)行檢測(cè)，旨在初步探討GREM1在INFH發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與健康人群相比，INFH患者血清GREM1的表達(dá)水平顯著增高；在觀察組中，臨床Ficat Ⅲ/Ⅳ期患者血清中GREM1水平明顯高于Ficat Ⅰ/Ⅱ期患者。由此可見(jiàn)，在INFH的早期階段，GREM1水平已開(kāi)始升高，隨著病情的加重，其表達(dá)水平升高越明顯，進(jìn)而越容易被檢測(cè)出，從而有望成為INFH診斷、病情監(jiān)測(cè)及愈后判斷的新指標(biāo)。

同時(shí)，本研究對(duì)觀察組CRP的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與健康人群比較，INFH患者的CRP水平呈顯著升高狀態(tài)，這提示缺血性股骨頭壞死病變呈活動(dòng)性炎癥反應(yīng)。另外，本研究還分析觀察組患者血清GREM1水平與CRP水平的相關(guān)性，結(jié)果表明兩者相關(guān)不顯著。由于CRP的表達(dá)水平受多種因素共同調(diào)控，過(guò)程復(fù)雜，初步提示GREM1水平與CRP水平可能不存在交叉的調(diào)節(jié)機(jī)制，但并不能否定GREM1在缺血性股骨頭壞死發(fā)生過(guò)程中的重要作用。

綜上所述，GREM1的表達(dá)水平在INFH患者中呈明顯升高狀態(tài)，且隨著INFH嚴(yán)重程度的加重而增高，這初步提示GREM1可能在INFH的發(fā)病機(jī)制中扮演重要的角色。然而，目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于GREM1參與INFH發(fā)病的具體機(jī)制尚未明了，未來(lái)還需進(jìn)一步研究。相信，隨著對(duì)GREM1分子與INFH發(fā)病機(jī)制的深入探討，檢測(cè)GREM1水平有望成為INFH早期診斷、病情監(jiān)測(cè)及判斷預(yù)后的重要參考指標(biāo)。

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（收稿日期：2016-12-05 修回日期：2017-03-24）

（編輯：梁明佩）

基金項(xiàng)目：廣西科技攻關(guān)項(xiàng)目（桂科攻0898006）

作者簡(jiǎn)介：廖林波，男，醫(yī)學(xué)學(xué)士，在讀碩士研究生，研究方向：脊柱骨病與骨關(guān)節(jié)疾病。Email：985358040@qq.com

▲通信作者：藍(lán)常貢。Email：landlong120@sina.com